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线粒体转录因子A的研究进展: 2006年; 线粒体转录因子A是HMG蛋白家族中的成员,目前已知除了可以调控线粒体DNA的拷贝数和转录活性、参与细胞凋亡外,还可对人的寿命和疾病产生影响,如甲状腺功能减退性肌病和线粒体脑病等。近来研究还发现m tTFA也可在细胞核内发挥作用,提示核及线粒体基因表达调控的机制上存在偶联或协同作用。本文主要总结近年来关于线粒体转录因子A的研究进展,从其基因学定位和结构、蛋白质结构、基因表达调控及其主要功能做一概述,同时总结不同研究过程中提出的未知问题,并对进一步的研究方向做一展望。; 刘志锋姜勇; 关键词：线粒体转录因子线粒体转录因子A

TLR4全长及其截断体重组腺病毒的制备和功能鉴定被引量：1: 2004年; 制备脂多糖 (LPS)Toll样受体 4 (TLR4 )全长及其胞内段缺失的TLR4截断体 (ΔTLR4 )的绿色荧光蛋白重组腺病毒并鉴定其功能 .用PCR方法扩增TLR4及ΔTLR4基因片段 ,酶切后亚克隆至腺病毒穿梭质粒中 ,形成带有目的基因的穿梭载体pAdTrack TLR4和pAdTrack ΔTLR4 .用BJ5 1 83细菌同源重组法将目的基因重组于腺病毒骨架载体中 ;将重组腺病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后 ,用脂质体法转染HEK 2 93细胞进行腺病毒的包装扩增 .将重组腺病毒感染CHO K1细胞 ,采用荧光毒酶报告基因方法检测其对LPS诱导NF κB激活的影响 .酶切及测序表明 ,TLR4全长及其截断体ΔTLR4的重组腺病毒载体构建正确 .荧光素酶报告基因检测结果表明 ,TLR4全长及其截断体的重组腺病毒感染细胞对LPS诱导的反应具有不同的影响 ,Ad ΔTLR4明显抑制了LPS引起的NF κB激活 (P <0 0 5 ) ,Ad TLR4则使LPS引起的NF κB活性增强 (P <0 0 5 ) .; 宋革孙学刚秦清和邓鹏刘靖华姜勇; 关键词：腺病毒报告基因 NF-KB

人AWP1-RFP融合基因重组腺病毒的快速构建及其鉴定被引量：4: 2005年; 目的构建人的AWP1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因的重组腺病毒载体,为研究AWP1的生物功能提供工具。方法将克隆的AWP1cDNA插入高效表达RFP的载体pDsRed1-N1的多克隆位点,与RFP序列形成AWP1-RFP融合基因,将该融合基因亚克隆到穿梭载体pAdTrack-CMV和pAdShuttle-CMV中;经酶切鉴定正确后PmeI线形化,与骨架质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌BJ5183以同源重组;用lipofectAMINE将PacI线形化的同源重组腺病毒载体转染293细胞以包装腺病毒;通过同源重组病毒载体和病毒颗粒基因组的DNA测序及PCR扩增和在293细胞中的表达鉴定重组腺病毒。结果同源重组载体和病毒颗粒的DNA测序和PCR分析显示AWP1cDNA序列正确,感染293细胞获得了AWP1-RFP融合蛋白的高效表达。结论成功构建和包装了人AWP1-RFP融合基因重组腺病毒。; 曹永宽莫永炎田伏洲邓鹏秦清和邢飞跃李红乐姜勇; 关键词：红色荧光蛋白重组腺病毒绿色荧光蛋白

Toll样受体4与心血管疾病被引量：2: 2003年; Toll样受体是天然免疫系统识别病原微生物的主要受体 ,在天然免疫反应中具有重要的作用。TLR4是介导LPS信号跨膜转导的主要受体 ,对于革兰氏阴性菌的感染性炎症至关重要。由于心血管疾病的发生和发展与感染密切相关 ,近来 ,有关TLR4及其介导的信号转导在心血管疾病发病中的作用受到人们的关注。深入研究TLR4在心血管疾病中作用 ,不仅能极大地扩展我们对病原体与宿主免疫反应之间相互作用复杂性的认识 ,更能为进一步揭示心血管疾病的发病机制 ,寻求有效的防治措施提供重要的理论基础。; 黄浩刘靖华姜勇; 关键词：动脉粥样硬化病毒性心肌炎心力衰竭

TLR4全长及其截断体重组腺病毒对Rf-6A细胞骨架的影响被引量：4: 2004年; 为了研究LPS受体TLR4全长及其胞内段缺失的TLR4截断体(驻TLR4)的绿色荧光蛋白重组腺病毒对内皮细胞系Rf-6A骨架蛋白的影响,采用PCR方法扩增目的基因片段,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,用BJ5183细菌同源重组法将目的基因重组于腺病毒骨架载体,重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切线性化后,用脂质体法转染293细胞进行腺病毒的包装扩增,用重组腺病毒感染Rf-6A细胞,采用免疫荧光标记方法观察结果。免疫荧光标记结果表明Ad-驻TLR4明显抑制了LPS引起的细胞骨架F-actin的解聚与重排,Ad-TLR4则使LPS引起的F-actin应力纤维产生增强。以上结果说明TLR4全长及其截断体的重组腺病毒感染内皮细胞对LPS诱导的细胞骨架变化具有不同的影响,Ad-驻TLR4对LPS引起的内皮细胞骨架变化具有抑制作用。; 宋革孙学刚姜勇; 关键词：腺病毒细胞骨架绿色荧光蛋白骨架蛋白

Glut-4 is translocated to both caveolae and non-caveolar lipid rafts, but is partially internalized through caveolae in insulin-stimulated adipocytes被引量：6: 2007年; Caveolae 和 non-caveolar 类脂化合物椽子是膜 lipidmicrodomains 的二种类型在 adipocytes 在刺激胰岛素的葡萄糖举起起重要作用。为了在这查明他们的特定的功能，处理， caveolae 被 caveolin-1 RNAinterference 切除。在 Cav-1 RNAi adipocytes，也不刺激胰岛素的葡萄糖举起也不 Glut-4 (葡萄糖 transporter 4 ) translocation 到膜类脂化合物微领域被脱离 ofcaveolae 影响。与一个修改蔗糖密度坡度， caveolae 和 non-caveolar 类脂化合物椽子能被分开。在野类型的 3T3-L1 adipocytes， Glut-4 被发现是进 bothcaveolae 和 non-caveolar 类脂化合物椽子的 translocated。在 Cav-1 RNAi adipocytes，然而， Glut-4 在 non-caveolar 类脂化合物椽子主要是局部性的。在胰岛素的移动以后， caveolae 局部性的 Glut-4was 比 non-caveolar 类脂化合物快使内在化联系木排的 Glut-4。从质膜的成为主观 ofGlut-4 显著地在 Cav-1 RNAi adipocytes 被减少。这些结果建议那刺激胰岛素的 Glut-4 translocation 和葡萄糖举起是 caveolae-independentevents。Caveolae 玩在从在胰岛素的移动以后的质膜的 Glut-4 的成为主观的一个角色。; Taichang Yuan

RO-heparin Inhibits L-Selectin-mediated Neutrophils Adhesion to Vascular Endothelium Under Flow Conditions被引量：2: 2006年; Selectins are carbohydrate-binding cell adhesion molecules that play a major role in the initiation of inflammatory responses. Accumulaed evidence has suggested that heparin′s anti-inflammatory effects are mainly mediated by blocking L- or P-selectin-initiated cell adhesion. Recently, we have reported that periodate-oxidized, borohydride- reduced heparin(RO-heparin) can inhibit P-selectin-mediated acute inflammation. Here we further examined the effect of RO-heparin on the adhesion of L-selectin-mediated leukocytes to vascular endothelium under flow conditions in vivo and in vitro. The results show that RO-heparin with a low anticoagulant activity can effectively reduce leucocyte rolling on thioglycollate-induced rat mesenteric venules and L-selectin-metadiated neutrophil rolling on TNF-α-induced human umbilical vein endothelial cells(HUVECs) under flow conditions. Our findings suggest that the effect of RO-heparin on inflammatory responses is mainly a result of its inhibiting the interaction between P- or L-selectin and its ligands. The findings also suggest that RO-heparin may be useful in preventing inflammation diseases.; CHEN Zhi-hongXU LiBA Xue-qingZENG Xian-lu; 关键词：嗜中性粒细胞 L-选择蛋白

人GFP-AWP1融合基因载体的构建及其在293细胞中的表达被引量：2: 2005年; 目的克隆、构建绿色荧光蛋白(GFP)-AWP1(associatedwithproteinkinaseCrelatedkinase1,AWP1)表达载体,观察AWP1在293细胞中表达和定位。方法采用逆转录PCR(RT-PCR)法从人ECV304内皮细胞中扩增AWP1cDNA编码区,并将其重组于GFP表达载体pEGFP-C2中。经酶切、序列鉴定分析后,将该重组质粒通过DOTAP脂质体介导,转染293细胞。荧光显微镜观察AWP1在细胞内的表达和分布。结果GFP-AWP1融合基因表达载体经酶切鉴定和测序分析确认构建成功,并在293细胞中获得了高效表达。荧光显微镜下,在不携带外源基因的空载体pEGFP-C2转染的对照组293细胞,绿色荧光均匀分布于整个细胞中;在重组质粒pEGFP-C2/AWP1转染的293细胞,绿色荧光弥散分布于细胞质内。结论成功构建GFP-AWP1融合基因表达载体并表达于293细胞胞质中。; 曹永宽莫永炎田伏洲刘亚伟邓鹏秦清和姜勇; 关键词：绿色荧光蛋白 293细胞

P-选择素糖蛋白配体1与白细胞的起始黏附被引量：2: 2005年; P-选择素糖蛋白配体1(P-selectinglycoproteinligand1,PSGL-)1是20世纪90年代初期发现的一种具同源二聚体结构的跨膜糖蛋白,表达于几乎所有白细胞表面,是迄今为止阐述得最为详尽的选择素配体。PSGL-1是以P-选择素为亲和探针分离得到的,与P-选择素有高度的亲和性。近年来,越来越多的研究证明了PSGL-1同时也是L-选择素和E-选择素的生理配体。通过PSGL-1与选择素分子间的相互作用,白细胞在血管内皮细胞上产生滚动(即起始黏附),进而使白细胞逐步活化并稳定黏附于血管内皮。现从PSGL-1的结构、分布、表达调控、信号转导、生理病理角色、临床应用等方面进行综述。; 陈琳巴雪青; 关键词：黏附分子选择素

S100A8启动子的克隆及转录活性检测被引量：1: 2010年; 目的构建小鼠S100A8基因启动子序列的报告基因载体,通过报告基因技术检测在静息、脂多糖(LPS)、PolyI:C及NaASO2等刺激下该段启动子的转录活性。方法采用PCR从小鼠脾组织基因组DNA扩增S100A8启动子序列(-826～+468);将其克隆至pDsRed1-1载体上,重组质粒经过PCR、酶切及测序分析正确无误后转染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,荧光显微镜下观察静息、LPS、PolyI:C和NaASO2刺激下红色荧光蛋白表达。结果正确扩增出小鼠S100A8启动子片段(-826～+468);成功构建其红色荧光蛋白报告基因载体,证实该质粒转染RAW 264.7细胞后静息状态下仅可见少量而微弱的红色荧光,经LPS、PolyI:C和NaASO2刺激后,红色荧光强度和亮度明显增加。结论小鼠S100A8启动子(-826～+468)在静息状态下即具有转录活性,炎性、氧化应激刺激后S100A8表达增强;该启动子的成功克隆和其报告基因载体的构建,为进一步研究S100A8的基因表达调控机制打下了良好的基础。; 卢康荣刘爱华王娟邓鹏罗海华钟钦松钟明明姜勇; 关键词：S100A8 启动子基因

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国家重点基础研究发展计划(2002CB513000)

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