国家自然科学基金(30872696)
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
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- 腺病毒与慢病毒载体对人脂肪间充质干细胞转导效率及基因表达的差异被引量：2
- 2009年
- 目的:比较重组腺病毒、慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白对体外培养的人脂肪来源干细胞(hADSCs)的转导效率和外源基因表达差异。方法:原代分离培养hADSCs并鉴定,应用Ad5F35-EGFP及LV-EGFP以MOI=0、25、50、100、200、400、800感染hADSCs,在1、3、7、14、21天应用荧光显微镜、流式细胞仪观察检测表达EGFP细胞阳性率。MTT法检测转导对hADSCs增殖的影响。VonKossa染色、油红O染色检测体外诱导转导EGFP的hADSCs向成骨及成脂方向分化能力。结果:hADSCs细胞表面标记CD31、CD34、CD45、CD106和HLA-DR阴性,CD29、CD44、CD49d、CD105、CD166阳性。荧光显微镜观察Ad5F35-EGFP感染hADSCs后(1～7天)可见EGFP高表达,此后逐渐减弱;LV-EGFP感染hADSCs后21天,仍可见EGFP高表达。流式细胞仪检测Ad5F35-EGFP、LV-EGFP对hADSCs转导效率与MOI值呈正相关。MTT显示Ad5F35-EGFP在高MOI值(800)检测A值与对照组相比差异显著(P<0.01)。转导EGFP的hADSCs经体外诱导14天可向成骨、成脂方向分化。结论:与腺病毒相比,慢病毒能够更为安全、有效地感染体外培养hADSCs,并长期表达外源基因,是研究基因修饰hADSCs的理想载体。
- 李丹乔群王晓军钱建平
- 关键词：基因治疗腺病毒慢病毒
- 腺病毒介导外源基因经动脉转染大鼠腹壁浅动脉岛状皮瓣的研究被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨腺病毒载体介导外源基因经动脉灌注转移修饰大鼠腹壁浅动脉岛状皮瓣(Superficial inferior epigastric artery flap,SIEA)的可行性、安全性并对其转染条件作出评价。方法:本研究通过血管夹暂时夹闭形成局部封闭环境,应用腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因(Ad5-CMV-EGFP)经动脉灌注带蒂SIEA60min。60只SD大鼠随机分为6组:A、B、C、D组分别为:3.0×106、3.0×107、3.0×108、3.0×109pfu/ml,E组:PBS、F组:腺病毒空载体。术后7天应用活体荧光成像系统观察皮瓣的荧光强度,应用共聚焦显微镜、RT-PCR检测皮瓣组织中EGFP的表达和分布情况,通过组织学分析对皮瓣的安全性影响。结果:术后7天B组、C组、D组活体观察皮瓣可见体表绿色荧光信号。共聚焦显微镜观察结果与活体观察结果一致,EGFP在皮瓣内血管内、外膜均可见表达,血管周围组织包括脂肪、毛囊可见EGFP表达,皮瓣外组织未见EGFP表达。对照组E组、F组未见EGFP表达。RT-PCR结果显示,EGFP仅在皮瓣内表达,其他重要脏器(心脏、肝脏、肾脏)无表达。对皮瓣组织学观察未见明显炎症反应。结论:复合组织瓣转移修复创面是一种成熟的手术方式。本研究从大体观察、组织形态学和分子生物学三方面评价外源基因经动脉内灌注转染大鼠带蒂皮瓣的可行性,为进一步深入研究基因修饰复合组织瓣。
- 李丹乔群王晓军曾昂
- 关键词：外源基因经动脉灌注腺病毒
