安徽省高校省级自然科学研究项目(KJ2010B014)
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
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- 相关机构：安徽工程大学更多>>
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- 相关领域：轻工技术与工程生物学更多>>
- 黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因克隆及在毕赤酵母中分泌表达被引量：7
- 2012年
- 为大规模制备β-葡萄糖苷酶,构建重组酵母工程菌,实现β-葡萄糖苷酶的分泌表达。根据已报道黑曲霉(Aspergillus niger)β-葡萄糖苷酶cDNA序列设计一对引物,采用RT-PCR扩增,获得黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl)。构建了pMD-18T-bgl克隆载体,bgl亚克隆到质粒pPIC9K,构建表达载体pPIC9K-bgl。经BglⅡ线性化后电转入Pichia pastoris GS115,经过MD、YPD/G418平板筛选阳性克隆,获得分泌表达重组P.pastoris GS115的工程菌。用终体积分数1%的甲醇对其进行诱导表达,SDS-PAGE和酶活测定结果表明,重组毕赤酵母分泌了1个相对分子质量约90 000的蛋白质,与该酶基因产物的理论值一致。酶催化的最适温度为50℃,最适pH 5.5,其酶活达到38 U/mL,比已报导重组酶产酶水平有较大程度的提高。
- 朱龙宝汤斌陶玉贵葛飞魏胜华陈涛李婉珍
- 关键词：黑曲霉Β-葡萄糖苷酶毕赤酵母基因克隆分泌表达
- 过量表达乳酸脱氢酶的重组干酪乳杆菌构建及发酵性能被引量：1
- 2013年
- 乳酸脱氢酶(LDH)是干酪乳酸菌(L.casei)合成L-乳酸途径中的关键酶,通过构建过量表达乳酸脱氢酶的重组干酪乳杆菌,提高干酪乳杆菌发酵产乳酸的能力。根据干酪乳杆菌乳酸脱氢酶的基因序列设计引物,PCR扩增获得乳酸脱氢酶基因(ldh),将其连接到乳酸杆菌穿梭质粒pMG36e,构建重组质粒pMG-ldh,电转入L.casei,利用红霉素MRS平板筛选阳性克隆,获得表达乳酸脱氢酶的重组菌L.casei pMG-ldh,SDS-PAGE和酶活分析结果表明成功表达了一个约37kD的乳酸脱氢酶蛋白,重组酶活力最高达95U/mL,较原始菌23U/mL提高了近3.1倍。为进一步提高其产乳酸能力,添加4mmol/L激活剂FBP和8mg/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)前体物烟酸,结果表明:重组菌L.caseipMG-ldh乳酸积累128.2g/L,生产强度达到3.04g/(L.h),较原始菌株L.casei分别提高了35%和53%,发酵周期缩短6h。
- 朱龙宝葛飞李婉珍陶玉贵
- 关键词：乳酸脱氢酶发酵特性
- 高效毛细管电泳检测啤酒酵母中谷胱甘肽被引量：2
- 2011年
- 为建立简单、快速的谷胱甘肽检测方法,采用Beckman毛细管电泳仪对啤酒酵母中谷胱甘肽进行检测,选用石英毛细管柱(60cm×75μm,有效柱长36cm)、1/15mmol/L、pH7.4的磷酸缓冲液、分离电压25kV、紫外检测波长为200nm,进样5s。结果表明:谷胱甘肽在5～100mg/L内呈现良好的线性关系(R2=0.9996),平均回收率为97.2%,平均相对标准偏差RSD为3.2%。该法结果准确,操作简单,重现性好,可应用于谷胱甘肽的测定。
- 朱龙宝魏胜华葛飞陶玉贵
- 关键词：毛细管电泳谷胱甘肽啤酒酵母
- 纳豆菌分批发酵纳豆激酶动力学研究被引量：1
- 2012年
- 通过三联30L全自动发酵罐对纳豆菌的分批发酵动力学进行了研究,结果表明,纳豆菌的生长与限制性基质葡萄糖浓度之间符合Logistic方程,建立了细胞生长、产物合成和基质消耗随时间变化的数学模型。应用MATLAB软件对发酵动力学模型进行最优参数估计和非线性拟和,获得最大比生长速率(μm)和产物得率(YP/X)分别为0.228h-1、5.835g/g,模型模拟计算结果与和实验值能较好地吻合,动力学研究结果表明该模型能较好地反映细胞的生长、底物消耗和产物合成过程机制。
- 曹新界朱龙宝陶玉贵
- 关键词：纳豆菌动力学模型分批发酵
- 氮饥饿/过氧化氢协同胁迫促进法夫酵母合成虾青素被引量：1
- 2012年
- 虾青素是一种强抗氧化剂,在细胞抵御外界环境胁迫方面起到重要作用。研究了氮饥饿/过氧化氢协同胁迫对法夫酵母合成虾青素的影响,结果表明:低含氮量有利于虾青素的合成,随着碳氮比的降低,虾青素的合成受到抑制,最佳的碳氮比为3∶0.6,每克干细胞虾青素的含量最高达0.32mg/g;在此基础上添加5mmol/L过氧化氢协同胁迫法夫酵母可进一步提高虾青素的产量,在发酵24h(对数生长期)加入3mmol/L的H2O2,36h补加2mmol/L,虾青素产量达到0.59mg/g,比空白对照提高63.9%。
- 朱龙宝葛飞魏胜华李婉珍陶玉贵
- 关键词：虾青素法夫酵母过氧化氢
