吉林省科技发展计划基金(20060566)
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
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- 相关机构：吉林大学第一医院军事医学科学院吉林大学更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金国家高技术研究发展计划“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 新城疫病毒HN基因对子宫颈癌细胞内线粒体功能的影响
- 2008年
- 宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，目前的发病机制尚不完全清楚。现有的研究表明，宫颈癌的发生、发展是由多基因参与的多步骤的复杂过程。新城疫病毒（NDV）HN基因的长度为1734 bp，编码577个氨基酸，蛋白相对分子质量为63000。20世纪60年代，Cassel和Garrett发现，NDV的爆发流行使晚期胃癌患者的转移受到抑制，NDV的抗肿瘤作用因此受到人们的重视并已进入临床研究阶段。
- 朱继红岳瑛金宁一李霄孙丽丽张珏陈漉刘立明张振民
- 关键词：新城疫病毒HN基因子宫颈癌线粒体功能细胞内妇科恶性肿瘤相对分子质量
- 抗肿瘤双特异免疫导向治疗制剂CAtin的表达及活性分析被引量：7
- 2009年
- 结合生物信息学方法与已知癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单链抗体(Single chainFv fragment,scFv)核苷酸序列,经分子设计和密码子优化后,通过化学方法合成CEA二硫键稳定性单链抗体(Disulfide stabilized single chain Fv fragments,scdsFv)基因片段.将凋亡素基因(Apoptin)通过一段柔性连接肽(Linker)连接在CEA scdsFv基因下游,并克隆入大肠杆菌表达载体质粒pET28a,转化BL21感受态菌后经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导,表达融合蛋白CAtin.SDS-PAGE和Western-Blot分析表明,目的蛋白得到良好表达,经条件优化后表达量最高可达44.1 mg/L.融合蛋白经分步洗涤法和谷胱甘肽对表达的目的蛋白进行初步纯化和复性后,利用人肝癌细胞(HCC)对所制备融合蛋白进行亲和力测定、细胞结合活性测定和特异性细胞杀伤活性分析.结果显示,所制备融合蛋白不仅能够有效地与上述肿瘤细胞结合,并对其具有明显的杀伤活性,表明成功制备了具有特异性识别和特异性杀伤活性的双特异抗肿瘤免疫导向制剂.
- 李霄金宁一李昌田明尧陈漉贾鹏刘立明刘妍高鹏
- 关键词：癌胚抗原凋亡素基因原核表达
- 基于SFVRNA复制子核酸疫苗pIRSFV-HN的构建及其体内外抑瘤作用被引量：4
- 2008年
- 目的:构建基于塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)RNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN,并探讨其体内外的抑瘤作用。方法:基于SFV RNA复制子和新城疫病毒HN基因构建核酸疫苗pIRSFV-HN,pIRSFV-HN转染人结肠癌细胞HCT-116,以Western blotting检测转染后HCT-116细胞HN的表达水平,以AO/EB双荧光染色检测肿瘤细胞的凋亡,以MTT法检测疫苗对HCT-116细胞增殖的抑制。构建C57BL/6小鼠右后肢皮下荷H22腹水瘤细胞模型,瘤体内注射pIRSFV-HN(共3次),检测该小鼠血清IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ水平和特异性CTL活性。结果:成功构建基于SFV RNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN。结肠癌细胞HCT-116被疫苗转染后可有效表达HN蛋白,对照细胞则无表达;转染后HCT-116细胞出现凋亡的征象;该细胞的增殖受到明显抑制,最大抑制率达55.34%。移植瘤体内注射疫苗后,荷瘤小鼠血清IL-2、IFN-γ水平显著升高(P<0.05),其CTL活性也显著升高(P<0.01)。结论:基于SFVRNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN在体外可有效地抑制肿瘤细胞;在体内可促使免疫趋向Th1优势,提高其抑瘤免疫水平。
- 张钰金宁一李霄朱继红陈漉刘立明李昌佟敬山李群陈勇志
- 关键词：新城疫病毒核酸疫苗抑瘤作用细胞毒性T淋巴细胞
- 含新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因重组腺病素的构建及鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的：构建表达新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶（Hemagglutinin—neuramidinase，FIN）基因的重组腺病毒，为进一步研究HN基因对消化道肿瘤的抑制作用及分子机制建立基础。方法：用BamHI和XbaⅠ双酶切质粒pVHN，将获得的HN基因片段连接入穿梭质粒pacAd5 CMV K-N pA，构建含HN基因的穿梭质粒pacAd5-HN。利用PacI单酶切对pacAd5-HN和腺病毒基因组质粒（pAd5）进行线性化处理后应用脂质体介导法共转染AAV-293细胞，分别利用蚀斑纯化和RT-PCR、Western blot等方法对重组病毒进行筛选和鉴定，并测定所获得重组病毒的滴度。结果：所构建重组病毒可有效表达HN基因，表达产物分子量约为63kD，重组病毒滴度为10^8～10610PFU／ml。结论：成功构建含HN基因的重组腺病毒，所获得重组病毒的滴度可以满足体内外实验要求。
- 陈漉金宁一李霄刘立明贾鹏刘妍高鹏陆蕴松李明迟宝荣
- 关键词：NDVHN基因重组腺病毒抗肿瘤
- pIRApoptinHNIL18对结肠癌细胞HCT-116的抑制效应
- 2007年
- 目的:探讨联合应用凋亡素(apoptin)基因、新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶(he-magglutinin-neuramidinase,HN)基因及人白介素18(hIL-18)基因体外对人结肠癌细胞HCT-116的抑制效应。方法:重组质粒pIRApoptinHNIL18通过脂质体介导法体外转染人结肠癌细胞HCT-116,通过Western blotting和RT-PCR检测外源基因表达;采用AO/EB染色法检测pIRApoptinHNIL18对人结肠癌细胞HCT-116抑制作用;利用流式细胞术分析pIRApoptinHNIL18对人结肠癌细胞HCT-116线粒体膜电位(mitochondrial transmembrane potential,△Ψ)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用3,5-二羟基甲苯法测定唾液酸含量。结果:pIRApoptinHNIL18转染人结肠癌细胞HCT-116后,外源基因能够有效表达;肿瘤细胞生长受到抑制;线粒体△Ψ由(94.41±8.17)%下降到(30.70±8.01)%(P<0.05);唾液酸含量由(0.33±0.06)mmol/L下降到(0.09±0.03)mmol/L(P<0.01);ROS水平由(52.48±6.09)%升高到(68.98±7.26)%(P<0.05)。结论:pIRApoptinHNIL18可通过线粒体途径诱导细胞凋亡,从而抑制人结肠癌细胞HCT-116的生长。
- 郑洪玲金宁一李霄米志强连海李昌田明尧李雪梅孙丽丽
- 关键词：凋亡素基因结肠癌细胞线粒体凋亡
