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广东省农业厅资助项目(2003247)
作品数:
1
被引量:8
H指数:1
相关作者:
林彦星
刘镇明
耿忠海
戚一达
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相关机构:
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林彦星
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2007
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猪圆环病毒Ⅱ型ORF2截短基因的克隆及原核表达
被引量:8
2007年
参照GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(Porcinecircovirus type 2,PCV2)的ORF2基因序列,设计合成1对引物,对PCV-2ZS株ORF2基因上含主要抗原位点的片段(ORF2-ME)进行PCR扩增,并克隆到pMD18-T Simple Vector中,进行序列测定。将重组质粒pMD—ORF2-ME的EcoR Ⅴ和Xhol Ⅰ双酶切产物插入原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达载体pET—ORF—ME。测序分析表明,克隆的ORF2-ME与GenBank上公布的PCV2毒株核苷酸序列同源性为99%~100%,推导的氨基酸序列同源性介于91%~100%之间。原核表达载体导入BL21(DE3)后用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS—PAGE和Western Blotting分析,结果表明ORF2-ME在BL21(DE3)中成功表达,所表达融合蛋白的相对分子质量约为40000,并能被PCV2阳性血清所识别,这就为PCV2感染诊断和抗体检测提供了依据。
林彦星
孙彦伟
刘镇明
戚一达
耿忠海
关键词:
PCV2
克隆
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