国家自然科学基金(30571957)
- 作品数：5 被引量：14H指数：3
- 相关作者：罗兵王言奎殷广洁王文娟葛翠翠更多>>
- 相关机构：青岛大学医学院附属医院青岛大学上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 反转录病毒介导的HPV16 E6-siRNA对SiHa细胞增殖及抗药性的影响被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨反转录病毒介导的靶向人乳头瘤病毒(human papillom avirus,HPV)16E6基因的小干扰RNA(small inter-fering RNA,siRNA)对HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞的影响。方法:收集产反转录病毒PA317细胞的病毒上清液感染SiHa细胞,G418筛选获得HPV16E6基因稳定沉默的细胞克隆(SiHa/16E6),同时设立载体对照(SiHa/pSUPER)和正常细胞对照(SiHa)。RT-PCR检测HPV16E6和E7mRNA的表达水平,Western印迹法检测p53、Rb、caspase3及其底物多聚ADP-核糖聚合酶(polyADP-ribose polymerase,PARP)蛋白的表达,MTT法检测细胞的增殖活性及细胞对顺铂的敏感性。结果:感染后与SiHa细胞对照组相比,各时间点的E6和E7mRNA表达水平均有所下降,p53和Rb蛋白表达水平增高,caspase-3和PARP剪切后的活性条带增加,感染后40d细胞的增殖活性下降;在同一药物浓度下,感染后20d的细胞存活率显著降低,顺铂的IC50值为(3.92±2.48)μg/mL。而SiHa/pSUPER组与SiHa细胞对照组相比,差异无统计学意义。结论:反转录病毒介导的HPV16E6-siRNA可有效沉默SiHa细胞中E6和E7基因的表达,抑制细胞增殖,并提高细胞对顺铂的敏感性。
- 葛翠翠王言奎罗兵王文娟杨玲
- 关键词：反转录病毒科人乳头状瘤病毒16细胞增殖抗药性
- 靶向HPV18E6基因siRNA对HeLa细胞p21、VEGF、Bax和Bcl-2基因的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨针对人乳头瘤病毒18型E6基因的特异性小干扰RNA(siRNA)对宫颈癌HeLa细胞p21、VEGF、Bax和Bcl-2基因的影响。方法采用脂质体法将特异性siRNA瞬时转染HeLa细胞,半定量RT-PCR检测siRNA转染后HeLa细胞中p21、血管内皮生长因子(VEGF)、Bax和Bcl-2mR-NA的变化,免疫组化检测HeLa细胞中p21和VEGF蛋白的变化。结果RT-PCR检测结果显示转染后24、48、72hp21和BaxmRNA的表达与转染前比较均有升高。转染后24、48、72hVEGF和Bcl-2mRNA的表达与转染前比较均有降低。免疫组化检测结果显示转染后48、72hp21蛋白的表达与转染前比较均有升高。转染后48、72hVEGF蛋白的表达与转染前比较均有降低。结论靶向HPV18E6基因的siRNA可有效干扰宫颈癌HeLa细胞中p21、VEGF、Bax和Bcl-2基因的表达,从而抑制细胞增殖。
- 赵洪霞王言奎罗兵殷广洁
- 关键词：小干扰RNAP21VEGFBAX
- 化学合成siRNA对宫颈癌细胞SiHa中E6基因表达的抑制作用被引量：3
- 2007年
- 背景与目的:宫颈癌的发生发展与人乳头瘤病毒(human papilloma virus)HPV16E6、E7癌基因密切相关,人们曾采用核酶或E6、E7反义寡核苷酸抑制其表达,然而,上述两种方法存在费时、费力、抑制效率不高和维持时间短的问题。本研究拟探讨化学合成siRNA对HPV16阳性SiHa细胞E6基因表达的抑制作用以及对靶细胞的影响。方法:化学合成3条靶向HPV16E6基因的siRNA,用脂质体法转染SiHa细胞,同时设立脂质体对照。采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测siRNA作用后E6mRNA水平的变化;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞技术(FCM)、免疫组化以及透射电镜技术(TEM)分别对细胞增殖活性、细胞周期、p53蛋白水平以及细胞超微结构的改变进行检测分析。结果:3条siRNA均能有效抑制E6mRNA的转录表达,以siRNA1作用效果最为明显。MTT检测结果显示20、50和80nmol/L终浓度转染后细胞增殖活性均有所下降,其中以50nmol/L转染时增殖活性下降最明显。流式细胞术检测结果显示转染后G0/G1期细胞数占生长周期细胞数的比例增多,即表现为G1期阻滞,S期细胞的比例降低;免疫组化法检测对照组细胞P53蛋白灰度平均值为0.43±0.03,转染72h后细胞p53蛋白灰度平均值为0.75±0.06,差异有显著性(P<0.05);转染72h后透射电镜下可见细胞细胞质浓缩,胞质中出现空泡。结论:化学合成siRNA可有效沉默SiHa细胞E6基因的转录表达,进而导致细胞生物学行为的改变。
- 袁月秀王言奎罗兵殷广洁
- 关键词：宫颈癌人乳头瘤病毒E6基因RNA干扰
- 靶向HPV18 E6基因不同锌指结构编码序列的siRNA对宫颈癌HeLa细胞作用的比较被引量：6
- 2008年
- 目的探讨靶向HPV18 E6基因不同锌指区编码序列的siRNA对HeLa细胞的影响。方法分别设计靶向E6蛋白不同锌指区编码序列的两对siRNA,脂质体法转染HeLa细胞。半定量RT-PCR检测E6 mRNA转录表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞增殖活性;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡情况。结果与siRNASCR转染组比较,RT-PCR结果显示,siRNA1和siRNA2转染后E6表达水平明显降低(F=8.709,P<0.05),且siRNA2组较siRNA1组下降更为显著(t=3.61,P<0.05)。MTT结果提示,2对siRNA转染后48 h和72 h的细胞增殖活性均明显下降(F=60.583、102.421,P<0.05),siRNA2组较siRNA1组下降更为明显(t=4.717、7.932,P<0.01);2对siRNA转染后均未检测到明显的细胞凋亡。结论靶向锌指2区编码序列的siRNA抑制E6基因表达和HeLa细胞增殖的效果更好,锌指2区可能是使HeLa细胞发生恶性转化并使其增殖失调控的关键区域。
- 殷广洁罗兵王言奎
- 关键词：锌指E6基因
- 稳定表达HPV16 E6 siRNA细胞克隆的建立被引量：1
- 2007年
- 目的构建针对HPV16 E6基因的逆转录病毒载体,感染HPV16阳性宫颈癌细胞,筛选稳定表达HPV16 E6 siRNA的细胞克隆。方法采用DNA重组技术构建表达靶向HPV16 E6基因的pSUPER.retroRNAi逆转录病毒载体,脂质体法将逆转录病毒载体转染入包装细胞PA317,G418筛选稳定产生逆转录病毒的细胞克隆,收集病毒上清,感染靶细胞SiHa,G418筛选出稳定表达HPV16 E6 siRNA细胞克隆,RT-PCR检测细胞中E6 mRNA表达,细胞增殖实验检测细胞增殖力。结果获及稳定产生逆转录病毒的细胞克隆,病毒感染靶细胞SiHa后,筛选出稳定表达HPV16 E6 siRNA的细胞克隆,RT-PCR示HPV16 E6 mRNA表达受到抑制。细胞增殖实验示克隆细胞增殖率明显下降。结论成功建立稳定表达HPV16 E6 siRNA细胞克隆,特异性的siRNA能抑制细胞生长、HPV16 E6 mRNA表达,HPV16 E6 siRNA可能成为治疗宫颈癌的一种新方法。
- 王文娟王言奎杨玲徐冰王宁罗兵戴淑真
- 关键词：DNA探针宫颈肿瘤克隆细胞
