博士科研启动基金(52XB1104)
- 作品数：9 被引量：9H指数：2
- 相关作者：朱长军董智雄付成华胡晓晴梁爽爽更多>>
- 相关机构：天津师范大学泰山医学院附属医院山东大学更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”博士科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 染色体驱动蛋白KIF4A参与调控肺癌细胞顺铂耐药
- 2015年
- 目的研究染色体驱动蛋白KIF4A参与肺癌细胞顺铂耐药过程。方法采用逆转录PCR（RT．PCR）及Western Blot实验检测并比较肺癌细胞株A549及其顺铂耐药衍生细胞株A549／DDP中染色体驱动蛋白KIF4A的表达。先用细胞转染技术在A549细胞中过表达外源性KIF4A，或用RNA干扰（RNAi）技术敲降A549／DDP细胞中内源性KIF4A的表达，再用顺铂处理上述细胞，最后通过噻唑蓝（MTY）比色法检测细胞的增殖能力。结果染色体驱动蛋白KIF4A在A549／DDP细胞中mRNA和蛋白质的表达均高于A549细胞。在A549细胞中过表达外源性KIF4A，导致细胞耐受顺铂药物，且细胞增殖能力不受顺铂药物处理的影响。相反，在A549／DDP细胞中敲降KIF4A的表达，导致A549／DDP细胞对顺铂药物敏感，细胞增殖能力下降。结论驱动蛋白分子KIF4A参与调控肺癌细胞A549的顺铂耐药过程，故KIF4A可作为潜在的有效治疗肺癌顺铂耐药的新型生物靶标。
- 付成华胡晓晴梁爽爽冀美超董智雄朱长军
- 关键词：肺癌顺铂耐药
- 核糖体蛋白RPL15多克隆抗体的制备与细胞内定位
- 2016年
- 为了解核糖体大亚基蛋白RPL15在细胞中的定位和功能,设计并合成了RPL15蛋白的多肽,作用于抗原免疫兔子,使其产生特异性多克隆抗体,利用蛋白免疫印迹和免疫荧光方法检测RPL15抗体的特异性.结果证实本研究成功制备并纯化了RPL15的多克隆抗体,且该抗体可以特异性识别RPL15蛋白.免疫荧光实验表明RPL15定位于细胞质和细胞核中,主要定位于核仁并呈点状分布,且与UBF、FBL和C23存在部分共定位.
- 梁爽爽冀美超胡晓晴付成华朱长军董智雄
- 关键词：核糖体多克隆抗体免疫荧光细胞内定位
- RNaseⅢ制备的小分子干扰RNA（esiRNA）文库构建及优势分析被引量：4
- 2013年
- 目的建立KIF4A核糖核酸内切酶Ⅲ酶切制备的小分子干扰RNA（esiRNA）文库，并探讨这种新型siRNA制备方法的优势。方法制备502bp的KIF4A基因组序列作为转录模板；体外转录获得双链RNA；用核糖核酸内切酶ⅢGST融合蛋白（GST-RNaseⅢ）酶切双链RNA，制备KIF4AesiRNA文库；应用KIF4AesiRNA和化学合成的KIF4AsiRNA转染胃癌细胞株SGC-7901，应用Q-RTPCR和WesternBlot分别检测KIF4A的mRNA和蛋白水平。结果利用GST-RNaseⅢ成功制备了KIF4AesiRNA文库，该文库可有效抑制SGC．7901细胞内的KIF4A表达，且抑制效果明显优于化学合成的KIF4AsiRNA。结论用生物学方法制备的KIF4AesiRNA文库可有效抑制KIF4A在细胞内的表达，且抑制效果优于化学合成的siRNA。
- 李陪董智雄朱长军刘海燕
- 关键词：RNA干扰
- 一种连续蔗糖密度梯度离心分离哺乳动物细胞核糖体前体和核糖体的技术优化
- 2015年
- 目的利用连续蔗糖密度梯度的方法分离提取哺乳动物细胞的核糖体前体和核糖体。方法采用超速离心法建立连续蔗糖密度梯度，分别用梯度为10％～30％和10％-45％的连续蔗糖密度梯度提取哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体；然后将哺乳动物细胞裂解液加入到已建立好的连续蔗糖密度梯度上进行超速离心；再将不同沉降系数的核糖体前体和核糖体收集到不同的1．5ml离心管中，测量每一个样品的吸光度值A。并提取其中的蛋白质，利用WesternBlot检测核糖体大亚基蛋白RPL15的定位。结果核糖体大亚基蛋白RPL15位于核糖体前体的60S上和成熟核糖体的60S、80S和多聚核糖体上。结论利用水平转头建立的连续蔗糖密度梯度可快捷分离哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体。该法分离效果好，操作简单，为快速和大量制备、分离多种核糖体提供了一种良好的方法。
- 梁爽爽冀美超胡晓晴付成华朱长军董智雄
- 关键词：核糖体
- A549-KIF4A过表达细胞株的构建与鉴定被引量：1
- 2015年
- 非小细胞肺癌A549细胞中驱动蛋白KIF4A的表达量极低.为研究KIF4A在肺癌发生和发展过程中的作用,利用脂质体转染的方法,将p EGFP-KIF4A质粒和p EGFP-C1质粒分别转入A549细胞中,用G418筛选得到单克隆,并扩增得到稳定表达GFP-KIF4A和GFP的细胞株.利用Western Blot以及免疫荧光染色法对得到的细胞株进行鉴定.结果表明:A549-GFP-KIF4A细胞中GFP-KIF4A蛋白的表达水平较高,A549-GFP-C1中仅表达GFP蛋白.免疫荧光检测表明:A549-GFP-KIF4A过表达细胞中GFP-KIF4A荧光融合蛋白的定位与内源KIF4A的定位相同.
- 宋翔付成华朱长军董智雄
- 关键词：驱动蛋白脂质体转染免疫荧光检测细胞株
- 染色体驱动蛋白KIF4A稳定低表达胃癌细胞系的构建及鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的 构建稳定低表达染色体驱动蛋白KIF4A的胃癌细胞系,观察KIF4A低表达细胞的有丝分裂期纺锤体中央区的形成.方法 针对人类驱动蛋白KIF4A mRNA的编码区设计特异性siRNA序列,构建KIF4A短发夹RNA（shRNA）表达质粒pGPU-GFP-KIF4A.将质粒转染胃癌细胞SGC-7901,经过G418筛选获得稳定低表达KIF4A的细胞株.使用蛋白免疫印迹方法鉴定细胞株内KIF4A蛋白的敲降效果,并通过细胞免疫荧光染色法观察细胞纺锤体中央区的形成.结果 成功获得了3株不同水平稳定低表达KIF4A的SGC-7901细胞株（SGC-shKIF4A）和稳定表达无意义shRNA的对照细胞（SGC-shNC）;同时,与对照细胞SGC-shNC相比,SGC-shKIF4A细胞中有丝分裂纺锤体中央区延长,并随KIF4A蛋白表达水平的降低而增加.结论 成功构建了不同水平稳定低表达KIF4A蛋白的胃癌细胞SGC-shKIF4A,为进一步研究驱动蛋白分子KIF4A的功能及其在胃癌发生发展过程中的作用奠定基础.
- 钟铠泽赵健李陪陈蔚文朱长军董智雄
- 关键词：有丝分裂小分子干扰RNA胃癌细胞
- 应用组织芯片技术分析驱动蛋白KIF18A在卵巢癌中的表达及其意义被引量：2
- 2013年
- 采用组织芯片技术研究KIF18A蛋白与卵巢癌发生的关系,并探讨该蛋白分子治疗临床卵巢癌的潜在价值.对比100例卵巢癌病患的癌组织与正常组织芯片,KIF18A蛋白分子在正常卵巢组织、卵巢癌、转移淋巴结中皆有不同程度的表达.在卵巢癌组织中的表达明显高于正常组织(p≤0.05).卵巢浆液性乳头状腺癌的不同分期中,Ⅰ期与Ⅱ期相比,在Ⅱ期中KIF18A蛋白分子的表达明显上调(p≤0.05).同时,淋巴结转移性浆液性乳头状腺癌中的KIF18A蛋白表达量高于非转移性的浆液性乳头状腺癌(p≤0.05).这些结果表明,KIF18A蛋白分子的表达强度与卵巢癌的肿瘤临床分期以及淋巴结转移有关,可作为卵巢癌检测的新型标志物.
- 李玉刘昕朱长军刘海燕
- 关键词：驱动蛋白卵巢癌组织芯片技术
- 黏着斑蛋白Supervillin的抗体制备及纯化被引量：1
- 2014年
- 黏着斑蛋白Supervillin(SVIL)是一个细胞膜结合蛋白分子,定位于细胞与细胞外基质接触面的黏着斑。为了进一步研究SVIL蛋白分子在细胞内的功能,应用分子克隆技术构建原核细胞表达质粒pGEXKG-SVILC302和pHIS8-SVILC302,并在细菌BL-21(DE3)中用IPTG分别诱导表达GST-SVILC302和HIS-SVILC302融合蛋白。用谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化GST-SVILC302蛋白,然后免疫新西兰大白兔制备SVIL多克隆抗体,并用Ni-NTA柱子结合HIS-SVILC302蛋白,对其进行交联,纯化抗体。Western Blot(WB)和Immunofluorescence(IF)实验证明该抗体可以识别外源的GFP-SVIL和内源的SVIL蛋白,并且可以用于蛋白免疫沉淀实验。表明此SVIL多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度,为进一步研究黏着斑蛋白SVIL在细胞内的功能奠定了坚实的基础。
- 张佟佟钱积成朱长军董智雄
- 关键词：SUPERVILLIN抗体纯化
- KIF4A mRNA在肺癌组织中表达水平的研究被引量：1
- 2013年
- 收集肺癌组织标本和正常肺组织标本,提取组织中的RNA,通过反转录PCR合成cDNA,进行实时定量PCR测定.结果表明:31例肺癌组织中有29例KIF4A mRNA的表达量高于正常组织,其中26例(83.87%)比正常组织高2倍以上,10例(32.30%)比正常组织高4倍以上;KIF4A mRNA的表达量与肿瘤淋巴结转移(TNM)分期的相关性具有统计学意义(F=0.565,P=0.029).由于肺癌组织中KIF4A mRNA的表达量升高与肿瘤的分期分型相关,因此可以作为判断肺癌分期及预后的新分子标志物,对于评估肺癌的发生与发展也可能具有重要意义.
- 张三凤赵健朱长军董智雄
- 关键词：肺癌组织实时定量PCR
