国家教育部博士点基金(200051)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：朱振宇李秀英曾宗渊夏良平谢金卫更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人穿孔素扩增与表达分析
- 2006年
- [目的]拟扩增穿孔素(poreformingprotein,PFP)全序列,构建PFP的原核表达载体,从而建立其原核表达体系,获得高效表达的重组PFP。[方法]用淋巴细胞分离液分离肿瘤组织中的淋巴细胞,并抽提RNA,RT-PCR方法获得PFP的全长,并重组到pGEX-4T-1中,用限制性内切酶酶切和DNA测序法进行鉴定,通过Westernblotting分析表达产物。[结果]限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实成功获得PFP基因片段,PFP准确克隆入pGEX-4T-1,并未改变读码框架,在大肠杆菌BL21中检测到目的蛋白的表达。[结论]成功构建了pGEX-PFP,表达产物具有良好的抗原性和特异性。
- 夏良平李秀英张诠朱振宇曾宗渊
- 关键词：穿孔素淋巴细胞基因扩增基因表达
- 人颗粒酶B真核表达载体的构建与表达分析被引量：1
- 2004年
- 目的构建能在Hep2细胞中表达的颗粒酶B的表达质粒pVAX1-GrB。方法用淋巴细胞分离液分离肿瘤组织中的淋巴细胞,并抽提RNA,用RT-PCR方法扩增其分泌蛋白颗粒GrB的全部外显子片段,利用基因重组技术将其定向插入pVAX1多克隆位点。脂质体介导转染Hep2细胞,用间接免疫荧光法观察目的蛋白在细胞中的表达。结果限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实成功获得GrB基因片段,GrB准确克隆入pVAX1的多克隆位点,未改变读码框架。转染Hep2细胞后,检测到目的蛋白的表达。结论成功构建了VAX1-GrB,并在Hep2细胞中得到表达。
- 李秀英夏良平谢金卫赵肃清曾宗渊张海涛吉琼梅李民友朱振宇
- 关键词：颗粒酶B淋巴细胞
