国家林业局948项目(2004-Z40)
- 作品数：8 被引量：40H指数：4
- 相关作者：尹燕博吕翠马小明单虎孙忠晟更多>>
- 相关机构：青岛农业大学西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：引进国际先进农业科技计划“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- H1亚型猪流感病毒的分离鉴定
- 2009年
- 从山东、浙江、湖南、广西等地区各猪场采集30份疑似猪流感病猪的病料,通过鸡胚培养、血凝及血凝抑制试验、电镜观察、RT-PCR和测序分析进行了分离鉴定。结果从山东和湖南两地分离到4株有血凝活性的病毒,其中山东的2株病毒与新城疫病毒阳性血清的血凝抑制试验为阳性,通过电镜观察湖南的2株病毒具有猪流感病毒的特征,且与抗H1亚型猪流感病毒阳性血清的血凝抑制试验为阳性;根据H1亚型猪流感病毒HA基因设计引物,利用RT-PCR扩增出543bp片段,经序列分析证实该病毒为H1亚型猪流感病毒。
- 吕翠马小明尹燕博单虎
- 关键词：猪流感病毒血凝及血凝抑制试验电镜观察反转录-聚合酶链式反应
- 间接ELISA检测猪流感抗体方法的建立及应用被引量：3
- 2011年
- 近年来流感病毒已突破宿主限制,猪作为人与禽类流感病毒的中间宿主,更是有着不可忽视的作用,对猪流感病的预防和诊断就具有重要的公共卫生意义。而防治的关键需借助于准确的检测方法,
- 孙忠晟尹燕博王平陈桂来张思娟
- 关键词：ELISA检测猪流感抗体方法公共卫生意义中间宿主
- 猪流感病毒M基因核酸探针的制备与应用被引量：9
- 2009年
- 以地高辛(DIG)标记猪流感病毒(SIV)M基因的保守片段制成核酸探针,与H1及H3亚型的猪流感病毒(SIV)的cDNA、猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)的cDNA、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的DNA、猪瘟病毒(CSFV)cDNA、猪伪狂犬病(PRV)的DNA进行斑点杂交,以检测探针的特异性,结果该探针仅与H1及H3亚型的猪流感病毒(SIV)的cDNA杂交呈阳性,与其余病毒杂交呈阴性;敏感性试验显示,探针最低能检出约5 pg的H3亚型的SIV RT-PCR产物。应用该探针对35份疑似SI临床病料进行检测,结果检出9份阳性,与RT-PCR检测结果一致。本研究结果表明,建立的DIG标记的核酸探针特异性强,敏感性高,适合于对SI的诊断和流行病学调查。
- 吕翠马小明尹燕博单虎
- 关键词：猪流感病毒
- SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法检测猪流感H3N2亚型病毒方法的建立被引量：5
- 2012年
- 本试验针对H3N2亚型流感病毒神经氨酸酶基因建立SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR检测方法。根据GenBank上的SIV N2基因序列设计一对引物,扩增片段406bp。纯化扩增目的片段后连接pMD18-T载体中,命名为pMD18-TN2,转化入E.coli DH5α,测序正确作为阳性模板,优化反应条件建立方法。此荧光PCR方法所能检测最低病毒含量为75copies/μL,拥有良好的特异性和重复性。此方法的建立将为流感病毒N2亚型神经氨酸酶基因定型检测提供一种有效方法。
- 孙忠晟尹燕博王平韩丽敏
- 关键词：神经氨酸酶基因SYBR
- 猪流感病毒研究进展被引量：7
- 2008年
- 猪流感是由猪流感病毒引起的一种呼吸道传染病。此病在世界各地都有发生,危害严重,经济损失巨大,并对人类的健康构成威胁。猪流感病毒属于正黏病毒科A型流感病毒属,病毒粒子呈多形态。该病毒对热、消毒剂敏感,对干燥和低温的抵抗力强。其分子特性为多节段的RNA病毒,由8个片段组成,分别编码10种蛋白质。猪流感病毒能够在多种动物的细胞和鸡胚增殖。病毒具有血凝活性,但不同毒株的抗原性无明显的区分。由于病毒受到抗体的压力很大,因此病毒的变异频繁,其机理涉及分子水平的抗原漂移和抗原转变。文章对病毒的理化性质、生物学特性、分子特性、病毒的蛋白和基因变异等方面的研究情况进行了综述。
- 吕翠马小明尹燕博单虎
- 关键词：猪流感病毒生物学特性病毒蛋白基因重组
- 猪流感病毒神经氨酸酶N2亚型Taq man荧光定量PCR检测方法的建立
- 2010年
- 孙忠晟尹燕博王平陈正平胡永钢许宏伟
- 关键词：猪流感病毒神经氨酸酶PCR检测方法荧光定量TAQN2
- 猪流感病毒分型基因芯片的建立和初步应用被引量：16
- 2007年
- 根据流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)亚型基因序列间的差异性,分别设计H1、H3、H9、N1和N2的特异分型引物,并根据M基因设计A型流感病毒的通用引物。RT-PCR扩增猪流感病毒各亚型HA、NA和M基因的特异片段,克隆至pMD18-T构建重组质粒,制备探针。将各探针按一定的阵列点加到硝酸纤维素膜上,制成基因芯片。并对217份不同地区的样品进行检测。结果表明:该芯片可以同时检测待检样品中5种亚型A型流感病毒,并显示了较高的灵敏度和特异性,灵敏度比PCR高1个稀释度,比病毒分离高2个稀释度。该方法的建立为猪流感的检测及猪流感病毒各亚型在猪群中的流行病学调查提供了一种快速、灵敏和高通量的手段。
- 陈红军侯义宏白华陈桂来吴时友尹燕博钱永华田振宇
- 关键词：猪流感病毒基因芯片多重PCR核酸杂交
- 应用基因芯片鉴别猪流感病毒亚型方法的建立和初步应用
- 根据Genbank发表的核酸序列,运用DNAMAN软件,分析流感病毒的HA和NA基因序列间的差异性,分别设计合成流感病毒H1、H3、H9、N1和N2的特异分型引物,并根据A型流感病毒的型特异性基因(M基因),设计了A型流...
- 吴时友陈红军尹燕博钱永华
- 关键词：猪流感病毒基因芯片多重PCR核酸杂交
- 文献传递
- H3亚型猪流感病毒HA基因核酸探针的制备与应用
- 2009年
- 以地高辛(DIG)标记H3亚型猪流感病毒(SIV)HA基因的保守片段制成核酸探针,与H3及H1亚型的猪流感病毒(SIV)的cDNA、猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)的cDNA、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的DNA、猪瘟病毒(CSFV)cDNA、猪伪狂犬病病毒(PRV)的DNA进行斑点杂交,检测探针的特异性。结果显示,该探针仅与H3亚型的猪流感病毒(SIV)的cDNA杂交呈阳性,与其余病毒杂交呈阴性;敏感性试验结果显示,探针最低能检出约6 pg/μL的H3亚型的SIV RT-PCR产物。应用该探针对35份疑似SI临床病料进行检测,结果检出4份阳性病料,与RT-PCR检测结果一致。研究表明,建立的DIG标记的核酸探针特异性强,敏感性高,适合于对H3亚型SI的诊断和流行病学调查。
- 吕翠马小明尹燕博温建新单虎
- 关键词：地高辛标记核酸探针H3亚型猪流感病毒
