浙江省自然科学基金(Y204272)
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 相关作者：葛红山陈雅叶碧绿薛亚梅邹长林更多>>
- 相关机构：温州医学院附属第一医院温州医学院附属第二医院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 玻璃化冷冻对小鼠窦前卵泡体外培养及卵子骨架的影响
- 2008年
- 目的分析玻璃化冷冻对小鼠窦前卵泡体外生长、发育及成熟后卵子细胞骨架的影响。方法超薄型开口拉细麦管（super open pulled straw,SOPS）玻璃化冷冻12～14日龄小鼠窦前卵泡,解冻复苏后,将卵泡移入α基础培养液（αmini mumessential medium,α-MEM）＋10%胎牛血清（fetal calf serum,FCS）＋0.075I U/mL卵泡刺激素＋胰岛素-转铁蛋白-硒＋10mIU/mL人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotrophin,HCG）中培养,隔日换一半培养液。第12d将卵泡转入α-MEM＋10%FCS＋1I U/mL HCG＋5ng/mL表皮细胞生长因子,16～18h后收集卵子。免疫荧光技术测定卵子纺锤体和染色体结构。结果卵泡解冻后成活率为92.0%,卵泡体外生长速率、卵泡腔形成与新鲜卵泡相比均没有明显改变（P〉0.05）。冷冻对卵泡成熟后卵子骨架和染色体没有显著影响（P〉0.05）。结论SOPS玻璃化冷冻技术是一种高效可靠的卵泡冷冻方法。
- 邹长林葛红山陈雅张巍薛亚梅
- 关键词：卵泡小鼠
- 玻璃化冷冻法对小鼠MⅡ卵纺缍体及染色体的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨玻璃化冷冻法对小鼠MⅡ卵纺缍体及染色体的毒性。方法:收集小鼠MⅡ卵,分A组(新鲜对照组)、B组、C组和D组(玻璃化冷冻法冻融后分别培养0h、1h和3h固定)及E组、F组和G组(MⅡ卵经玻璃化冷冻液处理后分别培养0h、1h和3h固定),共7组,固定后免疫荧光标记纺锤体和染色体。结果:各组纺锤体正常率无显著差异(P>0.05),染色体正常率:B组显著低于A组(50%vs 87.5%,P<0.01),E组(47.62%)和F组(45%)显著低于A组和G组(75%)(P<0.05)。纺锤体和染色体均正常率:B组显著低于A组(41.67%vs 75%,P<0.05),E组(47.62%)和F组(45%)显著低于A组和G组(75%)(P<0.05)。B、C、D及E、F、G组的细胞骨架正常率依次提高,且玻璃化冷冻组(B组、C组和D组)和冷冻液暴露组(E组、F组和G组)相应时段(0h、1h及3h)比较(即B组与E组、C组与F组及D组与G组比较)均无显著差异(P>0.05)。结论:冷冻保护剂的细胞毒性在玻璃化冷冻损伤中起主要作用,但它对纺缍体的损伤是可逆的。
- 陈雅葛红山叶碧绿
- 关键词：玻璃化冷冻卵母细胞细胞骨架小鼠
- 不同冷冻方法对小鼠卵母细胞发育潜能及细胞骨架的影响
- 2007年
- 目的比较不同冷冻方法对不同成熟阶段小鼠卵母细胞复苏、胚胎发育及细胞骨架的影响,寻求最佳的卵母细胞冷冻方法。方法分别以SOPS玻璃化及慢速法冷冻小鼠中期(MII)和生发泡期(GV)卵母细胞。解冻复苏后,分别作体外培养成熟(IVM)、体外受精(IVF)或固定作免疫荧光标记,统计复苏率、成熟率、受精率、囊胚率及纺锤体等细胞骨架指标。结果玻璃化冷冻组MII卵和GV卵母细胞的复苏率及囊胚率均显著高于慢速冷冻组(P<0.05)。慢速冷冻组中MII卵复苏率显著低于GV卵(40.4%vs 57.1%,P<0.01)。但同一种冷冻方法保存的MII卵和GV卵的受精率及囊胚率相比,均无显著性差异(P>0.05)。两组的GV卵成熟率无显著差异。玻璃化冷冻组GV卵的纺锤体、染色体及纺锤体和染色体正常率均高于慢速冷冻组GV卵但无显著差异。结论玻璃化冷冻能有效改善冻融卵母细胞的复苏及胚胎发育;与MII卵比较,冷冻GV卵对细胞骨架损伤较小;两种冷冻方法均不影响GV卵冻融后成熟。
- 陈雅葛红山叶碧绿
- 关键词：玻璃化冷冻慢速冷冻细胞骨架
- 有无卵丘细胞对玻璃化冷冻后小鼠卵母细胞细胞骨架及体外发育能力的初步研究被引量：7
- 2007年
- 目的:探讨卵丘细胞在玻璃化冷冻中对小鼠卵母细胞发育潜能及细胞骨架的影响。方法:采用玻璃化冷冻技术,保存带卵丘细胞或完全剥除卵丘细胞的小鼠MⅡ期和GV期卵丘复合体/裸卵(COC/DO),复苏且GV卵体外培养成熟后分别作体外受精或免疫荧光标记检查纺锤体和染色体的完整性。结果:MⅡ-COC和GV-COC的复苏率均显著高于MⅡ-DO和GV-DO(分别为86.49%vs60.92%和85.94%vs64.93%,P<0.01)。GV-COC组的受精率、囊胚率均高于GV-DO组,且MⅡ-COC组和GV-COC组的纺锤体和染色体均正常率均分别高于MⅡ-DO组和GV-DO组,但无显著性差异(P>0.05)。结论:卵丘细胞在玻璃化冷冻卵母细胞中能有效减少冷冻对细胞骨架的损伤,并改善卵子复苏及胚胎发育潜能。
- 陈雅葛红山叶碧绿
- 关键词：玻璃化冷冻细胞骨架
- 玻璃化冷冻对不同成熟阶段小鼠卵母细胞的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:通过比较玻璃化冷冻对不同成熟阶段小鼠卵母细胞冷冻复苏、体外成熟、胚胎发育及细胞骨架的影响,寻求最佳的卵子冷冻方案。方法:玻璃化冷冻生殖泡期卵(GV)、成熟中期卵(MⅡ)及体外成熟卵(IVM-MⅡ),解冻复苏后,分别作体外成熟、体外受精(IVF)、胚胎培养或固定作免疫荧光标记,统计复苏率、成熟率、受精率、囊胚率、细胞骨架正常率。结果:GV冷冻组、MⅡ冷冻组及IVM-MⅡ冷冻组三组复苏率差异无显著性(65%vs 60.92%vs 69.93%,P>0.05)。GV冷冻组的成熟率显著低于对照组(79.6%vs 96.19%,P<0.01)。GV冷冻组、MII冷冻组及IVM-MⅡ冷冻组三组受精率均明显低于对照组(P<0.01),且IVM-MⅡ冷冻组受精率显著低于MⅡ冷冻组(18.06%vs 31.34%,P<0.01)。IVM-MⅡ冷冻组囊胚率低于MⅡ冷冻组和对照组,差异均有显著性(28.57%vs 52.38%,P<0.05;28.57%vs 57.14%,P<0.01)。GV冷冻组染色体和纺锤体均正常率均高于IVM-MⅡ冷冻组(53.85%vs 26.67%,P<0.05)。IVM-MⅡ冷冻组细胞骨架三项指标均显著低于对照组,差异均有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论:GV卵先玻璃化冷冻再体外成熟,其细胞骨架损伤较小,胚胎发育较好。
- 陈雅葛红山叶碧绿
- 关键词：玻璃化冷冻细胞骨架小鼠
