山东省自然科学基金(ZR2011HM014)
- 作品数：5 被引量：1H指数：1
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- β-synuclein对SH-SY5Y细胞酪氨酸羟化酶表达的影响
- 2015年
- 目的探讨β-synuclein对酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响。方法采用流式细胞技术检测稳定表达β-synuclein神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞(实验组)与神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞(对照组)内活性氧类物质(ROS)的含量。采用原位免疫荧光法、免疫组织化学染色法及蛋白免疫印迹法检测实验组与对照组细胞内TH的表达情况。结果流式细胞仪显示实验组的ROS峰值较对照组左移。原位免疫荧光法、免疫组织化学染色法及蛋白免疫印迹法检测结果显示TH在实验组中的表达水平较对照组低(P均<0.05)。结论β-synuclein可能抑制TH的表达。
- 倪明杨璐樊秀双满建梅郭军堂
- 关键词：帕金森病酪氨酸羟化酶
- A53T α-synuclein抑制SH-SY5Y细胞2型囊泡单胺转运体的表达
- 2016年
- 目的研究稳定表达A53Tα-synuclein对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中2型囊泡单胺转运体(VMAT2)蛋白表达的影响。方法构建A53Tα-synuclein真核表达载体,用脂质体lipofectamineTM2000转染SHSY5Y细胞,经G418筛选获得稳定转染单克隆细胞株;分别采用Western blotting及DCFH-DA染色检测细胞系A53Tα-synuclein过表达对VMAT2蛋白的表达及细胞内活性氧类物质(ROS)水平的影响。结果 Western blotting结果显示VMAT2的表达在稳定表达A53Tα-synuclein的细胞系中明显降低。DCFH-DA染色结果显示稳定表达A53Tα-synuclein细胞系内DCF signal(507.3±7.1)较对照组(410.7±10.5)明显增多(P<0.05)。结论 A53Tα-synuclein能够通过抑制VMAT2的表达,增加细胞内的ROS水平,在帕金森病的发病过程中发挥重要作用。
- 满建梅郭军堂张代娟陈安琪
- 关键词：帕金森氏病
- 稳定表达β-synuclein的SH-SY5Y细胞株的构建
- 2013年
- 目的构建稳定表达β-synuclein的SH-SY5Y细胞株。方法利用脂质体转染技术将质粒pcD-NA3.1-β-synuclein转染SH-SY5Y细胞,通过Zeocin进行抗性筛选。采用原位免疫荧光、免疫组织化学染色及Western blot杂交检测β-synuclein在SH-SY5Y细胞中的表达情况;通过MTT比色法检测β-synuclein稳定表达对SH-SY5Y细胞增殖的影响。结果原位免疫荧光、免疫组织化学染色及Western blot检测结果显示β-synuclein在SH-SY5Y细胞中的表达水平较对照组明显升高;稳定表达β-synuclein的细胞增殖程度较对照组明显增高(P<0.05)。结论β-synuclein在SH-SY5Y细胞中稳定表达,为后续的研究提供有用的细胞模型。为进一步研究β-sy-nuclein对帕金森病发病神经保护作用的研究奠定了良好的基础。
- 王桂芬周英泽陈安琪郭军堂
- 关键词：帕金森病
- 真核表达载体GV394-Nurr1的构建及鉴定
- 2016年
- 目的构建含人源性Nurr1基因真核表达载体GV394-Nurr1,检测其瞬时表达对细胞内活性氧类物质(ROS)水平的影响。方法 PCR扩增人Nurr1基因,克隆至T载体,测序正确后与真核载体GV394一起,经Bam HI和Xho I双酶切,T4 DNA连接酶连接,构建GV394-Nurr1;采用脂质体将GV394-Nurr1瞬时转染神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,RT-PCR检测Nurr1基因mRNA水平,通过DCFH-DA染色检测Nurr1对细胞内ROS水平的影响。结果 PCR及测序证实人Nurr1基因正确克隆至真核表达载体GV394;RT-PCR显示Nurr1基因mRNA水平在瞬时转染的细胞中明显增高;DCFH-DA染色显示瞬时转染Nurr1的神经母细胞瘤细胞的细胞内的ROS水平峰值较对照组明显左移。结论成功构建人源性Nurr1真核载体,可在SH-SY5Y细胞中表达并减少细胞内ROS水平,为进一步在体外研究Nurr1的功能及其与多巴胺能神经元的保护作用的关系提供了基础。
- 樊秀双郭军堂陈安琪
- 关键词：NURR1真核表达载体帕金森氏病
- β-synuclein对Ⅱ型囊泡单胺转移体表达的促进作用被引量：1
- 2015年
- 目的探讨β-突触核蛋白(β-synuclein)对Ⅱ型囊泡单胺转移体(VMAT2)表达的影响。方法通过2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色检测β-synuclein稳定表达对细胞内ROS水平的影响;采用免疫荧光双标法、免疫组织化学法及Western blotting检测VMAT2在稳定转染β-synuclein的SH-SY5Y细胞及正常SH-SY5Y细胞中的表达情况。结果 DCFH-DA荧光染色显示,稳定表达β-synuclein的细胞的荧光强度较正常SH-SY5Y细胞明显减弱。VMAT2在稳定转染β-synuclein的SH-SY5Y细胞中的表达水平较正常SH-SY5Y细胞明显升高。结论β-synuclein能够促进VMAT2的表达,减少胞浆内DA含量,抑制ROS产生,在帕金森病多巴胺神经元变性过程中对其起到保护作用。
- 杨璐周英泽倪明樊秀双满建梅郭军堂
- 关键词：帕金森病
