国家林业局948项目(2008429)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 相关作者：柳参奎管清杰郑恒周爱民卜媛媛更多>>
- 相关机构：教育部东北林业大学更多>>
- 发文基金：引进国际先进农业科技计划中央高校基本科研业务费专项资金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 星星草(Puccinellia tenuifolra)铵转运蛋白(PutAMT)及N、C末端缺失对NH_4^+吸收能力的影响被引量：1
- 2013年
- 铵是植物吸收利用的主要氮源之一,NH4+的吸收主要通过铵转运蛋白(AMT)进行运输。本研究克隆了星星草铵转运蛋白(PutAMT),以GFP为标记构建了植物表达载体,观察表明PutAMT蛋白明显定位于质膜,但是根据观察发现PutAMT蛋白的定位具有复杂性及多样性的特点。为了深入了解铵转运蛋白的结构对NH4+吸收能力的影响,构建了N、C及NC末端缺失的PutAMT(ΔNPutAMT,ΔCPutAMT及ΔNCPutAMT)的载体,转入酵母突变体菌株31019b进行NH4+吸收能力的实验,结果显示了全长PutAMT在低氮条件下具有较强的吸收NH4+的功能。N、C及NC末端缺失的突变体与全长PutAMT相比,对NH4+的吸收能力有下降的趋势。结果表明了,N、C末端对NH4+的吸收起到重要的作用。
- 卜媛媛孙博骆媛媛周爱民柳参奎
- 关键词：NH4+星星草
- 农杆菌介导的紫穗槐茎段愈伤组织遗传转化研究被引量：1
- 2010年
- 采用农杆菌介导法对紫穗槐茎段诱导的愈伤组织进行遗传转化研究。确定了卡那霉素临界耐受浓度为40mg/L。菌液浓度与侵染时间的正交试验结果表明:侵染菌液OD600为0.8、侵染时间为30min时转化效率最高,达17.95%。GUS染色检测分析表明:含pBI121-GUS质粒DNA农杆菌侵染转化的愈伤组织其抗性不定芽和再生植株根和叶均呈蓝色。转化植株叶PCR检测结果表明外源GUS基因已整合到紫穗槐基因组中。以上结果表明建立了以茎段诱导愈伤组织为转化受体、农杆菌介导的紫穗槐高效遗传转化体系。为了验证其可重复性,又进行了pBI121-GFP基因的转化,T0代再生植株PCR检测整合率达85%,在488nm蓝光源激发下转化株的顶芽产生绿色荧光,说明转入的基因在35S启动子下过量表达。此遗传转化体系可应用于转基因育种。
- 管清杰柳参奎
- 关键词：紫穗槐农杆菌茎段愈伤组织
- 水稻OsC2HC-1锌指蛋白基因的表达分析及对盐碱逆境的响应被引量：3
- 2013年
- 迄今,已从水稻中发现多种参与非生物胁迫反应的锌指蛋白基因,多为C2H2型,对于水稻C2HC型锌指蛋白基因的研究少有报道。本研究用RT-PCR技术从日本晴cDNA中克隆已知基因(AK103785)全长1019bp,编码339个氨基酸。经BLAST比对,确定其含有一个C2HC型锌指结构域,命名为OsC2HC-1,将OsC2HC-1::GFP融合导入酵母细胞和洋葱表皮细胞,亚细胞定位表明OsC2HC-1在细胞核中。实时荧光定量PCR检测80mmol/LNaCl,30mmol/LNaHCO3胁迫处理水稻叶和根中OsC2HC-1基因转录表达受其诱导显著增加。小量诱导优化pGEX-6p-3::OsC2HC-1在宿主菌BL21(DE3)中原核蛋白表达条件,表明诱导时间4h,28℃为最优条件,融合蛋白大量诱导纯化得到以包涵体的形式稳定存在,约为63kD的融合蛋白,为抗体的制作准备了条件。35S启动下过表达OsC2HC-1::GFP基因拟南芥萌发后期抗性分析实验表明,在125mmol/LNaCl,1mmol/LNaHCO3,3mmol/LNaHCO3胁迫下,过表达OsC2HC-1::GFP的拟南芥比野生型优势生长,表现出较强的盐碱抗性和抗氧化性,说明OsC2HC-1基因与抗盐碱性及抗氧化性有关。
- 郑恒管清杰柳参奎
- 关键词：水稻盐碱胁迫氧化胁迫原核表达及纯化
