国家高技术研究发展计划(2003-AA-205092)
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 相关作者：陈实朱珉王璐王树森吴雄文更多>>
- 相关机构：华中科技大学华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 核糖核酸干扰技术在移植免疫中的应用前景
- 2006年
- 朱珉陈刚陈实
- 关键词：移植免疫哺乳动物细胞双链RNA靶基因表达转基因小鼠培养细胞
- 可溶性HLA-G1抑制人自然杀伤细胞NK92对猪内皮细胞PED的黏附被引量：1
- 2006年
- 目的研究可溶性HLA-G1(HLA-G5)对人自然杀伤细胞(NK细胞)黏附到猪血管内皮细胞(PED)的抑制作用,从而降低人NK细胞对猪血管内皮细胞杀伤杀伤活性。方法利用核转染技术将pcDNA3-HLA-G5转入LCL721.221细胞株。以RT-PCR、Dot-ELISA技术分别在基因水平和蛋白水平检测HLA-G5的表达;以人类NK细胞系(NK92)效应细胞,猪内皮细胞系(PED)为靶细胞,检测NK92在静止和流动状态下对PED的黏附作用;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HLA-G5抑制NK细胞的杀伤活性。结果与未加入HLA-G5的对照组相比,NK92在静止和流动状态下对PED的黏附功能明显降低(P<0.01),且对HLA-G5组PED的杀伤效率均有明显下降(P<0.01)。结论HLA-G5可以通过抑制NK92对PED的黏附功能,来减轻NK92对PED的杀伤作用。
- 王树森房崇云曾梦华谢林李荣王璐朱珉吴雄文陈实
- 关键词：自然杀伤细胞异种
- 小分子干扰RNA转染猪血管内皮细胞优化体系的建立
- 2008年
- 目的探索建立高效、稳定的小分子干扰RNA（SiRNA）转染方案并建立优化的猪血管内皮细胞RNA干扰（RN～）转染体系。方法针对猪α1，3-半乳糖苷转移酶（α1，3-GT）基因合成数对SiRNA分子，运用不同转染体系（DOSPA、RiboJuice及Lipofectamine 2000）转染永生化猪血管内皮细胞系（PED）。分别应用流式细胞术、台盼蓝拒染试验及乳酸脱氢酶释放试验评价干扰α1，3-GT作用下PED的α1，3一半乳糖残基（α-Gal）表达情况以及SiRNA-脂质体转染对PED生长的影响。结果PED能有效发生特异性RNA干扰现象，且呈明显的剂量依赖性特征。SiRNA-1与脂质体Ribo—Juice在12nmol／L：6μl时，干扰效果最佳（67．3％～89．5％），整体量效优于DOSPA及Lipo—fectamine 2000转染体系。靶细胞转染SiRNA-1后48h时的α-Gal相对表达水平为10．5％，而SiRNA-2转染组则未见明显干扰现象。脂质体转染体系在转染后6～12h对靶细胞生长稍有影响，24h后细胞活性逐渐恢复。结论猪血管内皮细胞存在RNA干扰机制，RiboJuice转染体系是一种高效、低毒的SiRNA转染方式，为研究RNAi在抑制异种排斥反应中的应用奠定了基础。
- 朱珉曹荣华祁洪刚王璐胡枫陈栋刘斌陈刚张伟杰陈实
- 关键词：RNA干扰内皮细胞
- 可溶性组织相容性抗原-G1抑制人自然杀伤细胞释放穿孔素颗粒酶介导异种排斥反应
- 2006年
- 目的:研究可溶性组织相容性抗原-G1(sHLA-G1)抑制人自然杀伤细胞(NK细胞)释放穿孔素、颗粒酶,从而降低人NK细胞对猪血管内皮细胞的杀伤作用。方法:利用核转染技术将质粒pcDNA3-sHLA-G1转入LCL721.221细胞株,并提取sHLA-G1。以RT-PCR、斑点酶联免疫吸附(Dot-ELISA)技术分别在基因水平和蛋白水平检测sHLA-G1的表达;以人类NK细胞系(NK92)为效应细胞,猪内皮细胞系PED为靶细胞,用β-己糖氨酶释放实验检测sHLA-G1抑制NK92释放穿孔素、颗粒酶;单四唑(MTT)法检测sHLA-G1抑制NK细胞的杀伤活性。结果:与未加入sHLA-G1的对照组相比,NK92释放的β-己糖氨酶显著减少(P<0.05),且对sHLA-G1组PED的杀伤效率均有明显降低(P<0.01)。结论:sHLA-G1可通过抑制NK92释放穿孔素、颗粒酶以减轻NK92对PED的杀伤作用。
- 王树森房崇云曾梦华谢林李荣王璐陈松吴雄文陈实
- 关键词：自然杀伤细胞穿孔素颗粒酶
