国家自然科学基金(30600236)
- 作品数：12 被引量：32H指数：3
- 相关作者：李小鹰鲁晓春董建军李世英辛伟更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院首都医科大学附属北京安贞医院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 过表达肌浆网钙三磷酸腺苷酶抑制缺氧诱导心肌细胞凋亡的研究
- 2009年
- 目的研究过表达肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)能否提高心肌细胞对缺氧的耐受性,评价其对心肌细胞凋亡的影响。方法体外培养的SD乳鼠心肌细胞随机分为对照组、缺氧组、过表达SERCA2a组和SERCA2a+缺氧组,以携带SERCA2a基因的重组腺病毒转染心肌细胞48 h后对其进行缺氧处理。Western blot法检测细胞质内SERCA2a蛋白及Caspase-3表达的变化;膜联蛋白V/碘化丙啶双染色法及流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;激光共聚焦显微镜检测细胞质内Ca^(2+)浓度变化。结果与对照组比较,缺氧组SERCA2a蛋白表达水平显著降低,过表达SERCA2a组蛋白含量升高2.5倍(P<0.05),缺氧组Caspase-3蛋白表达升高53.1%,过表达SERCA2a后给予缺氧处理,Caspase-3蛋白表达降低39.7%(P<0.05)。与对照组比较,缺氧组心肌细胞凋亡率显著升高,与缺氧组比较,SERCA2a+缺氧组细胞凋亡率显著下降(P<0.05)。与对照组比较,缺氧组细胞质内Ca^(2+)荧光强度显著升高;与缺氧组比较,SERCA2a+缺氧组细胞质内Ca^(2+)荧光强度显著降低(P<0.05)。结论过表达SERCA2a可减轻细胞内Ca^(2+)超载和抑制Caspase-3激活,进而减少缺氧诱导的心肌细胞凋亡。
- 董建军鲁晓春刘秀华张振英李小鹰
- 关键词：肌浆网腺苷三磷酸酶缺氧心肌缺血细胞凋亡
- 去甲肾上腺素和血管紧张素Ⅱ对乳鼠心肌细胞表达肿瘤坏死因子α的影响
- 2008年
- 目的观察去甲肾上腺素（NE）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对培养乳鼠心肌细胞表达TNF-α的影响。方法取1～3天SD乳鼠100只进行心肌原代培养，分为7组，对照组、10～mol／L NE组（A组）、10^-6mol／LNE组（B组）、10^-7mol／LNE组（C组）、10^-7mol／L AngⅡ组（D组）、10^-8mol／L AngⅡ组（E组）和10^-9mol／L AngⅡ组（F组）。采用免疫组织化学法和RT—PCR测定上述不同浓度培养心肌细胞24、48h，评价不同浓度NE、AngⅡ对心肌细胞表达TNF-α的影响。用凝胶滞留实验验证NF-κB是否参与TNF-α的转录调控，筛选TNF-α可能启动子的位点。结果对照组心肌细胞TNF-α呈阴性，B、C、E、F组呈弱阳性，A组和D组呈阳性。对照组心肌细胞表达微量的TNF-α mRNA，NE和AngⅡ各组表达显著增高，并存在浓度和时间梯度。NE和AngⅡ各组的核蛋白与其上游含有潜在NF－κB结合位点的两段寡核苷酸的结合强于对照组。结论NE和AngⅡ能促使培养的心肌细胞表达TNF—α，NF-κB的核转移是激活TNF－α表达的共同通路。
- 李世英邱劲刘国仗
- 关键词：去甲肾上腺素肌细胞心脏肿瘤坏死因子
- 过表达肌浆网钙ATP酶治疗实验性慢性缺血性心力衰竭被引量：3
- 2011年
- 目的 研究肌浆网钙ATP酶2a（SERCA2a）基因过表达对慢性缺血性心力衰竭（心衰）心功能及心肌内质网应激（ERS）相关凋亡的影响.方法采用ameroid环束扎小型猪前降支制备慢性缺血性心衰模型.开胸心肌内注射重组腺相关病毒以过表达SERCA2a或对照报告基因绿色荧光蛋白.60 d后检测血流动力学、SERCA2a的表达和活性、心肌凋亡及ERS标志蛋白-分子伴侣GRp78、凋亡蛋白caspase-12的表达.结果基因转导后60 d,与心衰对照及报告基因组相比,转基因组SERCA2a蛋白表达和活性显著增高,心功能参数改善,心肌凋亡指数降低,伴GRP78和活化caspase12表达下降.结论过表达SERCA2a可改善慢性缺血性心衰的心脏功能,其机制可能涉及减轻ERS相关的心肌细胞凋亡.
- 辛伟鲁晓春李小鹰牛堃蔡吉梅
- 关键词：基因疗法
- 内质网应激与缺血性心脏病研究进展被引量：4
- 2009年
- 董建军李小鹰
- 关键词：内质网应激心肌缺血
- 心肌肌浆网Ca^2＋-ATP酶过表达对慢性缺血性心力衰竭小型猪心功能的改善作用被引量：15
- 2011年
- 目的研究心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)基因过表达对慢性缺血性心力衰竭(HF)小型猪心功能的改善作用。方法使用Ameroid缩窄环束扎小型猪前降支起始段,4周后行超声心动和血流动力学检查确认心功能下降,放免法测定血清炎性因子(TNF-α、IL-6)和神经体液因子(BNP、AngII、ET-1)的变化。将动物模型随机分为HF组、HF+EGFP组、HF+SERCA2a组,并设假手术组作为对照,每组各4只。HF+EGFP组和HF+SERCA2a组再次开胸,心肌组织内注射包含报告基因的rAAV1-EGFP和包含靶基因的rAAV1-SERCA2a各1ml(1×1012v.g/ml)。基因转导60d后,处死各组动物,行免疫组化和Western blotting检测SERCA2a在心肌中的表达情况;超声心动和血流动力学检测转导SERCA2a对心功能的影响,并用放免法检测上述炎性因子和神经体液因子的变化。结果成功建立小型猪慢性心肌缺血HF模型12只,Ameroid环植入4周后,超声心动和血流动力学数据提示模型组心脏舒缩功能显著下降(P<0.05),并伴有外周血上述炎性因子和神经体液因子的激活。基因转导后60d,SERCA2a蛋白在HF+SERCA2a组的表达量显著高于HF及HF+EGFP组(P<0.05),但与对照组比较无显著差异;其心功能参数LVEF、Ev/Av、±dp/dtmax较HF及HF+EGFP组显著增高(P<0.05),并伴随血清炎性因子和神经体液因子浓度的明显下降(P<0.05),提示心功能好转,心衰严重程度下降。结论过表达SERCA2a可改善慢性缺血性心力衰竭的心脏功能,可能成为慢性心肌缺血、心力衰竭治疗的潜在手段。
- 辛伟李小鹰鲁晓春牛堃蔡吉梅
- 关键词：心力衰竭基因疗法心肌缺血
- 大鼠左心室后负荷增加对心肌肿瘤坏死因子-α表达的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:分析腹主动脉缩窄诱导高血压大鼠心肌中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的合成,并探讨其调控机制。方法:选雄性SD大鼠,无菌条件下在腹主动脉放置银夹构建腹主动脉缩窄模型(腹主动脉缩窄组)。分别在术后1、3个月利用伊红-苏木精染色和磷钨酸苏木精染色评价左心室肥厚,免疫组化检测心肌中TNF-α含量,凝胶滞留实验筛选TNF-α可能的调控序列。结果:手术后3个月与假手术组大鼠相比,左心室出现显著肥厚,细胞面积分别为(429.4±57.6)μm2、(948.4±94.3)μm2,P<0.01。假手术组大鼠心肌TNFα-免疫组化染色为阴性,腹主动脉缩窄组手术后1、3个月大鼠心肌均显示强阳性。所有后负荷增加的心肌核蛋白与TNF-α上游序列的核转录因子(NF)-κB结合位点(-619^-591和-508^-481)的结合均高于后负荷正常的心肌。结论:左心室后负荷增加引起心肌TNF-α增高伴NF-κB核转移,TNF-α在心脏重构过程中起促进作用。
- 李世英邱劲刘国仗
- 关键词：肿瘤坏死因子主动脉缩窄心室重构肥大左心室
- rAAV1-SERCA2a转导对慢性心力衰竭beagle犬的治疗作用被引量：1
- 2009年
- 目的研究重组1型腺相关病毒(rAAV1)介导的肌质网钙离子ATP酶2a(SERCA2a)基因转导对慢性心力衰竭(HF)beagle犬的治疗作用及可能的机制。方法经快速右心室起搏建立beagle犬的慢性HF模型。16只beagle犬分为4组:对照组(n=4),HF组(n=4),HF+EGFP组(n=4)和HF+SERCA2a组(n=4)。应用开胸心肌内注射术,分别将携带EGFP基因rAAV1和携带SERCA2a基因rAAV1导入HF+EGFP组和HF+SERCA2a组的beagle犬心肌,剂量为1×1012/ml,而对照组和HF组未进行任何处理。基因转导后30d,应用超声心动图、血流动力学检测各组beagle犬的心脏收缩和舒张功能、Western blotting检测SERCA2a蛋白表达水平,TUNEL法检测心肌细胞的凋亡指数,免疫组织化学染色检测Bax的表达。结果在基因转导后30d,HF+SERCA2a组SERCA2a蛋白表达水平较HF组明显增加,随着SERCA2a表达增加心功能也得到改善,左室收缩压峰值(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(LV+dp/dtmax)和左室内压最大下降速率(LV-dp/dtmax)均接近对照组水平,较HF组明显改善(P<0.05)。SERCA2a基因治疗后心肌细胞凋亡指数、Bax表达比HF组显著降低(P<0.05)。结论SERCA2a基因转导能够治疗慢性心力衰竭,改善心功能,抑制心肌细胞凋亡。
- 米亚非李小鹰鲁晓春唐礼江付治卿
- 关键词：腺病毒科基因疗法
- 生长阻滞和DNA损伤诱导基因153在慢性缺氧诱导心肌细胞凋亡中的表达被引量：2
- 2009年
- 目的研究慢性缺氧诱导心肌细胞发生凋亡的情况,探讨生长阻滞和DNA损伤诱导基因(CHOP/GADD153)蛋白表达变化与心肌细胞凋亡的关系。方法将体外培养的心肌细胞置于95%N_2/5%CO_2混合气体培养箱内进行慢性缺氧处理,随机将心肌细胞分为对照组及缺氧6、12、24、48、72 h组。采用流式细胞术及DNA梯度技术检测心肌细胞凋亡情况.RT-PCR检测CHOP/GAD153 mRNA水平变化,western blot检测细胞凋亡过程中CHOP/GADD153蛋白表达变化。结果缺氧6 h组心肌细胞出现典型的凋亡特征;与对照组比较,缺氧12、24、48、72 h组心肌细胞凋亡数量明显增多(P<0.05):CHOP/GADD153 mRNA和蛋白表达水平也明显增加(P<0.05)。结论慢性缺氧可诱导心肌细胞发生凋亡,CHOP/GADD153可能参与了慢性缺氧诱导心肌细胞凋亡的信号传导通路。
- 董建军李小鹰鲁晓春刘秀华张振英
- 关键词：缺氧DNA损伤细胞凋亡转录因子逆转录聚合酶链反应
- 过表达肌浆网钙ATP酶对心肌细胞内质网应激的影响被引量：4
- 2009年
- 目的研究过表达肌浆网钙ATP酶2a（SERCA2a）对心肌细胞内质网应激的影响。方法构建含SERCA2a cDNA的重组腺病毒载体（Adv—SERCA2a），以缺氧和衣霉素诱导内质网应激，随机将体外培养的心肌细胞分为以下6组：正常对照组、缺氧组、衣霉素组、过表达SERCA2a组、SERCA2a＋缺氧组和SERCA2a＋衣霉素组。采用Western印迹法检测内质网应激蛋白GRP78及C／EBP同源蛋白（CHOP）表达水平，流式细胞术检测心肌细胞凋亡率，台盼蓝染色检测心肌细胞存活率。结果过表达SERCA2a＋缺氧组GRP78及CHOP蛋白表达较缺氧组分别低49．1％和52．7％，细胞凋亡率较缺氧组低66．0％，细胞存活率较缺氧组高13．4％，差异有统计学意义（均P〈0．05）；过表达SERCA2a＋衣霉素组GRP78及CHOP蛋白表达较衣霉素组分别低50．4％和66．1％，细胞凋亡率较衣霉素组低54．0％，细胞存活率较衣霉素组高6．7％，差异有统计学意义（均P〈0．05）。结论过表达SERCA2a通过下调内质网应激蛋白表达，降低心肌细胞内质网应激水平，缓解过度内质网应激介导的细胞损伤。
- 董建军鲁晓春刘秀华张振英李小鹰
- 关键词：内质网应激
- 肌浆网钙ATP酶基因转导治疗心力衰竭——从基础到临床被引量：1
- 2011年
- 心力衰竭（heart failure，HF）是多种心血管疾病晚期共同的临床综合征，严重危害着人类的健康。近年来，尽管药物治疗以及植入性机械装置治疗方面取得了长足的进步，但其发生率和致死致残率依旧居高不下。
- 辛伟李小鹰
- 关键词：心力衰竭心血管疾病基因转导肌浆网钙ATP酶
