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抗菌肽Thanatin基因与多角体蛋白Polyhedrin基因的融合表达及产物的抑菌活性分析被引量：1: 2011年; 为利用大肠杆菌表达系统高效表达抗菌肽Thanatin并避免其抗菌活性对宿主菌的影响,将抗菌肽Thanatin基因与家蚕核型多角体病毒多角体蛋白Polyhedrin基因融合克隆到表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a(+)-Thanatin-polyhedrin,转化大肠杆菌BL21(DE3)中表达。SDS-PAGE检测显示经诱导表达的菌体中有与融合蛋白理论值(35 kD)相符的目的条带。凝胶扫描分析目的融合蛋白以包涵体的形式表达,且诱导后6 h融合蛋白的表达量最大,约占菌体总蛋白量的30%。纯化融合蛋白用盐酸羟胺切割后初步纯化获得具有抗菌活性的Thanatin蛋白。研究结果表明家蚕核型多角体病毒多角体蛋白能够作为抗菌肽Thanatin融合标签介导其高水平表达,有助于利用基因工程技术大规模生产抗菌肽Thanatin。; 王成林李昕琦凌琳徐家萍; 关键词：抗菌肽 THANATIN 家蚕核型多角体病毒多角体蛋白抗菌活性

多功能抗菌肽及其分子改造的研究进展: 抗菌肽是生物体内产生的一种参与机体防御的多肽,广泛存在于自然界从低等细菌到高等动物人等各种生物中。具有抗革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、真菌、抗病毒、抗原虫、抗肿瘤以及参与脊椎动物免疫调节等多种功能,在农业和医药领域拥有...; 徐家萍王成林杨莹尤征英; 关键词：抗菌肽分子改造; 文献传递

维生素E对Aβ_(1-42)诱导N2a细胞凋亡的保护作用被引量：4: 2010年; 武福军詹永乐朱飞奇曾文静; 关键词：阿尔采末病维生素E AΒ1-42 细胞凋亡线粒体

家蚕和果蝇的抗菌肽cecropin B基因的原核表达及抑菌活性分析被引量：3: 2011年; 动物抗菌肽天蚕素(cecropin)因具有抗菌谱广、活性较强、不易产生耐药性等特点而成为新型抗菌剂开发的材料。为了探讨通过原核表达的途径高效获取天然cecropin,以重叠PCR方法分别人工合成家蚕(Bombyx mori)和果蝇(Drosophilamelanogaster)的抗菌肽cecropin B基因(CecB2)并克隆至T载体,测序确认后分别克隆至pET-32a载体,转化至E.coli BL21(DE3)宿主菌进行表达。通过SDS-PAGE和Western blotting检测到2种目的蛋白均得到表达,但表达量存在差异,Bradford法测定纯化后的BmCecB2融合蛋白和DmCecB2融合蛋白的质量浓度分别为0.6、2.0 mg/mL。经Ni-NTA亲和层析纯化和透析处理后的2种产物的抗菌活性存在明显差异:DmCecB2和BmCecB2的质量浓度为10 mg/mL时,对E.coli DH5α的抑菌圈直径分别为15、8 mm左右,最小抑菌浓度分别为0.05、0.10 mg/mL。以上结果说明DmCecbB2的原核表达效率及表达产物的抑菌活性均明显高于BmCecB2。用生物信息学方法分析家蚕和果蝇的CecB2蛋白在结构上存在差异,这可能是导致2种产物活性不同的主要原因。; 杨莹王成林徐家萍尤征英凌琳周敬波; 关键词：家蚕果蝇抗菌肽 CECROPIN 原核表达基因结构

家蚕Bms3a基因真核表达载体的构建及其在家蚕细胞和蚕体中的表达: 2011年; Bms3a基因可能在家蚕Bombyx mori抗病或细胞凋亡中有一定的作用。将融合有绿色荧光蛋白的Bins3a基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBac1中获得了pFastBac-IE1-Bms3a-EGFP真核表达载体,利用杆状病毒(Bac-to-Bac)表达系统筛选重组杆状病毒,以重组病毒感染家蚕BmN细胞和五龄幼虫,分别在感染24h和48h检测到有绿色荧光蛋白的表达,Western blot证明表达的融合蛋白在相对分子量约57kD处出现特异条带,与预计的蛋白理论值相符。结果表明BmS3A-EGFP融合蛋白在家蚕细胞BmN及幼虫体中得到高效表达。研究结果为进一步研究BmS3A蛋白的功能奠定了基础。; 尤征英周武松徐家萍杨莹凌琳王文兵; 关键词：家蚕真核表达杆状病毒表达系统

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国家自然科学基金(10975002)