国家自然科学基金(30170600)
- 作品数：12 被引量：156H指数：9
- 相关作者：甘莉丁勇徐春雷陈翠莲张成桂更多>>
- 相关机构：华中农业大学西南林学院中国科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金云南省重点学科资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学理学更多>>
- 一种简易的cDNA-AFLP分析方法被引量：5
- 2005年
- cDNA -AFLP结合了RFLP和RT- PCR的优点,在无需了解序列信息的同时,集中显示基因组表达序列的多态性差异,灵敏性高,重复性好。但实验室开展常规的cDNA- AFLP研究需要昂贵的设备和大量的投入。本试验改用小面积变性聚丙烯胺凝胶电泳检测扩增产物,银染显带法来完成cDNA- AFLP的全套技术体系,使cDNA -AFLP分析方法更为简便、经济并减少污染。
- 张成桂甘莉
- 关键词：CDNA-AFLP甘蓝型油菜分析方法
- ^(32)P的吸收、转运与甘蓝型油菜抗菌核病性的关系被引量：4
- 2006年
- 用32P示踪法研究了不同抗性油菜品种3叶期及盛花期感染菌核病后磷素吸收与转运的变化。研究结果表明:磷素向着生长旺盛部位转运;接种后植株磷素吸收增强而且磷素向着接种叶富集,感病品种甚于抗病品种;经相关性分析,第2位叶(接种叶)、第3位叶磷素放射性活度提高幅度显著且与抗性成显著或极显著负相关。这说明磷素的吸收、转运与抗性有密切的关系。在盛花期,花果中磷素放射性活度呈上升趋势,宁RS-1和宁油7号叶中的磷素放射性活度都先上升后下降,但前者上升的幅度较大,而且后期下降缓慢;宁油7号茎中的磷素放射性活度呈稳定下降趋势,而宁RS-1表现为先上升后又下降。这说明抗病材料有较强的生理活性来抵抗病害。
- 焦春香张成桂马平复陈翠莲甘莉
- 关键词：油菜抗病性菌核病磷素转运
- 以NIRS定量分析甘蓝型油菜、芥菜型油菜饼粕赖氨酸含量被引量：29
- 2005年
- 甘莉潘哲赵立徐久伟张玉傅廷栋
- 关键词：赖氨酸
- 甘蓝型油菜BnClo1基因克隆、表达载体的构建及原核表达被引量：7
- 2010年
- 【目的】克隆甘蓝型油菜(Brassica napus)油体钙蛋白(caleosin)基因BnClo1,并进行原核表达研究。【方法】在获得甘蓝型油菜BnClo1基因全长cDNA的基础上,根据BnClo1基因编码区设计1对特异引物,以甘蓝型油菜种子总RNA为模板,通过RT-PCR获得了约750bp的cDNA片段,T/A克隆后进行序列测定。随后将该蛋白成熟肽cDNA片段克隆到原核表达载体pTYB12中,构建融合表达载体pTYB12-BnClo1,转化到Escherichia coli ER2566(DE3)中进行表达。【结果】测序结果显示,RT-PCR获得的cDNA全长768bp,包含完整的开放阅读框738bp,编码245个氨基酸残基,caleosin分子量为28.1kD。原核表达产物经SDS-PAGE分析表明,以20℃、4mmol·L-1IPTG诱导该基因表达效果最好,诱导产物为一个与理论值相符的83.1kD的融合蛋白intein-caleosin。【结论】克隆了油菜BnClo1基因,并在大肠杆菌中进行了优化表达。为进一步纯化和鉴定目的蛋白,及研究其功能奠定了试验基础。
- 丁勇常玮刘小烛
- 关键词：甘蓝型油菜原核表达
- 植物油体及其相关蛋白的研究进展被引量：15
- 2008年
- 油体是植物种子贮脂的亚细胞颗粒,作为植物体中最小的细胞器贮存脂类(主要为三酰甘油),为随后的生命活动及活跃的代谢过程提供能量。油体结合蛋白是依附于油体表面的一类蛋白质,包括油质蛋白、油体钙蛋白、油体固醇蛋白-A和油体固醇蛋白-B。本文综述了植物油体的亚细胞结构、化学组成、大小及其类型,油体结合蛋白的结构特征与功能及其编码基因的表达调控等的研究进展。讨论了植物油体作为一种新型植物生物反应器在生物工程上的应用前景和存在的问题。
- 丁勇徐春雷甘莉
- 油菜油体钙蛋白基因BnClo1的克隆和表达被引量：14
- 2008年
- 应用同源序列克隆法设计同源简并引物,结合RT-PCR和RACE-PCR技术,从甘蓝型油菜中分离克隆了编码28.1kD油体钙蛋白(caleosin)的基因BnClo1。其全长1058bp的BnClo1 mRNA(GenBank中序列号为AY966447)包含完整的开放阅读框和3′末端Poly(A)尾巴结构,染色体DNA结构上含6个外显子和5个内含子。Northern杂交结果表明,油菜中BnClo1在种子形成中期开始丰富表达,在种子形成后期,即种子开始脱水成熟时期,高量稳定地表达。半定量PCR结果显示,BnClo1在油菜种子吸水膨胀后前2d的茎中明显表达。证明在油菜种子发育期间,BnClo1对mRNA的转录表达是由胚胎发育来调控的,具有显著的时空特性,并与油体的形成和积累密切有关。推测的caleosin蛋白为245个氨基酸残基(GenBank中序列号为AAY40837)组成的两性蛋白质,主要含3个结构域即由N末端1～16位氨基酸残基组成的α-螺旋和17～61位氨基酸残基组成的强亲水性的随机卷曲构成的N-末端亲水性结构域;由80～120位氨基酸残基组成的中间疏水性结构域和C-末端亲水性结构域。N-末端亲水性结构域包含一个潜在的结合Ca2+的EF-手结构。中间疏水性结构域包含一个潜在的脯氨酸-结(proline-knot)模体,在92～114位氨基酸残基组成的α-螺旋跨膜区域,推测在caleosin蛋白与单层磷脂层和油体锚定结合上及增加种子油体的稳定性上起着重要的作用。
- 丁勇陈庆波徐春雷常玮甘莉
- 关键词：RACE基因克隆NORTHERN杂交
- 甘蓝型油菜抗(耐)菌核病近等基因系的创建及抗病性分析被引量：10
- 2002年
- 以抗 (耐 )菌核病显著强于中油 82 1的中R 888、中R 783、宁RS 1作供体亲本 ,中油 82 1作受体亲本和回交亲本创建了甘蓝型油菜抗菌核病的近等基因系 经离体叶片接种菌核病菌抗性鉴定 ,结果表明 3个近等基因系 (NIL)与回交亲本抗菌核病差异极显著 (P <0 .0 1) ,其中以供体亲本中R 888品系抗病性最强 ,NIL的抗病性强弱的排列顺序与抗性亲本的相一致 油菜种子带菌率的测定结果显示 (中油 82 1×中R 888)BC5的带菌率为 0 也与供体亲本的带菌率大小顺序相一致 随机选择的油菜品种 (系 )种子中游离脯氨酸含量分析 ,结果表明 3大类型油菜的脯氨酸含量差异极显著 ,芥菜型油菜 >NIL(甘蓝型油菜 ) >白菜型油菜 >极感病甘蓝型油菜 .
- 甘莉伍新玲金良丰胜求陈翠莲汤华
- 关键词：甘蓝型油菜菌核病近等基因系抗病性带菌率抗病育种
- 毛细管电泳在蛋白质和核酸分析研究中的应用被引量：11
- 2003年
- 综述了毛细管电泳 (CE)在蛋白质肽图构建与鉴定、物化常数和结构分析、动力学研究、定性定量与微量制备中的应用以及在核酸的纯度检测、片段置备及PCR产物分析、DNA测序与基因突变检测中的应用。
- 金良甘莉
- 关键词：毛细管电泳蛋白质核酸
- 甘蓝型油菜防御酶活性变化与抗病性的关系被引量：18
- 2005年
- 对不同抗性油菜品种7-8叶期及盛花期感染油菜菌核病后及对照叶片中几种重要防御酶类活性变化的研究结果表明:7-8叶期叶片SOD活性极显著高于盛花期,而盛花期POD、PPO、PAL活性显著或极显著高于7-8叶期。与对照相比,感病品种处理叶片中SOD、POD活性显著增加,而抗病品种变化较小且因品种而异;7-8叶期及盛花期处理叶片中,各品种(系)PPO活性有不同程度的下降,其中抗(耐)菌核病品种(系)下降达显著水平,并且中R888达极显著水平;7-8叶期各品种(系)处理叶片中PAL活性没有明显变化,盛花期各品种(系)处理叶片中PAL活性均显著地下降,并以抗(耐)菌核病品种(系)下降较多,其中,中R888的PAL活性的下降达极显著水平。酶活与病斑直径的相关性分析也表明,品种抗性主要与7-8叶期对照叶片中SOD、POD活性及盛花期对照SOD、PPO、PAL活性水平较高有关,感病品种处理叶片中防御酶活性与对照相比增加比例较高,说明酶活增加比例与感病性有关。不同时期不同品种(系)防御酶活性的变化不同说明不同抗(耐)菌核病品种(系)在不同的发育时期存在不同的抗病机制。
- 丰胜求张艳徐久玮甘莉
- 关键词：油菜菌核病防御酶抗病性
- 油菜种子高质量总RNA提取的一种有效方法被引量：20
- 2006年
- 设计了1种从油菜种子中分离高质量总RNA的方法，有效的排除了种子中富含的多酚、多糖和蛋白质等杂质的污染。分离的总RNA经甲醛变性凝胶电泳和紫外光检测，可见28S和18SrRNA的2条清晰的带型，完整无降解，其A260／A280在1．8～2．0之间。研究结果证明，利用本方法提取的油菜种子总RNA具有很高的质量和纯度，且得率高，完全能满足后续的RT-PCR、全长基因的克隆和Northern blotting分析等分子生物学研究。
- 丁勇刘英杨鸯鸯甘莉
- 关键词：油菜种子RNA提取多酚多糖
