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不同产地金钗石斛多糖的含量比较研究被引量：18: 2009年; 目的:测定不同产地金钗石斛样品中的多糖含量,为金钗石斛的应用提供科学依据。方法:以多糖含量为指标,采用葡萄糖作标准品,应用苯酚-硫酸比色法测定各产地金钗石斛中的多糖含量。结果:不同产地的金钗石斛多糖含量有一定的差异,其中以贵州习水样品的多糖含量最高,海南东方霸王岭样品的多糖含量最低。结论:各地区生长环境对金钗石斛多糖的积累可能有一定影响。苯酚-硫酸比色法可以用来测定金钗石斛中多糖的含量。; 王燕燕徐红施松善王利思王峥涛; 关键词：金钗石斛多糖苯酚-硫酸法

金钗石斛遗传多样性研究的ISSR-PCR反应体系建立与优化被引量：11: 2007年; 目的:对影响金钗石斛ISSR-PCR扩增效果的一些因素进行优化,为进一步研究其遗传多样性奠定基础。方法:通过筛选引物并设定影响金钗石斛ISSR反应诸因子的不同浓度,检测ISSR不同反应体系的扩增效果;通过分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化,建立金钗石斛ISSR稳定可靠的反应体系。结果:金钗石斛较适宜的ISSR-PCR反应条件为:10 lμPCR反应体系,含5～15 ng模板DNA、2.0 mmol/L Mg2+、0.20 mmol/L dNTP、0.6～0.75 U Taq DNA聚合酶、1.0μmol/L引物。较适宜的退火温度为46～62℃。结论:Taq酶质量、DNA模板品质、退火温度等对ISSR反应结果具有较大影响。所建立的金钗石斛ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力较强、重复性好等特点,可用于金钗石斛的遗传多样性研究。; 魏丹红徐红王燕燕王峥涛; 关键词：金钗石斛 ISSR反应体系

扩增阻滞突变系统研究进展及其在中药鉴定中的应用被引量：2: 2010年; 就近年来国内外对扩增阻滞突变系统(ARMS)的研究进行总结,阐述了ARMS技术的原理、特点和发展,着重介绍了其在中药鉴定中的应用。与其他分子标记相比,ARMS技术具有简单、高效、准确与省时等优点,为中药鉴定提供了一条新的途径。; 王利思徐红王峥涛; 关键词：扩增阻滞突变系统中药

球花石斛的位点特异性PCR鉴别研究被引量：11: 2007年; 为建立球花石斛的DNA分子标记鉴别方法,本文根据测定及GenBank上登录的109种共计164个石斛样本的rDNAITS序列,设计了特异性鉴别引物QH-JB1和QH-JB2,并对球花石斛进行了位点特异性PCR鉴别研究。结果表明,当复性条件为63.5℃,1min时,只有球花石斛的模板DNA能被扩增出约300bp的阳性扩增带,而其他种石斛均为阴性。证明用本法鉴别球花石斛简便、省时,也适用于干燥球花石斛药材的鉴别,具有广泛的应用前景。; 应依徐红王峥涛; 关键词：球花石斛石斛位点特异性PCR

基于ITS序列鉴别石斛类药材被引量：20: 2014年; 获得高质量的DNA是中药石斛分子鉴别的关键所在。研究比较DNA提取方法(试剂盒提取、CTAB法),从石斛类药材中提取可用于PCR扩增的基因组DNA,基于ITS序列分析进行药材基原鉴别。结果表明,采用改良CTAB法(大量提取),从22批石斛类药材中富集并提取到基因组DNA,通过克隆测序获得ITS序列,同研究积累的石斛属植物ITS序列资料与Genbank序列数据库进行比对分析,根据序列相似性程度从12批黄草药材中鉴定石斛14种,近似种5种;从10批枫斗中鉴定石斛6种,近似种3种。该方法弥补了传统生药学鉴定方法在石斛类药材鉴别上的局限性,具有一定的应用前景。; 叶子卢叶王峥涛徐红胡之璧; 关键词：石斛 DNA提取分子鉴别

新型DNA分子标记技术及在遗传与育种研究中的应用被引量：8: 2010年; 对近年来发展的几种新型DNA分子标记技术RMAPD、SRAP、TRAP、CAPS、SCAR与RSAP的原理、特点及其应用进行了综述。这些新型DNA分子标记技术与传统的RAPD、AFLP标记相比,具有重复性高、操作简便等特点,应用前景广泛。; 王利思徐红王峥涛; 关键词：SRAP TRAP CAPS SCAR 分子标记

金钗石斛遗传多样性研究的随机扩增多态DNA-PCR反应体系的建立与优化被引量：3: 2008年; 目的对影响金钗石斛随机扩增多态DNA（RAPD）-PCR扩增效果的一些因素进行优化，为进一步研究其遗传多样性奠定基础。方法对金钗石斛RAPD分析中一些重要影响因素进行比较系统的构建和优化，建立金钗石斛RAPD稳定可靠的反应体系。结果金钗石斛较适宜的RAPD-PCR反应条件为：10μlPCR反应体系中，5-20ng模板DNA，3．0mmol·L^-1Mg^2＋，0．34mmol·L^-1dNTPs，0．6U Taq DNA聚合酶，1．5μmol·L^-1引物，较适宜的退火温度为36℃。结论所建立的金钗石斛RAPD反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力较强等特点，可用于金钗石斛的遗传多样性研究。以该优化的RAPD条件进行重复性实验，其实验结果重复性良好。; 王燕燕徐红魏丹红王峥涛; 关键词：金钗石斛

基于简单重复序列间扩增分子标记的金钗石斛遗传多样性研究被引量：3: 2021年; [目的]对不同产地金钗石斛进行遗传多样性分析为金钗石斛的种质资源保护及新品种选育提供参考。[方法]利用简单重复序列间扩增(inter simple sequence repeat,ISSR)分子标记技术对金钗石斛7个地区21个居群的152个样本进行分析,利用POPGENE1.32软件进行遗传多样性指数分析用NTSYSpc 2.10e软件构建居群间非加权配对算术平均法(unweighted pair group with arithmetic average,UPGMA)聚类图。[结果]筛选出不同产地金钗石斛10条ISSR引物,共扩增出多态性条带292条多态性百分率为100%。在物种水平,等位基因数是2.0000,有效等位基因数是1.3863期望杂合度是0.2398,香农信息指数为0.3783;在居群水平多态百分率为9.93%~47.95%期望杂合度为0.0411~0.1674,香农信息指数为0.0601-0.2519。遗传结构分析表明,21个居群遗传一致性为0.7149~0.9527,平均为0.8506,居群间的遗传变异(57.79%)略高于居群内(42.21%)。在物种水平上,金钗石斛较小的基因流(0.1826)导致了居群的分化。遗传距离聚类分析表明,金钗石斛的遗传距离与地理分布有一定的相关性。[结论]金钗石斛具有丰富的遗传多样性,栽培居群与野生居群的遗传多样性均较高表明金钗石斛在栽培过程中遗传多样性基本上没有丧失,居群间的遗传变异略高于居群内,说明金钗石斛居群在地区间有遗传分化的趋势。云南居群具有较高的遗传多样性建议在该地区进行大面积的人工栽培,以栽培品替代野生品作药用,缓解资源紧缺的状况。; 魏丹红徐红; 关键词：金钗石斛 ISSR 基因流人工栽培

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国家自然科学基金(30472150)

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