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儿茶酚对运动发酵单胞菌抗氧化防御体系的影响被引量：3: 2014年; 目的:研究不同溶氧量条件下儿茶酚对运动发酵单胞菌在抗氧化防御体系中的保护作用。方法:在全自动发酵罐(容积10 L)的发酵液(5 L)中添加0.1 mg/ml儿茶酚,控制发酵液溶氧量分别为0,15%,30%,50%,70%,温度30℃,pH 5.5,发酵36 h,分析菌体的超氧阴离子(O2·-)、羟基自由基(HO·)、DPPH自由基等清除率及丙酮酸、乙醇等代谢产物。结果:儿茶酚能明显增强菌体SOD活性(P<0.05)和稳定性,提高O2·-、HO·、DPPH等自由基清除率(P<0.05或0.01),降低菌体丙二醛(MDA)含量(P<0.05),减缓细胞膜脂质过氧化反应、细胞氧化损伤;儿茶酚能促进菌体的生长和乙醇发酵,增加丙酮酸到乙醇发酵的代谢流量。结论:在发酵液中添加儿茶酚,有利于提高有氧环境中的抗氧胁迫能力,保护细胞功能结构和正常代谢,提高其乙醇代谢流量和产率。; 王成涛张婵尹胜陈玲孙宝国; 关键词：儿茶酚运动发酵单胞菌溶氧量

溶氧量对酿酒酵母及其工程菌的β-苯乙醇合成代谢的影响及调控效应被引量：10: 2016年; 目的：研究溶氧量对酿酒酵母S288C及工程菌ARO8-10的β-苯乙醇合成代谢的影响及调控效应。方法：在5 L发酵罐中装液量60%,控制p H 5.0,温度30℃,通气比0.5～2.0 vvm,定时取样检测发酵液生物量、β-苯乙醇、L-苯丙氨酸转化率以及菌体相关代谢酶活性等。结果：通气条件在0.5～2.0 vvm范围时,野生型菌株S288C的生物量、异柠檬酸脱氢酶（ICDH）酶活力明显高于转氨酶基因ARO8与脱羧酶基因ARO10耦合过表达工程菌ARO8-10;ARO8-10的β-苯乙醇发酵产量、L-苯丙氨酸转氨酶、苯丙酮酸脱羧酶、G6PD、GK及PDC酶活力均明显高于S288C（P≤0.01）。在1.0 vvm通气条件发酵60 h时,ARO8-10的发酵液中葡萄糖已基本用尽,β-苯乙醇产量达到2.68 g/L,L-苯丙氨酸转化率达到47.3%,较S288C分别提高了44.4%和12.4%。1.0 vvm为β-苯乙醇发酵较适宜的通气条件。结论：酿酒酵母的β-苯乙醇代谢与艾利希途径、莽草酸途径、EMP、PPP途径TCA循环等密切相关,构成其合成代谢网络,代谢途经多种酶相互影响;ARO8和ARO10基因耦合过表达,增强了L-苯丙氨酸氨基转移酶和苯丙酮脱羧酶活力,有利于提高G6PD、GK及PDC酶活力,β-苯乙醇代谢流量及产量。; 王成涛梁婧如尹胜周娣孙宝国赵吉兴; 关键词：酿酒酵母溶氧量

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因的Candida tropicalis过量表达及其对木糖醇合成代谢的影响被引量：1: 2014年; 研究葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因g6pd过量表达对Candida tropicalis木糖醇生物合成代谢的影响。克隆Candida tropicalis CT16的g6pd基因,并将其与表达载体pYES-pgk重组连接,构建重组载体pYES-pgk-g6pd,LiAc/ssDNA/PEG方法转化导入C.tropicalis CT16,筛选阳性转化子,实现g6pd基因的过量表达。结果表明:发酵62 h,阳性转化子C.tropicalis SYG5的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活力提高了300%,发酵液中木糖醇质量浓度达到79.90 g/L,较野生型对照菌株的木糖醇产量提高了12.41%,木糖醇产率提高了44.94%。因此,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶在C.tropicalis木糖醇的合成代谢途径中发挥重要作用,增强g6pd基因的表达,可以明显提高菌体NADPH供应量和还原力,有利于木糖醇的生物合成。; 高雪楠张婵尹胜张秋晨王成涛徐宝财; 关键词：CANDIDA TROPICALIS 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶木糖醇

脱羧酶基因ARO10的过量表达及其对Saccharomy cescerevisiae的β-苯乙醇合成代谢影响被引量：5: 2014年; 为了验证脱羧酶在S.cerevisiaeβ-苯乙醇合成途径中的调控作用,本文从S.cerevisiae S288C中克隆脱羧酶基因ARO10,并构建由3-磷酸甘油酸激酶基因PGK1组成型强启动子控制的ARO10基因表达载体pYES2-Ppgk-ARO10,将重组载体导入S.cerevisiae S288C,研究ARO10基因过量表达对重组菌株中β-苯乙醇合成的影响。经摇瓶实验测定,携带pYES2-Ppgk-ARO10的转化子SP10在发酵60h时β-苯乙醇产量达到最大量1.0g/L,较野生型的对照菌提高16.3%。研究结果表明,脱羧酶是S.cerevisiae S288C中β-苯乙醇生物合成途径的关键酶之一,增加ARO10基因表达量有利于提高β-苯乙醇产量,研究为构建β-苯乙醇高产工程菌株奠定了重要基础。; 梁婧如尹胜刘丽王成涛文雁君; 关键词：Β-苯乙醇脱羧酶

分离纯化3-甲硫基丙醇的大孔吸附树脂筛选: 2014年; 通过静态吸附、解吸实验对7种不同类型的大孔吸附树脂D101,DM-08,DM-18,DM-130,D301,D318,330进行筛选.选择吸附、解吸率较高的树脂进行动力学特性研究,并比较了吸附等温线的差异.结果表明,D101型树脂综合性能最佳,适合3-甲硫基丙醇的富集.; 杨雪莲张凯丽李金玉张秋晨王成涛; 关键词：3-甲硫基丙醇大孔吸附树脂分离纯化

酿酒酵母工程菌产3-甲硫基丙醇的发酵条件优化被引量：1: 2014年; 为提高天然香料3-甲硫基丙醇的得率,本研究采用单因素和正交设计实验对表达脱羧酶酿酒酵母工程菌的发酵条件进行优化。确定了工程菌的最佳发酵培养基为:蛋氨酸5g/L,微量元素2%(v/v),酵母提取物4g/L,蛋白胨12g/L,KH2PO410g/L,K2HPO42g/L,葡萄糖20g/L,G418 400μg/L。最适发酵条件为:接种量10%,pH为5,发酵温度30℃,转速200r/min。优化后3-甲硫基丙醇的浓度可达4.38g/L,较初始条件提高了3.5倍。; 杨雪莲张凯丽李金玉张秋晨罗霞王成涛; 关键词：3-甲硫基丙醇正交实验发酵优化

4株红曲霉发酵产生次级代谢产物的分析被引量：2: 2014年; 目的为研究评价红曲霉产生次级代谢产物能力,选育优良菌株。方法通过建立的发酵液中γ-氨基丁酸(GABA)、红曲色素、monacolin K和桔霉素的比色法和高压液相色谱检测方法,比较了紫色红曲霉(Monascus purpureus)、丛毛红曲霉(Monascus pilosus)、红色红曲霉(Monascus ruber)、橙色红曲霉(Monascus aurantiacus)的液体发酵产生上述次级代谢产物能力。结果不同红曲霉菌株产生上述4种次级代谢产物的能力是不同的,4种红曲霉均可产生的红曲色素、monacolin K和桔霉素3种次级代谢产物,其中M.pilosus J2的monacolin K产量最高(8.1 mg/L)、桔霉素生成量最低(0.09 mg/L);M.purpureus Y4的红曲色素色价最高,为380U/mL;仅有紫色红曲霉Y4可代谢产生γ-氨基丁酸,产量约为0.2 g/L。结论不同红曲霉菌株产生γ-氨基丁酸、红曲色素、monacolin K和桔霉素这4种次级代谢产物能力存在较大差异。; 张郡莹杨强张婵刘国荣王成涛赵吉兴; 关键词：红曲霉次级代谢产物 Γ-氨基丁酸红曲色素桔霉素

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北京市自然科学基金(5122008)