国家自然科学基金(30772010)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
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- 相关机构：西安交通大学医学院第二附属医院西安医学院更多>>
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- 葎草花粉主要变应原核酸疫苗pcDNA3.1-LC2的构建及其免疫原性鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的构建葎草花粉主要变应原核酸疫苗pcDNA-LC2并鉴定其免疫原性。方法将pTripIEx2-LC2质粒用EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切得到LC2葎草花粉变应原基因片段,将其插入pcDNA3.1(-)真核表达载体,在鉴定重组质粒构建成功后,大量制备去内毒素核酸疫苗pcDNA3.1-LC2,应用pcDNA3.1-LC2核酸疫苗免疫小鼠,取免疫血清行双向免疫扩散实验,分析其免疫原性。结果通过测序确认构建pcDNA3.1-LC2中的672 bp的编码框碱基与原序列一致,没有突变及缺失。应用pcDNA3.1-LC2免疫BALB/c小鼠,经双向免疫扩散试验验证pcDNA3.1-LC2在小鼠体内可以表达并产生特异性抗体。结论成功的构建了葎草花粉主要变应原核酸疫苗pcDNA3.1-LC2,pcDNA3.1-LC2可在小鼠体内表达,并能产生葎草花粉变应原特异性抗体,具有良好的免疫原性。
- 张永红孙秀珍刘昀徐晶
- 关键词：支气管哮喘核酸疫苗
- 葎草花粉变应原的研究进展与展望被引量：3
- 2011年
- 变态反应性疾病是世界范围内重大卫生问题之一,近50%的变态反应性疾病患者对草类花粉过敏。葎草在我国分布广泛,是引起花粉症的主要致敏物之一。葎草花粉症患者呈逐年上升趋势,已受到人们广泛关注。本文从葎草花粉的致敏状况、主要致敏蛋白组分、葎草花粉症诊断和治疗方法的建立以及主要变应原重组等方面进行综述。
- 孙秀珍吴媛媛
- 关键词：葎草花粉重组变应原
- 葎草花粉变应原核酸疫苗通过诱导Foxp3^+Treg细胞分化介导对哮喘模型小鼠的免疫保护作用
- 2014年
- 目的构建葎草花粉变应原核酸疫苗pcDNA3.1-Hum,并探讨其是否通过诱导Foxp3+Treg细胞分化介导对哮喘模型小鼠的免疫保护作用。方法双酶切pTripIEx2-Hum质粒以获取目的基因,定向插入pcDNA3.1(-)载体以构建pcDNA3.1-Hum核酸疫苗并测序鉴定,转染至COS-7细胞以证实其表达。采用表达的目的蛋白刺激CD4+CD25-T细胞,验证其能否诱导Foxp3+Treg细胞分化。使用pcDNA3.1-Hum免疫正常小鼠,检测特异性IgE、IgG2a水平以探讨其免疫原性、变应原性;免疫哮喘模型小鼠以验证其免疫保护作用。结果测序证实该构建成功并可在真核细胞内表达;证实表达的目的蛋白可诱导CD4+CD25-T细胞向Foxp3+Treg细胞分化。动物实验提示pcDNA3.1-Hum可诱导特异性IgG2a,不能诱导特异性IgE;可明显降低哮喘模型小鼠气道炎症反应、气道高反应性;升高脾脏Foxp3+Treg细胞百分比;降低IL-4、升高IFN-γ水平。结论成功构建了pcDNA3.1-Hum核酸疫苗,表达的目的蛋白可介导Foxp3+Treg细胞分化。动物实验证实该疫苗具有免疫原性及免疫保护作用,并提示其通过诱导Foxp3+Treg细胞分化介导Th1倾向的免疫保护作用。
- 卢家美李满祥孙秀珍张永红刘昀徐晶张苏梅
- 关键词：变应性哮喘核酸疫苗免疫原性
- 葎草花粉主要变应原核酸疫苗pcDNA3.1-LC2的真核细胞表达和免疫分析被引量：1
- 2011年
- 目的验证葎草花粉主要变应原核酸疫苗(pcDNA3.1-LC2)能否在真核细胞内表达,并进行免疫原性、免疫保护作用、安全性等分析。方法应用磷酸钙沉淀法将pcDNA3.1-LC2转染至HEK293细胞,提取RNA并行RT-PCR,利用琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物,验证所分离出的条带与目的片段是否一致;应用pcDNA3.1-LC2免疫正常小鼠,ELISA方法测定血清中IgGI、gE浓度和脾组织匀浆中IL-4、IFN-γ浓度;制备葎草花粉变应性哮喘小鼠模型,应用pcDNA3.1-LC2对葎草花粉变应性哮喘模型小鼠进行免疫治疗,行肺泡灌洗液沉渣细胞计数,肺泡灌洗液沉渣滴片瑞士染色并嗜酸性粒细胞分类计数;取左肺上叶行肺脏病理HE染色,ELISA方法测定肺泡灌洗液中IL-4、IFN-γ浓度,并测定血清中IgGI、gE浓度。结果琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物,于750 bp处分离出一明显的条带,与目的片段一致;采用pcDNA3.1-LC2免疫正常小鼠后,血清IgG浓度升高,IgE浓度无明显变化,脾组织匀浆中IL-4浓度降低,IFN-γ浓度升高;免疫过程中未引起过敏反应、免疫损伤及急性肺损伤;应用该核酸疫苗免疫葎草花粉变应性哮喘小鼠模型,可明显降低气道炎症级别、减轻炎症细胞浸润、降低嗜酸性粒细胞百分比,引起血清中IgG浓度升高和IgE浓度降低,肺泡灌洗液中IL-4浓度降低和IFN-γ浓度升高,再次激发时哮喘症状明显减轻。结论 pcDNA3.1-LC2可在真核细胞内表达,诱导TH1/TH2平衡向TH1方向转化,具有免疫原性及免疫保护作用,安全性较好。
- 卢家美孙秀珍李满祥刘昀徐晶张永红吴媛媛
- 关键词：核酸疫苗
