中国水产科学研究院基本科研业务费专项基金(2012A05)
- 作品数：2 被引量：15H指数：1
- 相关作者：黄倢刘飞张宝存张晓华张庆利更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所中国海洋大学上海海洋大学更多>>
- 发文基金：中国水产科学研究院基本科研业务费专项基金国家现代农业产业技术体系建设项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 对虾肝胰腺细小病毒滚环扩增检测方法的建立
- 2014年
- 根据对虾肝胰腺细小病毒(HPV)保守基因序列,设计特异性的锁式探针及其扩增引物,优化反应条件,建立了肝胰腺细小病毒超分支滚环扩增检测方法。实验中采用一步法连接,探针在Taq DNA连接酶作用下,58℃连接40 min、62℃扩增30 min便可以扩增出明显条带。反应特异性验证实验表明,该体系能够特异性地检测出HPV,而不与供试的其他对虾病原发生交叉反应;灵敏度分析结果显示该方法的检测极限为105 copies/μl,与PCR检测方法相比,一步法连接的滚环扩增的灵敏度低两个数量级。该方法反应过程中温度变化次数少,基本都在等温条件下进行,不需要PCR仪,可发展成为在简便实验条件下使用的简易检测方法。
- 王勤涛张庆利杨昊霖刘天齐刘笋杨冰黄倢
- 关键词：对虾肝胰腺细小病毒滚环扩增
- 对虾6种病毒多重PCR检测方法的建立被引量：15
- 2014年
- 本研究针对养殖对虾6种病毒,包括白斑综合征病毒(WSSV)、传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)、肝胰腺细小病毒(HPV)、桃拉综合征病毒(TSV)、对虾杆状病毒(BP)和传染性肌肉坏死病毒(IMNV),选择各自的基因分别设计特异性引物和探针,首先进行了单一病毒的PCR验证,在此基础上建立了同时特异性检测6种对虾病毒的多重PCR检测体系。对反应条件进行优化并进行特异性和灵敏度的验证。50μl反应体系,Mg2+的最佳浓度为5mmol/L,ExTaq酶最佳用量为3.75U,反应程序中最佳退火温度为55.5℃。6种病毒之间以及与对虾基因组都存在很好的特异性。最终经试验验证,该系统的检测灵敏度对WSSV可达104拷贝,IHHNV可达102拷贝,HPV可达104拷贝,TSV可达103拷贝,BP可达105拷贝,IMNV可达105拷贝。虽然该多重PCR方法灵敏度不如单一的PCR检测高,但是通过实际样品检测验证了该方法省时、消耗较少,又不失准确性,在实际应用中具有可靠性和应用价值。
- 刘飞张宝存张晓华黄倢
- 关键词：WSSVIHHNVTSVBPIMNV
