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国家教育部博士点基金(20070062010)

作品数:9 被引量:16H指数:3
相关作者:陈锦英葛新贺靖冬张玉梅侯敏更多>>
相关机构:天津医科大学天津市疾病预防控制中心天津市胸科医院更多>>
发文基金:国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
相关领域:医药卫生生物学农业科学更多>>

文献类型

  • 9篇中文期刊文章

领域

  • 7篇医药卫生
  • 2篇生物学
  • 2篇农业科学

主题

  • 4篇肾炎
  • 4篇基因
  • 3篇细胞
  • 3篇杆菌
  • 2篇新基因
  • 2篇杂交
  • 2篇致肾盂肾炎大...
  • 2篇肾盂
  • 2篇肾盂肾炎
  • 2篇免疫
  • 2篇肠杆菌
  • 1篇电泳
  • 1篇动物
  • 1篇动物实验
  • 1篇毒力
  • 1篇毒力因子
  • 1篇抑制消减杂交
  • 1篇抑制消减杂交...
  • 1篇杂交技术
  • 1篇致病

机构

  • 7篇天津医科大学
  • 3篇天津市疾病预...
  • 2篇天津市胸科医...
  • 1篇福建医科大学
  • 1篇武警医学院
  • 1篇天津市第三中...

作者

  • 7篇陈锦英
  • 6篇葛新
  • 2篇赵凤玲
  • 2篇侯敏
  • 2篇董杰
  • 2篇张玉梅
  • 2篇谷超
  • 2篇杨东靖
  • 2篇姚萍
  • 2篇贺靖冬
  • 1篇吕莉琨
  • 1篇张维
  • 1篇林旭
  • 1篇高英堂
  • 1篇孙雯雯
  • 1篇吕本楠
  • 1篇高新蕾
  • 1篇王风山

传媒

  • 4篇中华微生物学...
  • 2篇Scienc...
  • 1篇环境与健康杂...
  • 1篇科学通报
  • 1篇中国慢性病预...

年份

  • 1篇2013
  • 2篇2011
  • 1篇2010
  • 3篇2009
  • 2篇2008
9 条 记 录,以下是 1-9
排序方式:
致肾盂肾炎大肠杆菌特异性片段R049聚集性分布的研究被引量:5
2008年
目的研究致肾盂肾炎大肠杆菌(UPEC)132特异性片段R049在UPEC菌株和正常人粪便分离的大肠杆菌菌株中的分布情况。方法对20株UPEC和40株粪便分离大肠杆菌采用PCR方法扩增R049片段,对R049阳性菌株检测编码5种毒力因子的基因(papC、fimH、hfy、aer、cnfl),并对其基因组DNA用XbaⅠ酶切,进行脉冲场凝胶电泳分析,继而用毛细管法将DNA片段转移至尼龙膜,利用地高辛标记的R049 ORF探针片段进行Southern杂交,分析杂交条带的分布特征。结果20株UPEC中有8株(40%)、40株粪便分离的大肠杆菌中有3株(7.5%)R049片段扩增阳性,两组差异有统计学意义(P〈0.01)。R049阳性菌株中,R049片段与5种UPEC毒力因子密切相关。Southern杂交结果表明3株粪便分离大肠杆菌R049阳性杂交带分别为150kb、15kb与240kb;8株UPEC中有6株阳性杂交带均为350kb,其余2株分别为280kb和25kb。结论UPEC132特异性片段R049在国内分离的UPEC菌株中具有共有性和聚集性分布的特征。
葛新陈锦英张玉梅高英堂侯敏贺靖冬
关键词:致肾盂肾炎大肠杆菌脉冲场凝胶电泳SOUTHERN杂交
致肾盂肾炎大肠埃希菌新基因R049免疫保护作用的研究被引量:4
2008年
目的克隆和表达致肾盂肾炎大肠埃希菌(UPEC)132新基因R049,研究R049重组蛋白对小鼠的免疫保护作用。方法利用PCR定向克隆方法构建R049基因原核表达系统,表达后通过镍亲和层析纯化获得R049重组蛋白,制备鼠多克隆抗体。重组蛋白与UPEC132全菌蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,继而R049重组蛋白免疫BALB/c小鼠,用同源菌对小鼠经尿道上行感染,比较免疫组与对照组小鼠尿液与肾脏细菌计数差异。结果成功构建重组株E.coli BL21(DE3)/pET32a-R049ORF,重组蛋白相对分子质量(MT)约为66.9×10^3,纯化后其纯度达到95%,制备多克隆抗体效价为≥1:102400。Western blot证实重组R049蛋白与UPEC132全菌蛋白均能与小鼠抗血清发生特异性反应。动物实验结果表明尿液和肾脏菌落计数在免疫组均明显低于对照组(P〈0.01,P〈0.05)。结论UPEC132的新基因R049具有一定的免疫保护作用,其机制有待进一步研究。
葛新张玉梅陈锦英林旭赵凤玲
关键词:克隆表达免疫保护动物实验
A novel gene R049 identified in uropathogenic Escherichia coli provides partial protection in mice from colonization
2011年
Uropathogenic Escherichia coli(UPEC) is the most common causative organism of human urinary tract infection(UTI).Several UPEC virulence factors have been identified,but more are yet to be found.We previously identified a novel 789-bp-long DNA fragment(named R049) in UPEC strain 132 using a suppressive subtractive hybridization technique.In the present study,we used genome walking to elongate the sequence of this fragment to obtain the whole gene sequence and examined the role of this gene product in generating protective immunity.Through bioinformatic analysis,we predicted that this gene is a 1311-bp open reading frame(ORF),which we designated ORFR049(GenBank accession No.:EF488001).We further constructed a prokaryotic expression system to express full recombinant R049 protein and isolated and purified the protein through IPTG induction and nickel affinity chromatography.Using mouse immunosera generated by the purified protein,we confirmed the natural expression and outer membrane localization of the protein in wild-type strain UPEC132 by Western blotting.To test the potential of this protein as a vaccine candidate,we immunized mice with the recombinant protein before challenging them with UPEC132 through the urinary tract.The results showed significantly reduced bacterial colonization in the urine and kidneys of the immunization group compared with the control group.However,the degree of renal pathological damage was not significantly improved in the immunized mice.Our study has identified a novel gene of UPEC which can generate protective immunity against UTI.This novel gene provides a promising new vaccine candidate.
CHEN JinYingGE XinZHANG YuMeiLIN XuZHANG WeiYANG Xi
关键词:保护性免疫免疫小鼠肾炎抑制消减杂交技术GENBANK
Comparison of infection of different cell lines by uropathogenic Escherichia coli被引量:3
2009年
Studying the interaction between uropathogenic Escherichia coli (UPEC) and uroepithelial cells is important in elucidating the pathogenesis of urinary tract infection. In this study, the African green monkey kidney cells (Vero), human kidney carcinoma cells (Ketr-3) and bladder carcinoma cells (EJ) were infected by UPEC132, a clinical strain isolated from Tianjin, China, and were compared for their capacities to allow the adherence and invasion by this strain. The results revealed that all these cell lines could be attached and invaded by UPEC132. The adherence rates for Vero, Ketr-3 and EJ cells were (49.20 ± 7.55)%, (55.22 ± 4.09)% and (73.20 ± 5.26)%, respectively, and invasion frequencies were (2.61 ± 0.32)×10-3, (3.00 ± 0.34)×10-3 and (3.25 ± 0.20)×10-3, respectively. The statistical analysis showed that the adherence rate for EJ cells was significantly higher than those for the other two cell lines (P<0.05), and the invasion frequencies for EJ and Ketr-3 cells had no statistical differences (P>0.05) but were higher than that for Vero cells (P<0.05). Three cell lines were detected for the receptors for P pili of UPEC by using indirect immunofluorescence. The results showed that receptors existed on the surfaces of all cell lines, and the highest distribution was found on the surface of EJ cells. Additionally, the invasion of EJ cells by recombinant UPEC132/pSELECT-GFP could be directly visualized using confocal microscopy. These data strongly implicated that EJ cells could be more easily infected by UPEC132 than the other cells, and thus could serve as a good experimental target for further investigation of UPEC infection.
GE Xin DONG Jie CHEN JinYing YAO Ping GU Chao YANG DongJing
关键词:大肠杆菌感染细胞株肾炎
尿道致病性大肠杆菌新基因R049特征的研究被引量:1
2011年
目的明确从国内分离的尿道致病性大肠杆菌(UPEC)132中发现的新基因R049的特征及其表达蛋白在菌体内的定位。方法提取UPEC132染色体DNA,鸟枪法构建文库,高通量焦磷酸法测序,Newbler软件拼接,进行生物信息学分析,确定R049相关片段的特征。提取UPEC132的内膜和外膜蛋白,与其全菌裂解物一起进行SDS-PAGE,用R049重组蛋白抗血清进行Westernblot,确定R049表达蛋白的菌体内位置。结果成功构建UPEC132染色体文库,获取R049-contig169022bp,与UPEC536染色体第233074至451502位碱基序列同源性较高,其中含有R049基因的20773bp片段替代相当于UPEC536染色体上PAIⅢ536的位置,G+C含量为46,97%,两端具有正向重复序列,并与插入元件整合酶基因和thrWtRNA基因相邻,包含25个ORF,命名为R049-GI。R049基因位于R049.GI的第13个ORF。SDS—PAGE和Westernblot分析显示R049基因表达相对分子质量为47.0×10^3蛋白是UPEC132的外膜蛋白。结论R049基因编码细菌的外膜蛋白,是UPEC132通过基因水平转移获得的染色体基因组岛的组成部分。
张维孙雯雯葛新吕本楠陈锦英
关键词:外膜蛋白
致肾盂肾炎大肠埃希菌对不同细胞感染能力的比较被引量:2
2009年
致肾盂肾炎大肠埃希菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC)与尿路上皮细胞之间的相互作用对阐明泌尿道感染的发病机制具有重要意义.本研究利用UPEC132感染非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)、人肾癌细胞(Ketr-3细胞)和膀胱癌细胞(EJ细胞),比较细菌对3种细胞的黏附和侵袭能力.结果表明,UPEC132对上述3种细胞均能黏附与侵袭,其黏附率分别为(49.20±7.55)%,(55.22±4.09)%和(73.20±5.26)%,侵袭指数分别为(2.61±0.32)×10-3,(3.00±0.34)×10-3和(3.25±0.20)×10-3.UPEC132对EJ细胞的黏附率高于另外2种细胞(P<0.05),对EJ细胞的侵袭指数与Ketr-3细胞无显著性差异(P>0.05),但高于Vero细胞(P<0.05).用间接免疫荧光法检测细胞表面P血型抗原物质,表明3种细胞均存在P菌毛受体,以EJ细胞表面的受体分布最多.激光共聚焦显微镜可直接观察到表达绿色荧光蛋白的UPEC132/pSELECT-GFP对EJ细胞的侵袭.由于UPEC132对EJ细胞的黏附能力最强,并直接证明具有侵袭性,因此选择EJ细胞作为研究对象为进一步研究UPEC致病机制奠定基础.
葛新董杰陈锦英姚萍谷超杨东靖
关键词:EJ细胞
尿道致病性大肠杆菌fimA基因的克隆与表达被引量:1
2013年
目的对尿道致病性大肠杆菌(UPEC)132编码Ⅰ型菌毛的结构基因fimA进行克隆与表达,建立免疫学检测方法。方法采用PCR方法扩增fimA基因,定向克隆pET32a载体,原核表达获得FimA重组蛋白;免疫小鼠制备FimA多克隆抗体;建立全菌ELISA方法,检测UPEC132的Ⅰ型菌毛表型。结果 PCR扩增fimA全基因,构建重组质粒pET32a-fimA,经转化构建重组菌E.coli BL21(DE3)/pET32a-fimA;经IPTG诱导表达及镍亲和层析纯化获得重组蛋白FimA;制备的FimA多克隆抗体效价≥1∶51 200,Western blot显示其良好的特异性;全菌ELISA获得满意结果。结论成功地克隆UPECⅠ型菌毛的结构基因fimA,制备的多克隆抗体为UPEC的检测和致病性的研究奠定了基础。
董杰吕莉琨杨东靖陈锦英
关键词:克隆
致肾盂肾炎大肠杆菌毒力因子的基因分布被引量:4
2009年
目的了解致肾盂肾炎大肠杆菌(UPEC)毒力因子基因的分布。方法用PCR方法对41株UPEC菌株和40株健康人粪便分离的大肠杆菌进行5种毒力因子基因及新基因R049的扩增检测,并进行对比分析。结果 UPEC组和健康人粪便分离大肠杆菌6种毒力因子基因papC、fimH、hly、cnf1、aer和R049的检出率分别为100%和2.5%,53.66%和5%,63.41%和10%,34.15%和5%,60.98%和35%,40%和7.5%;前者高于后者(P<0.01)。结论 UPEC毒力因子基因分布呈现多态性。
高新蕾陈锦英侯敏贺靖冬葛新王风山
关键词:尿路感染致肾盂肾炎大肠杆菌毒力因子
尿道致病性大肠埃希菌感染对人膀胱上皮细胞基因表达谱的影响被引量:2
2010年
目的 研究尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)菌株132与人膀胱上皮EJ细胞的相互作用,分析该菌株感染对EJ细胞基因表达谱的改变.方法 UPEC132感染EJ细胞,用倒置显微镜观察细菌与细胞的黏附,计算黏附率,并通过激光共聚焦显微镜观察UPEC132对细胞的侵袭.感染UPEC132的EJ细胞与未经细菌感染的细胞提取总RNA,用人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片分析差异表达基因,并采用RT-PCR对基因芯片数据进行验证.结果 UPEC132能够黏附于EJ细胞表面,黏附率为(73.20±5.26)% 激光共聚焦显微镜观察发现部分细菌位于细胞内部,证实该菌对EJ细胞具有侵袭性.UPEC132感染后的EJ细胞与未经感染的细胞相比,共有28个基因上调,1个基因下调,主要涉及细胞增殖、炎症反应、细胞凋亡等相关基因.结论 UPEC与尿路上皮细胞的相互作用激活宿主细胞内部多种应答反应与信号转导途径,本研究为深入探索UPEC致病机制奠定基础.
葛新陈锦英姚萍谷超赵凤玲
关键词:尿道致病性大肠埃希菌基因表达膀胱上皮细胞基因芯片
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