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人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞培养及生物学特性研究被引量：10: 2009年; 目的探讨人类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)的分离及生物学特性。方法分别取4例RA患者膝关节滑膜组织、1例软骨瘤患者膝关节滑膜组织和1名健康人膝关节滑膜组织,采用组织块培养法培养FLS,使用相差显微镜观察细胞形态,流式细胞术(FCM)检测培养细胞的表面标志,酶联免疫吸附法定量检测RA第4代FLS细胞培养液上清液白细胞介素-1受体I型(IL-1RI)和白细胞介素1β(IL-1β)水平。结果组织块培养法成功培养出FLS。RA患者FLS细胞4～7d细胞数量明显增加,8～12d细胞可以长满瓶底。第3代以后细胞均质性最好,3～7代细胞稳定且增殖活跃,8代以后增长缓慢并逐渐老化。软骨瘤患者和健康人滑膜组织培养7d后才有散在单个FLS细胞爬出,大约16d后FLS细胞可以长满瓶底。FCM分析RA第4代FLSCD90+细胞的百分率为99.04%,CD3+为2.73%,CD3-CD19+为0.29%,CD3-CD16+CD56+为2.81%,CD14+为5.89%,CD55+为54.17%。RA第4代FLS细胞培养上清液IL-1RI浓度为(158.63±20.32)pg/ml,IL-1β为(4.67±0.82)pg/ml。结论组织块培养法能有效分离RA患者FLS,FLS具有高水平表达CD90、IL-1RI和IL-1β的特性。; 黄宪章王前郑磊陈晓肖萍熊石龙包杰丁海明黄妩姣庄俊华; 关键词：成纤维样滑膜细胞流式细胞术白细胞介素1Β

IL-1Ra和CDKIs在类风湿性关节炎基因治疗中的应用被引量：2: 2008年; 黄宪章王前; 关键词：类风湿性关节炎 IL-1RA 基因治疗 IL-1受体拮抗剂抗炎细胞因子

慢病毒载体介导的小鼠骨髓树突状细胞RelB基因沉默被引量：6: 2008年; 目的:利用慢病毒载体沉默小鼠骨髓树突状细胞(DC)的RelB基因,建立RelB基因低表达的骨髓致耐受DC,为自身免疫病的防治提供新方法。方法:设计小鼠RelB基因干扰的靶序列R5,合成并克隆到慢病毒载体上,与慢病毒的包装材料在293FT细胞中包装成病毒颗粒,收集病毒上清,测定病毒滴度,然后包装慢病毒感染DC,RT-PCR和免疫荧光方法检测,灰度扫描并用软件分析RelB基因的表达水平,未成熟DC作对照组,选择T6包装病毒为RNAi的阴性对照。结果:RT-PCR和免疫荧光方法发现R5病毒感染的DCRelB基因表达水平与未成熟DC基因表达水平接近,低于成熟DC的表达水平(P<0.05),而实验对照T6组病毒感染的DC其RelB基因表达水平高于未成熟DC(P<0.05)和R5病毒转染DC组(P<0.05)。结论:小鼠骨髓DC表达的RelB基因被慢病毒载体有效沉默,有望成为DC免疫治疗的新载体。; 包杰王前郑磊裘宇容曾方银杨春莉黄宪章; 关键词：慢病毒载体树突状细胞基因沉默

类风湿性关节炎患者外周血IL-1RI水平的变化被引量：6: 2008年; 目的探讨外周血白细胞介素-1受体I型(IL-1RI)水平与类风湿性关节炎的相关性。方法应用酶联免疫吸附技术检测类风湿性关节炎(RA)患者94例,其中活动期和非活动期各47例;系统性红斑狼疮(SLE)患者40例,其中活动期和非活动期各20例;急性上呼吸道感染(AURTI)患者20例;健康体检者20名的外周血血清IL-1RI水平。结果各组间差异均有统计学意义(P<0.001)。RA组、SLE组、AURTI组和健康对照组均数间两两比较,RA组与各组间均有统计学意义(P<0.01),其余各组间差异均无统计学意义(P>0.05)。RA和SLE按临床症状分活动期和非活动期后各组均数间两两比较,RA活动期组与各组间差异均有统计学意义(P<0.05),RA非活动期与各组间差异均有统计学意义(P<0.05),其余各组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论外周血IL-1RI与类风湿性关节炎免疫炎症相关,可以作为RA的诊断和疗效判断指标之一。; 黄宪章王前郑磊丁海明潘婉仪许羚雁庄俊华; 关键词：类风湿性关节炎

人CDK2基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定被引量：3: 2008年; 目的:构建人细胞周期素依赖蛋白激酶2(CDK2)基因RNA干扰慢病毒载体。方法:利用Invitro-gen公司在线软件设计人CDK2(NM001798)shRNA序列,退火形成dsoligo后克隆到pENTRTM/U6载体的黏性末端,测序,再与慢病毒载体重组,测序鉴定,在脂质体的介导下将慢病毒的包装混合物和CDK2基因重组慢病毒载体转染293FT细胞,包装成病毒后,收集细胞培养上清液,测定病毒滴度。结果:测序证实pENTRTM/U6-CDK2-shRNA为阳性克隆,与慢病毒载体重组后测序结果显示也为阳性克隆,CDK2基因重组慢病毒载体传染293FT细胞后48h,细胞培养上清液,病毒的滴度为6×108TU/L。结论:成功构建人CDK2基因RNAi慢病毒载体,为研究CDK2在自身免疫病中的应用提供了稳定的转染细胞载体。; 黄宪章王前郑磊陈晓熊石龙包杰丁海明黄妩姣庄俊华; 关键词：基因 CDK2 RNA干扰慢病毒载体

类风湿性关节炎的免疫学检测方法进展被引量：12: 2008年; 类风湿关节炎（RA）是一种以关节滑膜炎为特征，以慢性多发性关节炎为主要临床表现的一种全身免疫性疾病。现对RA免疫学的抗原抗体检测作一综述。; 许羚雁黄宪章庄俊华; 关键词：免疫学试验

类风湿关节炎患者IgM-RF、IgA-RF、IgG-RF、IL-1RI、CDK2的检测及ROC评价: 2009年; 目的探讨检测外周血类风湿因子(IgM-RF、IgA-RF、IgG-RF)、白细胞介素-1受体Ⅰ型(IL-1RI)和周期素依赖性蛋白激酶2(CDK2)水平对类风湿关节炎(RA)的实验诊断价值。方法对象包括RA患者94例,其中活动期和非活动期各47例;系统性红斑狼疮(SLE)患者40例,其中活动期和非活动期各20例;急性上呼吸道感染(AURTI)患者20例;健康体检者20名(对照组)。检测所有对象外周血血清IgM-RF、IgA-RF、IgG-RF、IL-1RI(ELISA定量检测)、CDK2(时间分辨荧光免疫分析)水平。对结果进行统计分析,绘制ROC曲线,计算曲线下面积(AUC)。结果RA活动期患者组与缓解期患者组比较CDK2、IgA-RF有统计学意义(P<0.05)。RA活动期与RA缓解期患者组比较、RA患者组与SLE患者组比较、RA患者组与AURTI患者组比较、RA患者组与对照组比较,AUC分别为:IgM-RF(0.561,0.814,0.799,0.888)、IgA-RF(0.596,0.678,0.729,0.850)、IgG-RF(0.614,0.718,0.692,0.791)、IL-1RI(0.646,0.691,0.762,0.835)、CDK2(0.803,0.753,0.741,0.840)。结论IgM-RF可能对RA具有较高的诊断和鉴别诊断意义,而CDK2可能对RA分期的鉴别诊断有较高价值。; 徐宁黄宪章许羚雁庄俊华; 关键词：类风湿因子受试者工作特征曲线

Akt/PKB信号通路调控机制的研究进展被引量：12: 2009年; 赵学芹黄宪章; 关键词：AKT信号通路调控网络苏氨酸蛋白激酶 PKB 调节细胞因子

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广东省自然科学基金(07004832)