国家杰出青年科学基金(30925037)
- 作品数：12 被引量：47H指数：4
- 相关作者：钱其军刘韬金华君陈晚华刘辉更多>>
- 相关机构：第二军医大学浙江理工大学苏州大学更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肝癌患者脂肪干细胞重编程为诱导多潜能干细胞被引量：2
- 2011年
- 目的重编程肝癌患者来源的脂肪干细胞为诱导多潜能干细胞。方法包装携带Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc基因的反转录病毒,将病毒感染脂肪干细胞并培养诱导后的细胞,采用碱性磷酸酶染色、定量PCR和原位免疫荧光实验鉴定诱导的克隆样细胞。结果诱导的克隆样细胞表达碱性磷酸酶,定量PCR证实克隆样细胞表达胚胎干细胞多能性基因,免疫荧光实验证实其表达Oct4和Sox2。结论肝癌患者来源的脂肪干细胞可高效重编程为诱导多潜能干细胞,且脂肪干细胞可作为培养诱导多潜能干细胞的滋养细胞,为提高成体细胞重编程效率和建立基于诱导多潜能干细胞的肝癌模型研究提供了平台。
- 付玉华范丽丁丽陈艳周秀梅王欢刘韬王敬晗李琳芳钱其军
- 关键词：肝肿瘤脂肪干细胞重编程反转录病毒
- 肿瘤休眠细胞:复发根源和治疗靶标被引量：6
- 2011年
- 随着肿瘤早期诊断及治疗水平的提高,肿瘤患者的无病生存率得以提高,但仍面临着较高的肿瘤复发风险。越来越多的证据显示,这些长期无病生存的肿瘤患者(甚至某些所谓健康人)的机体内存在着一种肿瘤休眠细胞,这些细胞被认为是导致肿瘤复发的主要根源。肿瘤休眠细胞是一群存在于患者或健康人群体内的数量极少且难以检测的静止细胞,目前对其形成的机制及休眠活动的时相规律均不十分清楚。对于患者而言,骨髓和外周血取材比较容易,所以人们通常会针对骨髓及外周血中的肿瘤休眠细胞建立相对敏感的检测方法。有证据显示,免疫抑制、新生血管生成及外科手术等因素可使肿瘤休眠细胞激活,从而引发肿瘤的复发和转移。肿瘤休眠细胞已成为我们根治肿瘤及预防肿瘤发生或复发的重要靶标。然而,由于处于休眠期的肿瘤细胞不发生活跃增殖,因此传统放、化疗不能将其有效清除,从而对肿瘤的彻底治愈造成了极大的困难。研究表明,免疫监控与肿瘤休眠现象高度相关,因此,针对肿瘤休眠细胞的肿瘤免疫过继细胞治疗将给肿瘤防治带来根本性的变革。我们相信,随着对肿瘤休眠细胞研究的不断深入,将会出现高效清除肿瘤休眠细胞或使肿瘤细胞永远休眠的崭新治疗方案。
- 钱其军刘新垣
- 关键词：肿瘤复发
- 人Oct4与细胞穿膜肽融合蛋白的表达
- 2010年
- 目的通过原核表达获得人Oct4(hOct4)与细胞穿膜肽融合蛋白,优化其表达方法并观察其穿膜效果。方法通过基因工程手段构建了pET原核表达载体,利用BL21(DE3)和Rosetta2(DE3)蛋白表达菌表达蛋白。Ni亲和纯化方法纯化蛋白,蛋白质印迹分析检测融合蛋白组成。将融合蛋白用罗丹明染色后加入人正常皮肤成纤维细胞株BJ观察其穿膜进入细胞情况。结果构建了pET21a(+)-hOct4-11R-His和pET21a(+)-EGFP-11R-His表达载体,转入大肠杆菌中后诱导获得了hOct4-11R-His和EGFP-11R-His融合蛋白,经蛋白质印迹分析检测表明融合蛋白正确。经BJ细胞测试,观察到融合蛋白进入细胞中。结论成功获得了hOct4-11R-His和EGFP-11R-His融合蛋白,且融合蛋白能够高效进入BJ细胞并聚集于细胞核周围。
- 周承亮徐凤青王春红刘韬彭新荣钱其军
- 关键词：重组融合蛋白质类
- 肿瘤抗体治疗的现状与发展趋势被引量：2
- 2011年
- 单克隆抗体在过去的30多年里经历了快速的发展,从杂交瘤技术的建立起,科学家先后研发出鼠源性、嵌合型、人源化以及全人化抗体技术。目前FDA批准上市的30个抗体中有10个用于肿瘤治疗,抗体治疗也被认为是肿瘤治疗最有效的方法之一。抗体偶联小分子、化疗药物等也成为人们的研究重点,他们展现出比单个治疗更为有效的临床反应。然而,肿瘤治疗抗体仍然存在着体内半衰期短、杀伤作用不够、难以渗透实体瘤、治疗靶点少、治疗成本高等问题。未来抗体研究的重点将是研制低免疫原性、高亲和性、多效价多克隆、更稳定和低成本的抗体。
- 徐增辉钱其军
- 关键词：抗体肿瘤
- 肿瘤过继细胞治疗——老故事新演绎被引量：26
- 2011年
- 肿瘤过继细胞治疗(adoptive cell therapy,ACT)较早被提出并一度盛行,但长期以来其疗效不佳,逐渐淡出人们视野。近年来,肿瘤ACT取得长足进步,利用T细胞过继免疫治疗黑素瘤获得令人鼓舞的成功;利用细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cell,CIK)治疗癌症也在我国兴起,并取得可喜成绩。在肿瘤ACT领域,仍面临选择什么样的效应细胞、如何高效诱导筛选T细胞克隆、是否采用T细胞TCR转基因技术、如何通过武装化T细胞提高疗效、如何评判肿瘤ACT疗效等方面的问题。
- 钱其军吴孟超
- 关键词：肿瘤T细胞
- 神经干细胞的干性维持机制被引量：1
- 2012年
- 背景:神经干细胞具有强大的自我更新和多向分化潜能,是治疗神经系统疾病的研究热点。目的:总结神经干细胞的生物学特性及干细胞维持和分化机制的研究进展。方法:由第一作者检索PubMed数据库1994-01/2011-05及清华同方中文系列数据库2000-01/2011-05涉及神经干细胞的生物学特征及干细胞维持和分化的文献,英文关键词为"Neural stem cells,cellfactors,ips,microenvironment",中文关键词为"神经干细胞,细胞因子,诱导多能干细胞,微环境",排除陈旧性、重复性文献,保留55篇进行归纳总结。结果与结论:神经干细胞是神经系统发育过程中保留下来的具有自我更新和多向分化潜能的原始细胞,其免疫原性低、无致瘤性,在神经系统类疾病的治疗方面拥有巨大的应用前景。神经干细胞自我更新与多向分化潜能的维持(干性维持)受其内源因子的调控,这些因子包括Tlx、Sox2、Hes、Bmi-1等转录因子,同时这一干性维持过程也受外源性信号的调控,外源性信号主要是指神经干细胞所处的微环境,包括神经干细胞周围基质细胞、细胞因子等方面。
- 高海霞金华君钱其军
- 关键词：神经干细胞诱导多能干细胞微环境细胞因子
- TIL肿瘤过继细胞治疗研究进展被引量：4
- 2012年
- 肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)是从肿瘤组织中分离出的CD4+、CD8+T细胞,在体外经白介素2(interleukin-2,IL-2)的刺激、活化、扩增后可应用于临床肿瘤过继细胞治疗(adoptive cell therapy,ACT)。为避免IL-2在扩增中的大量使用使得TIL中CD4+CD25+Treg数量增加所产生的免疫耐受现象,现在研究集中于改进TIL的体外扩增方法;研究显示,"年轻"型TIL(young TIL)靶向肿瘤的特异性更高,故其是潜在的扩增对象。临床使用TIL过继治疗前需对肿瘤患者进行全身放疗处理;TIL过继治疗联合化疗药物(如环磷酰胺,氟达拉滨等)对自体淋巴清除(lymphodepletion)的肿瘤患者疗效显著,将成为以后肿瘤免疫治疗的主要方向;除化疗药物外,还可开发肿瘤疫苗、单克隆抗体等联合TIL过继治疗。本文主要介绍TIL培养体系、功能改进的研究以及TIL过继治疗联合化疗药物在临床恶性肿瘤治疗中的应用,讨论其可能存在的问题并展望未来的发展方向。
- 陈晚华刘辉汪毕钱其军
- 关键词：TIL体外扩增化学免疫治疗
- 人HBV、HBx定向敲入p53位点大鼠胚胎干细胞株的建立
- 2012年
- 目的建立人HBV、HBx定向敲入p53位点的大鼠胚胎干细胞株,为建立相关动物模型奠定基础。方法通过PCR方法扩增出人p53基因上下游同源臂、HBV全基因组序列、HBV的X蛋白编码基因(HBx),将其插入本实验室自主构建的基因打靶通用载体pKO中,分别构建pKO-gHBV及pKO-X打靶载体。载体经SalⅠ酶切线性化后,电转入状态良好的大鼠胚胎干细胞株中,经3轮药物筛选,获得单细胞克隆。通过PCR技术筛选获得阳性细胞克隆,并进行支原体污染鉴定和核型分析。结果成功构建pKO-gHBV及pKO-X打靶载体;电转大鼠胚胎干细胞株,经3轮药物筛选,分别挑取若干细胞克隆,其中2个pKO-X细胞克隆和1个pKO-gHBV细胞克隆经PCR鉴定、支原体检测和核型分析确定结果正确。结论成功建立了人HBV、HBx定向敲入p53位点的大鼠胚胎干细胞株,为后续建立动物模型奠定了基础。
- 王艳叶真龙金华君刘韬李林芳钱其军
- 关键词：HBX基因P53基因胚胎干细胞
- 诱导多潜能干细胞(iPSCs)的研究与应用进展被引量：4
- 2011年
- 诱导多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)是体细胞在外源因子作用下,经直接细胞核程序重整而重新获得多潜能的干细胞.iPSCs在疾病的模型建立与机理研究、细胞治疗、药物的发现与评价等方面有着巨大的潜在应用价值.在过去几年中,科学家们致力于改进体细胞重编程技术并取得许多突破.然而,为实现其在临床上的应用,必须克服体细胞重编程效率低和iPSCs成瘤风险两大挑战,而且重编程机制有待进一步阐明.结合iPSCs最新研究成果,评述了有关领域国内外研究进展,重点讨论当前存在问题,并展望未来研究方向.
- 付玉华周秀梅徐凤青钱其军
- 关键词：体细胞重编程疾病模型细胞治疗小分子
- 表达人IL-21的细胞因子诱导的杀伤细胞对裸鼠肝癌的治疗研究被引量：3
- 2012年
- 目的探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK细胞)作为人IL-21(hIL-21)基因的载体治疗肝癌的可行性。方法构建携带hIL-21、CopGFP基因的质粒pDC759-hIL-21、pDC759-CopGFP并分别与pAd5、pAd5F35共转染HEK293细胞,包装表达hIL-21、CopGFP蛋白的Ad5、Ad5F35病毒。分离培养CIK细胞并绘制生长曲线,将携带CopGFP基因的Ad5、Ad5F35病毒以不同MOI(0、1、5、10、50、100、1 000)感染CIK细胞;将携带hIL-21基因的Ad5、Ad5F35病毒以不同MOI(0、1、5、10、20、50)感染SMMC-7721细胞48h后检测hIL-21蛋白的表达;将携带hIL-21基因的Ad5F35病毒以不同MOI(0、1、5、10、50、100)感染CIK细胞48h后检测hIL-21蛋白的表达。皮下注射SMMC-7721细胞致裸鼠成瘤,以表达hIL-21的CIK细胞治疗荷瘤裸鼠,评价疗效。结果成功构建出用于Ad5、Ad5F35病毒的质粒;构建的质粒与pAd5、pAd5F35脂质体共转染HEK293细胞,包装出表达hIL-21及CopGFP蛋白的Ad5、Ad5F35病毒。携带CopGFP基因的Ad5、Ad5F35病毒对CIK细胞的感染实验表明Ad5F35腺病毒感染率更高;携带hIL-21基因的Ad5、Ad5F35病毒对SMMC-7721细胞的感染实验表明hIL-21表达量差异无统计学意义;携带hIL-21基因的Ad5F35病毒以50MOI感染CIK细胞后hIL-21的表达量较高;动物实验统计分析说明表达hIL-21的CIK细胞对荷瘤裸鼠疗效较好。结论 hIL-21与CIK细胞在荷瘤小鼠体内联合发挥抗肿瘤作用。
- 陈晚华刘辉王延春朱洋洋曲平波钱其军
- 关键词：白介素21腺病毒肝肿瘤
