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多肽TAT与核定位信号介导的蛋白质入核递送被引量：6: 2004年; 增强型绿色荧光蛋白与蛋白质转导结构域TAT、SV40大T抗原的核定位信号以融合蛋白的形式在大肠杆菌中表达 ,纯化后转导A431细胞 ,大部分细胞核内都可以观察到绿色荧光 ,说明TAT NLS可以有效介导蛋白质的入核递送。这种蛋白质递送系统可望用于转录治疗等研究领域。; 吴国清朱旭东刘娟党颖李少林黄培堂; 关键词：TAT 核定位信号增强型绿色荧光蛋白细胞核

利用TAT多肽增强腺病毒对细胞感染效率的研究被引量：1: 2005年; 蛋白转导多肽本身或携带生物大分子能以一种不明机制的方式高效地穿过真核细胞质膜并且几乎没有组织选择性。这为生物药物研究、基因治疗等领域带来了新的希望。最近有研究表明:来源于HIV-1的TAT蛋白的蛋白转导结构域多肽可以显著地提高重组腺病毒感染细胞和实验动物的效率。在对。HeLa且和Vero-E62种具有不同病毒易感性的细胞进行重组腺病毒感染实验时发现TAT多肽可以明显地提高重组腺病毒对HeLa细胞的感染及在细胞中外源报道基因的表达,但是对Vero-E6细胞却没有效果,表明TAT多肽增强重组腺病毒的感染与靶细胞类型有关,而并不像转导现象那样没有组织差异。这为蛋白转导技术在病毒载体中的应用提供了参考,但其中涉及的蛋白转导的机制有待进一步实验研究。; 党颖朱旭东王应雄李涛王宇新黄培堂; 关键词：蛋白转导 TAT蛋白细胞质膜感染细胞报道基因真核

快速检测病原微生物的基因芯片及全基因组扩增技术的建立及应用: 新发传染病及重组病原体的不断出现,使病原体的检测技术面临新的挑战。未来微生物的检测应该是以检测微生物的致病基因、毒力基因、及抗药性基因等或其表达产物为目标。本研究将基因芯片技术与全基因组扩增技术相结合,建立了能对病原体全...; 李越希黄培堂潘明洁

脂质体DC-Chol/DOPE对HEK293FT细胞的高效转染及其在腺病毒制备中的应用被引量：4: 2005年; 重组病毒载体系统因为具有高效的基因转移能力得到了广泛应用,而病毒包装细胞的转染是重组病毒制备过程中的关键步骤。优化了脂质体DC-Chol/DOPE介导的转染常用的病毒包装细胞系HEK293FT的实验条件,比较了DC-Chol/DOPE、Lipofectamine2000和磷酸钙共沉淀法转染细胞的效率,并且比较了用DC-Chol/DOPE和磷酸钙共沉淀法转染293FT细胞制备重组腺病毒的结果,发现DC-Chol/DOPE对293FT细胞的转染效率以及最终收获的病毒滴度都远高于磷酸钙共沉淀法转染。所以,利用DC-Chol/DOPE转染293FT细胞制备重组病毒是一种简单、高效、成本低廉的方法。; 党颖朱旭东王应雄郭威威黄培堂; 关键词：脂质体转染腺病毒载体重组腺病毒转染细胞 DOPE

Dc-Chol/DOPE介导siRNA对HeLa细胞的高效转染被引量：2: 2005年; 如何把小干涉RNA有效地递送到体内特异的靶细胞是RNA干涉技术发展中的主要障碍。阳离子脂质体DC-Chol/DOPE已经成功地用于DNA药物的体内递送。研究表明DC-Chol/DOPE介导siRNA对HeLa细胞的转染与商品化的转染试剂L ipofectam ine 2000一样高效,而对细胞的毒性则要小得多。; 党颖王应雄朱旭东郭威威王宇新黄培堂; 关键词：脂质体转染小干涉RNA

用RNaseⅢ制备的小干涉RNA降解SARS冠状病毒基因的细胞内转录物被引量：8: 2004年; SARS冠状病毒是引起重症急性呼吸综合症的主要原因 ,目前尚没有特效药物或疫苗对抗这种新病毒。RNA干涉是指双链RNA可以特异地降解细胞内同源基因的mRNA。在哺乳动物细胞中 ,<30bp的小双链RNA能引起RNA干涉 ,又可以避免干扰素反应。通过体外转录得到SARS病毒 3种基因RNA依赖的RNA聚合酶、刺突蛋白及核衣壳蛋白部分片段的长双链RNA ,然后用RNaseⅢ有限切割成长度 <30bp的小干涉RNA。同时把上述 3种基因片段分别连接到质粒pGL3 Control中 ,得到的 3个质粒pGL R、pGL S和pGL N可以分别在细胞内转录出荧光素酶 RNA依赖的RNA聚合酶、刺突蛋白、核衣壳蛋白的杂合mRNA。上述质粒分别和相应的小干涉RNA共转染HEK2 93F细胞 ,测定荧光素酶活性 ,结果小干涉RNA使相应质粒表达荧光素酶的活性显著下降 ;用逆转录定量PCR反应测量mRNA丰度。; 朱旭东党颖冯怡李涛黄培堂; 关键词：SARS冠状病毒刺突蛋白核衣壳蛋白

通过生物素化标记分析细胞膜亚蛋白质组被引量：6: 2006年; 细胞膜在许多基本生物学作用过程中扮演着重要角色,比如细胞-细胞相互作用、信号转导和物质运输.分析不同生理或病理状态细胞的膜蛋白的表达变化,有助于了解这些生物学过程以及发现新的诊断、治疗靶位.成功地进行膜蛋白分析最重要的是获得足够浓度与纯度的膜蛋白.这里报告一种分离高纯度膜蛋白的方法,主要包括三个步骤:(1)生物素化活细胞表面的膜蛋白,(2)链亲和素琼脂糖亲和吸附,(3)强烈的清洗条件去除非特异吸附的胞质蛋白.最后用化学方法洗脱生物素标记的膜蛋白进行双向电泳分离分析.用该方法制备了HeLa细胞的膜蛋白.免疫印迹结果表明,生物素标记的膜蛋白基本上都是低丰度蛋白.这样制备得到的膜蛋白双向电泳分离出2400多个蛋白质点,而且大多数点的亮度相近,分布得相对分散没有聚集成群.这种图谱非常便于比较分析找到差异蛋白.多次重复制备膜蛋白、电泳表明该方法的重复性和稳定性很好.; 廖翔朱旭东党颖李涛周晓巍黄培堂; 关键词：细胞膜蛋白质组双向电泳生物素化

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国家重点基础研究发展计划(2002CB513204)