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蛋白质酶促水解反应机理与动力学模型被引量：21: 2005年; 研究蛋白质酶促水解制备生物活性多肽的反应机理与动力学行为,并建模表征不同反应机制的酶解曲线.基于对不同实验条件下反应时程特性的分析,以经典的米氏方程为理论基础,提出了同时考虑蛋白质单底物水解、蛋白酶失活以及底物或产物抑制因素的机理模型,并构建了指数形式动力学方程dh/dt=aexp(-bh),其中参数a和b对于不同反应机理具有不同的表达形式和确定的数值结果.对于牛血清白蛋白(BSA)-胰蛋白酶(trypsin)模型体系,经实验拟合平均相对误差为4.73%,并求得该体系相应热力学和动力学常数:Km=0.074 8 g/L,Ks=7.961 g/L,Kd=9.358min-1,k2=38.439 min-1,Ea=64.826 kJ/mol,Ed=80.031 kJ/mol.所建整套模型可用于蛋白质酶解反应过程的模拟、热动力学常数的计算和生物反应器的优化设计.; 齐崴何志敏何明霞; 关键词：牛血清白蛋白胰蛋白酶酶解动力学模型活性多肽

酪蛋白酶解反应复杂产物的色谱定量分析被引量：1: 2005年; 根据酪蛋白酶解产物的高效凝胶排阻色谱(HPSEC)定性分析结果,选取不同截留相对分子质量的超滤膜对酶解产物进行截分,制得 3种相对分子质量分布相对集中的区间组分;建立各组分峰面积与质量浓度之间的线性关系,由此定量计算不同反应时间的酶解产物中相应相对分子质量区间组分的质量浓度。研究表明,将膜分离方法与色谱分析相结合可实现对蛋白质、多肽等复杂体系相对精确的定量分析。; 于艳军齐崴何志敏; 关键词：酪蛋白酶促水解膜分离

动态光散射分析不同物化条件下酪蛋白的聚集行为及其胶束尺寸被引量：17: 2007年; 采用动态光散射技术考察了酪蛋白胶束在各种物化条件(温度、浓度、pH、离子强度、乙醇)下的聚集行为,并测定了胶束尺寸。结果表明:热处理导致酪蛋白胶束发生离解,平均流体力学半径(Rh)值不断减小,且当蛋白浓度较低时热离解过程为可逆,而浓度较高时则为不可逆;酪蛋白胶束的Rh值随蛋白浓度及离子强度的增加均呈现先减小后逐渐增大的趋势,并分别在2g/L和0.1mol/L时达到最小值;而Rh值随pH值的增加则先增大再逐渐减小,并在pH7.0时达到最大值;添加乙醇使酪蛋白胶束不断聚集,Rh值逐渐增加,溶液散射光强(Iθ)呈指数增长。; 章宇斌齐崴苏荣欣袁素霞靳凤民何志敏; 关键词：酪蛋白胶束动态光散射

酪蛋白溶解与酶解行为的动态光散射被引量：5: 2006年; 采用动态光散射技术,以磷酸盐为缓冲液,研究了温度、离子强度和酶解行为对酪蛋白胶束平均流体力学半径(Rh)的影响规律.结果表明,Rh值在升温过程中发生不可逆减小;随着离子强度增大,Rh值先减小再增大;酪蛋白在胰蛋白酶作用下,溶液光散射强度对应于分子量大小先急剧下降,再逐渐趋于平缓,而Rh值的变化规律与之相反;并推测了酪蛋白胶束酶解过程的结构变化模型,即由原始致密的球状体逐渐舒展为松散而规则的毛束状蛋白肽链.; 刘瑞齐崴苏荣欣靳凤民何志敏; 关键词：酪蛋白胶束动态光散射酶解

魔芋葡甘聚糖的pH触发酶解被引量：6: 2004年; 利用高效凝胶排阻色谱技术研究并实现了以溶液pH值为简易调节开关 ,对魔芋葡甘聚糖的酶解反应进行触发调控。结果表明 :pH为 4时底物分子量不发生变化 ,而当pH调至 7时 ,酶解被触发进行 ,底物分子量随之快速下降。分析表明 :酶在pH变化过程中发生部分复性的可能原因是pH由 7调至 4的过程中发生沉淀的酶分子维持了天然构象 ,当pH反调回 7时重新溶解。; 何志敏苏荣欣齐崴; 关键词：魔芋葡甘聚糖 PH 酶解触发

酶解反应与膜分离耦合连续制备酪蛋白磷酸肽被引量：18: 2006年; 采用酶解反应与膜分离耦合新工艺连续水解全酪蛋白制备酪蛋白磷酸肽(CPPs)。考察了超滤膜对胰蛋白酶及底物溶液的截留效果;研究了初始底物质量浓度、初始酶质量浓度、反应体积、膜渗透通量等参数对反应器性能和反应转化率的影响规律;利用高效凝胶排阻色谱系统(HPSEC)对酶解产物进行检测分析;建立了酶膜反应器连续水解动力学模型,并对间歇与连续酶解过程进行比较分析,证明反应-分离耦合技术可使酶解效率及蛋白酶利用率大幅提高,并使产物得到调控与富集,为CPPs的酶法制备提供了一种更为有效的方法。; 齐崴何志敏何明霞; 关键词：酪蛋白磷酸肽酶膜反应器酶解动力学模型

多级质谱法测定Axinastatin 1环肽序列及其断裂机理研究被引量：2: 2007年; 对具有抗癌活性的海洋环肽Axinastatin 1进行化学合成.采用多级质谱法对合成环肽进行序列测定.线性前体测序依据bx-yz断裂路径,在同一张MS2谱中利用b和y离子所提供序列信息的互补来实现.环肽测序依据bx→bx-1断裂路径,每一级MS由b离子的C端碰撞掉一个氨基酸残基直到MS6,得到2套b离子,根据它们所提供序列信息的互补可准确测定环肽序列并推断其环结构,同时观察到b离子重排现象.讨论了上述断裂与重排的路径和机理,并利用半经验量子化学PM3和AM1两种算法计算了碎片的生成焓,验证了路径的合理性.由离子b5PN的生成焓偏高和其重排间的联系尝试提出过渡结构假设.; 齐崴贾辰熙何志敏乔斌; 关键词：环肽测序串联质谱

基于分子机制的蛋白质酶解反应经验修饰动力学模型被引量：4: 2006年; 蛋白质酶解反应动力学行为的复杂性在于体系中底物与产物的多样性,以及由此决定的动力学常数的可变性.基于此,以酪蛋白(case in)—胰蛋白酶(trypsin)为模式体系,拟合求得动力学常数(Km和kcat)随水解度(DH)值变化的函数表达式,其规律为:随DH值增加,Km增大,kcat减小,kcat/Km减小,证明:酶与底物的亲和力随肽链缩短而减小,即高分子量多肽为蛋白酶的适宜底物,而酶解效率与酶解专一性随反应进行逐渐降低.进一步,根据分子水平的蛋白质酶解作用机制,关联水解实验数据,得到case in-trypsin酶解反应的经验修饰动力学方程(模型平均相对误差<5%),为定量表征复杂酶解历程以及高效制备活性多肽提供了理论基础.; 齐崴何志敏; 关键词：酶促水解动力学模型活性多肽

反相高效液相色谱与质谱联用分析合成七肽的消旋产物被引量：10: 2006年; 采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)与质谱(MS)联用技术对固相法化学合成七肽(H2N-PFNSLAI-COOH,M r 760.9)时出现的消旋产物进行了分析。根据弱疏水性合成七肽粗品特性,提出了充分利用吸附和分配双重保留机制的“早期吸附”概念,以此优化色谱条件得到4个峰形良好的色谱峰;质谱分析表明:4谱峰具有相同的m/z761.5[M+H]+值,对每一消旋产物进行在线多肽测序,并利用串联质谱(MSn)谱图叠加的方法,得到b轴和y轴两套片段信息,成功确定了合成七肽的4个消旋产物。; 齐崴贾辰熙何志敏乔斌张延莹

不同物理化学条件下酪蛋白胶束结构的光散射研究: ＜正＞酪蛋白是牛乳中的主要蛋白质,具有极高的营养价值,是生物大分子领域研究中的模式与热点物质。乳中酪蛋白主要以胶束形式存在,当环境条件发生变化时,酪蛋白胶束的高级结构将随之改变,从而导致其功能的变化。因此研究不同物理化学...; 章宇斌齐崴何志敏苏荣欣袁素霞; 文献传递

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国家自然科学基金(20306023)

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