广东省自然科学基金(C032828)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
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- 基因重组BDNF蛋白在大肠杆菌中的表达纯化与功能鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的构建脑源性神经营养因子(BDNF)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达,以获取高产量、低成本、高纯度且具有生物学活性的BDNF蛋白。方法以人的全长BDNFcDNA为模板,用PCR方法扩增成熟区BDNF的cDNA,应用基因重组技术将人BDNFcDNA克隆到质粒pET-30a(+)中,进行限制性内切酶酶切分析和DNA测序鉴定。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)LysS,经IPTG诱导表达后,用Ni-NTA亲和层析纯化获取蛋白,用SDS-PAGE和westernblot方法鉴别,噻唑蓝(MTT)法检测重组蛋白对PC12细胞增殖的影响。结果扩增出的人BDNFcDNA片段克隆进了原核表达载体,经酶切和核酸测序鉴定,得到了正确的重组质粒pET-BDNF,并在大肠杆菌中获得了表达。纯化后的蛋白经考马氏亮蓝染色呈单一条带;用抗BDNF的抗体进行westernblot分析证明目的蛋白获得了表达。基因重组BDNF蛋白能够促进PC12细胞增殖。结论本研究成功构建了表达基因重组人BDNF的原核表达载体,基因重组人BDNF蛋白在大肠杆菌中获得了表达和纯化,所获得的基因重组蛋白具有较好的生物学活性。
- 马蕾蕾苏丹季爱民
- 关键词：脑源性神经营养因子大肠杆菌蛋白纯化生物学活性
- 通过血脑屏障脑源性神经营养因子的制备及功能
- 目的来源于人类免疫缺陷病毒（HIV）-I型编码的反式激活蛋白（TAT）中的蛋白质转导域（PTD）,能介导生物大分子通过血脑屏障。本文拟制备一种经血管途径给药后能通过血脑屏障（BBB）进入大脑的脑源性神经营养因子（BDNF...
- 季爱民马蕾蕾苏丹马翰章李晓东王秉钧张忠义
- 关键词：脑源性神经营养因子血脑屏障免疫组织化学
- 文献传递
- siRNA分子的生物体内给药系统被引量：2
- 2005年
- 小分子干扰RNA(small interference RNA,siRNA)能特异性地沉默靶基因的表达,具有治疗某些基因异常引起的疾病的应用前景。但是siRNA分子在生物体内应用时存在很多缺陷,要发挥其疾病治疗作用,就必需对其进行稳定性结构修饰并设计合适的生物体内给药系统。
- 苏丹季爱民
- 关键词：SIRNA给药系统
