国家自然科学基金(30870060)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：张长生林钦恒陈瑞东肖吉鞠建华更多>>
- 相关机构：中国科学院中国科学院研究生院西南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国科学院知识创新工程重要方向项目中国科学院“百人计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 友菌素核苷转移酶amiE基因的克隆、表达和功能鉴定
- 2012年
- 【目的】克隆和表达二糖核苷类抗生素友菌素生物合成基因簇中的核苷转移酶基因amiE,并研究AmiE的体外催化功能。【方法】采用PCR技术将编码257个氨基酸的葡萄糖-1-磷酸核苷转移酶基因amiE克隆到表达载体pET28a上,构建质粒pCSG4001,转化入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导表达;利用亲和层析分离纯化蛋白AmiE,以葡萄糖-1-磷酸和胸腺嘧啶三磷酸(TTP)或尿嘧啶三磷酸(UTP)为底物,利用高效液相检测AmiE的体外酶活;以甘露糖-1-磷酸、半乳糖胺-1-磷酸和半乳糖-1-磷酸和TTP作为底物,进一步研究AmiE对底物的选择性。【结果】N-末端融合组氨酸标签的AmiE蛋白在大肠杆菌中获得了可溶性表达,通过亲和层析纯化出的AmiE能够以TTP(或UTP)和葡萄糖-1-磷酸作为底物,催化形成胸腺嘧啶二磷酸葡萄糖(TDP-glucose)或者尿嘧啶二磷酸葡萄糖(UDP-glucose),但对其他三种底物,无明显催化活性。【结论】大肠杆菌中表达纯化的核苷转移酶AmiE能够体外催化形成TDP-葡萄糖(或UDP-葡萄糖),确证了AmiE作为核苷转移酶的催化功能,同时表明AmiE对底物具有一定的选择性。
- 胡涛张光涛朱义广李苏梅张海波张改云杨晓红鞠建华张长生
- 关键词：生物合成
- 微生物糖苷类抗生素糖基转移酶的体外研究进展被引量：3
- 2012年
- 糖基在微生物天然糖苷类抗生素的生物活性中扮演着重要角色,增减或者改变化合物的糖基构成往往会对化合物的生理活性产生决定性的影响。糖基的添加通常由糖基转移酶催化完成。本文综述了目前微生物天然糖苷类抗生素糖基转移酶的体外活性研究进展,阐述了糖基转移酶反应可逆性的发现,糖基转移酶辅助蛋白的重要性,以及糖基转移酶的体外糖基底物特异性的研究情况,并对将糖基转移酶应用于体外糖基多样化进行了展望。
- 林钦恒肖吉陈瑞东张长生
- 关键词：糖基转移酶体外研究
