农业部农村能源综合建设项目(2130138-018)
- 作品数：7 被引量：15H指数：2
- 相关作者：李桂英顿宝庆路明田谷王智更多>>
- 相关机构：中国农业科学院作物科学研究所东北农业大学中国农业科学院农业资源与农业区划研究所更多>>
- 发文基金：农业部农村能源综合建设项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项引进国际先进农业科技计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 产纤维素酶嗜热细菌R-250的分离、鉴定被引量：3
- 2010年
- 利用海南某温泉附近腐烂朽木及土壤,经富集培养分离筛选出高产纤维素酶的嗜热细菌R-250,经形态学和生理生化特性研究以及16S rDNA序列分析鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。以复筛培养基进行培养时,该菌生长的最适温度为50℃,最适pH值为5～6。在该条件下,以玉米秸秆为唯一碳源的产酶培养基产酶培养4d后CMCase酶活达到最高值为14.7IU/mL,滤纸酶活为6.74IU/mL。
- 郭明鸣顿宝庆许修宏李桂英张保明路明
- 关键词：纤维素分解菌嗜热
- 果胶裂解酶基因的克隆与原核表达被引量：2
- 2010年
- 利用PCR技术从枯草芽孢杆菌T66(Bacillus subtilis)基因组DNA中扩增得到果胶裂解酶编码基因pl(GU644446),并构建基因表达载体pPAL7-pl重组质粒,转化受体菌E.coli BL21进行原核表达分析。诱导表达条件为温度37℃、时间4 h、IPTG浓度0.8 mol/L,经SDS-PAGE分析表明果胶裂解酶编码基因pl表达的重组酶蛋白相对分子质量为45 ku。对该基因重组酶粗酶液的酶学性质进行了初步分析,表明该酶最适反应温度为50℃、最适反应pH8,添加5.5 mmol/L的Ca2+的条件下,测得果胶裂解酶的最高比酶活为30 U/mL。含有果胶裂解酶编码基因pl的重组质粒遗传稳定。
- 宋立立顿宝庆奚亚军彭源德白娜路明李桂英
- 关键词：果胶裂解酶基因克隆原核表达酶学特性
- 糖化酶、木聚糖酶融合蛋白在毕赤酵母中的高效表达被引量：1
- 2012年
- 通过RT-PCR方法,以埃默森篮状菌(Talaromyces emersonii)总RNA为模板,克隆出糖化酶(glucoamylase,amyA)基因的成熟肽编码序列(1 857 bp),编码618个氨基酸;以类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)H10-3基因组DNA为模板,克隆出木聚糖酶(xylanase A,xynA)基因的成熟肽编码序列(636 bp),编码211个氨基酸。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)得到拼接片段amyA-l-xynA,并将其克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9中,得到重组质粒pPIC9-amyA-l-xynA,重组质粒线性化后经电击转化到毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115中,得到了表达成功的工程菌ALX2。在ALX2发酵上清液中同时检测到糖化酶活性(10.7 U/mL)和木聚糖酶活性(51.8 U/mL)。
- 王智顿宝庆顾金刚赵萱田谷路明李桂英
- 关键词：糖化酶木聚糖酶毕赤酵母
- 桔青霉CR-2内切葡聚糖酶蛋白纯化研究初探被引量：1
- 2010年
- 以高效纤维素分解菌桔青霉(Penicillium citrinum)CR-2菌株为材料,利用分子筛及离子交换技术纯化分离其内切葡聚糖酶蛋白,首次获得了电泳纯的桔青霉内切葡聚糖酶蛋白组分,大小为27.26kDa,最适作用温度为60℃,最适作用pH为5。对研究桔青霉纤维素酶降解纤维素的作用机理以及该菌株的改造应用具有重要意义。
- 顿宝庆曲小爽郭明鸣路明李桂英张保明
- 关键词：桔青霉内切葡聚糖酶纯化
- 米根霉糖化酶、类芽孢杆菌木聚糖酶融合蛋白的真核分泌表达被引量：1
- 2011年
- 以米根霉(Rhizopus oryzae)3.866基因组DNA为模板,克隆得到糖化酶基因(glucoamylase gene,amyA),基因全长2049bp,编码604个氨基酸;以类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)H10-3基因组DNA为模板,克隆出基因木聚糖酶基因(xylanase A gene,xynA)的成熟肽编码序列,长636bp,编码211个氨基酸。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)得到拼接片段amyA-l-xynA,并将其克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9中,得到重组质粒pPIC9-amyA-l-xynA,重组质粒线性化后经电击转化到毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,得到了表达成功的工程菌AX11。在AX11发酵上清液中同时检测到糖化酶活性(5.8U/mL)和木聚糖酶活性(32.3U/mL)。
- 王智宋立立顾金刚顿宝庆田谷路明李桂英
- 关键词：糖化酶木聚糖酶毕赤酵母
- 桔青霉木聚糖酶基因克隆及其在毕赤酵母中的表达及活性分析被引量：2
- 2012年
- 通过同源序列PCR克隆的方法,获得桔青霉(Penicillium citrinum)CR-2菌株的木聚糖酶编码基因xyl,该基因全长984 bp,编码327个氨基酸,无内含子序列,具有完整开放阅读框。其编码的氨基酸序列N端具有一段包含19个氨基酸的信号肽序列,并具有糖基水解酶第10家族(GH10)的保守催化域特征,推测该酶属于第10家族成员。将该基因与毕赤酵母表达载体pPIC9相连接构建重组载体pPIC9-XYL,电击转化至毕赤酵母GS115菌株中。挑选阳性重组子经测序、酶活性以及SDS电泳分析表明,xyl基因成功在毕赤酵母中分泌表达,重组酶活性可达214.15 IU/mL。该重组酶最适温度与最适pH分别为50℃和4.5,且具有良好的pH和热稳定性。
- 田谷顿宝庆王智李维维许修宏李桂英
- 关键词：桔青霉木聚糖酶毕赤酵母酶学性质
