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上调SMYD3对人胆管癌FRH0201细胞中DNMT3B表达及细胞增殖的影响被引量：1: 2012年; 目的:研究人胆管癌细胞株FRH0201中SET和MYND结构域含有蛋白3(SET and MYND domain-containing protein 3,SMYD3)过度表达对DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)表达及细胞增殖能力的影响。方法:瞬时转染SMYD3真核表达质粒后,RT-PCR检测细胞中DNMT3B mRNA水平的变化;Western blotting检测细胞中DNMT3B蛋白水平的变化;CCK-8检测细胞增殖能力的改变;流式细胞术检测细胞周期的改变。结果:以未处理组为对照,胆管癌细胞FRH0201在转染pEGFP-C3-SMYD3质粒后,DNMT3B蛋白及mRNA表达均显著上升(P<0.01);细胞的增殖能力显著提高、细胞增殖速度加快(P<0.05);进入G_2/M期的细胞明显增多(P<0.05)。结论:过度表达SMYD3,可引起细胞中DNMT3B的表达上调并增强细胞增殖能力。; 程帝李志花陈汝福郭宁廖巧芳郑礼平周泉波周嘉嘉; 关键词：甲基化

RNAi抑制NANOG表达对肝癌细胞HepG2中MDR1表达及阿霉素敏感性的影响被引量：3: 2014年; 目的探讨抑制NANOG表达对肝癌细胞HepG2中多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1)表达及阿霉素敏感性的影响。方法将靶向NANOG基因的特异性siRNA转染肝癌细胞HepG2,Real-time PCR和Western blot检测siRNA沉默NANOG基因后NANOG、MDR1 mRNA和蛋白的表达,平板克隆形成实验检测沉默NANOG基因后对细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测沉默NANOG基因后对细胞周期的影响,CCK-8法检测沉默NANOG基因后HepG2细胞对阿霉素的敏感性情况。结果靶向NANOG基因特异性siRNA转染肝癌细胞HepG2后,能有效抑制NANOG mRNA和蛋白表达,与Mock组比值分别为(0.32±0.05)和(0.38±0.08);与Mock组比较,沉默NANOG基因后,细胞克隆形成率下降[(8.51±3.63)%vs(17.13±2.24)%,P<0.05],进入G0/G1期的细胞比例增多[(75.33±8.21)%vs(57.81±5.05)%,P<0.05],HepG2细胞对阿霉素的敏感性增强(P<0.05),HepG2细胞内MDR1 mRNA和蛋白表达下降,与Mock组比值分别为(0.35±0.06)和(0.41±0.08)。结论抑制NANOG表达可引起肝癌细胞HepG2中MDR1的表达下调并增强细胞对阿霉素的敏感性。; 周嘉嘉陈汝福邓小耿周雨周泉波张杰伍耀豪曾乐祥邱荣林; 关键词：肝癌 NANOG 阿霉素多药耐药基因1

SMYD3过表达对人肝内胆管癌细胞miR-124表达及细胞增殖的影响被引量：2: 2013年; 目的:探讨肝内胆管癌细胞HCCC-9810中SET和MYND结构域含有蛋白3(SET and MYND domain-containing protein 3,SMYD3)过表达对miR-124表达及细胞增殖能力的影响。方法:瞬时转染SMYD3真核表达质粒后,Western blotting检测细胞中SMYD3蛋白水平的变化;qRT-PCR检测细胞中SMYD3 mRNA和miR-124表达;甲基化特异性PCR检测miR-124-1、miR-124-2和miR-124-3基因启动子甲基化水平;CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力。结果:以空白组为对照,肝内胆管癌细胞HCCC-9810在转染pEGFP-SMYD3质粒后,SMYD3蛋白及mRNA表达均显著上升(P<0.05),miR-124-1、miR-124-2和miR-124-3基因启动子甲基化显著增加(P<0.05),miR-124表达明显下降(P<0.05),细胞增殖能力显著提高(P<0.05)。结论:过表达SMYD3可引起miR-124基因启动子甲基化增加,导致胆管癌细胞中miR-124的表达下降,同时过表达SMYD3可增强细胞增殖能力。; 郑礼平李志花陈汝福曾兵周嘉嘉龚远锋宋亚东; 关键词：甲基化特异性PCR 细胞增殖

DNA甲基转移酶1对胆管癌细胞中端粒酶的调控作用: 2012年; 目的观察丙型肝炎病毒核心蛋白（HCVc）阳性肝内胆管癌细胞中人端粒酶逆转录酶（hTERT）的表达，并探讨DNA甲基转移酶1（DNMTl）对hTERT表达的影响。方法将HCVc质粒瞬转入肝内胆管癌细胞株RBE，5-氮杂-2’-脱氧胞嘧啶核苷（AZA）处理转染后细胞；Westernblot法及逆转录．聚合酶链反应（RT．PCR）检测细胞中hTERT及DNMTl的mRNA及蛋白表达。结果比较空白对照组，转染HCVc质粒后，RBE细胞株中hTERT及DNMTl的mRNA、蛋白水平分别上调3．457±0．081、1．684±0．020、1．826±0．060、2．513±0．119（P〈0．05）；AZA处理转染后细胞可逆转hTERT的升高，mRNA和蛋白水平分别下调2．755±0．098、1．491±0．045（P〈0．05）。结论DNMTl参与HCVc诱导的hTERT表达上调过程。; 程帝郭宁周嘉嘉廖巧芳陈汝福李志花; 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白 DNA甲基转移酶端粒酶

丙型肝炎病毒核心蛋白对胆管癌细胞NFAT1基因表达的影响被引量：5: 2012年; 目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV C)是否通过调控转录因子NFAT1的表达参与肝内胆管癌的发展及恶性生物学行为。方法构建表达HCV C核心蛋白的真核表达质粒pEGFP-N3-HCV C,通过瞬时转染pEGFP-N3-HCV C质粒,RT-PCR检测肝内胆管癌RBE细胞中NFAT1 mRNA的表达情况,Western blot检测NFAT1蛋白的表达情况,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期变化情况。结果转染HCV C后胆管癌细胞NFAT1基因的mRNA及蛋白表达明显上升,差异具有显著性(P<0.05);HCV C能够促进细胞向G2/M期进展及使细胞增殖能力增加。结论 HCV C可上调胆管癌细胞中NFAT1基因的表达,促进细胞周期进展及胆管癌细胞增殖,可能与肝内胆管癌的发展有关。; 廖巧芳李志花陈汝福郭宁曾兵程帝郑礼平; 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白细胞周期细胞增殖

小鼠MHC-Ⅰ/MHC-Ⅱ类分子限制性表位MAGE-3多肽疫苗的设计及其免疫效应: 2010年; 【目的】设计小鼠MHC-I/MHC-II类分子限制性表位黑色素瘤抗原-3(MAGE-3)多肽疫苗即包含CD4+-CD8+T细胞表位的MAGE-3多肽抗原,并探讨其免疫效应。【方法】采用计算机模拟设计的方法,结合文献资料选择MHC-I/MHC-II类分子限制性表位的MAGE-3多肽。采用酶联免疫斑点实验(ELISPOT)、细胞毒性实验评价多肽诱导T淋巴细胞的增殖能力及刺激的T淋巴细胞释放细胞因子的能力。【结果】获得的联合表位多肽序列为FITC-YEEYYPLIFLDNDQETMETSEEEEYEEYYPLIF,高效液相色谱法分析多肽纯度≥90%。MAGE-3表位多肽抗原能够诱导T淋巴细胞增殖,并诱导T淋巴细胞分泌IFN-γ,高于对照组(49vs.6spots/106,P≤0.05)。MAGE-3表位多肽可诱导细胞毒T淋巴细胞使42%的MFC细胞溶解破裂,高于对照组(P≤0.05)。【结论】包含CD4+-CD8+T细胞表位的MAGE-3多肽抗原在体外实验中显示有一定的免疫效应,此抗原肽可作为多肽疫苗用于对表达MAGE-3抗原的H-2KK型小鼠胃癌进行免疫治疗。; 李志花杨君周嘉嘉陈汝福; 关键词：MAGE-3 免疫

纳米载体介导热诱导启动子调控内皮抑素基因治疗肝细胞癌被引量：1: 2009年; 目的探讨加热诱导调控下纳米载体介导内皮抑素（Endo）基因治疗对肝癌细胞HepG2的体内外杀伤作用。方法双酶切法构建热诱导启动子（HSP70B）调控Endo基因的重组质粒pcDNA3．1（＋）／HSP70-Endo／EGFP。溶剂挥发法制备载DNA的葡聚糖接枝聚乳酸纳米粒，透射电镜观察载DNA纳米粒的形态，并介导转染HepG2细胞，转染24h后予以37℃、39℃、41℃、43℃、45℃加热诱导30min，荧光显微镜和流式细胞术检测不同温度下EGFP表达，ELISA检测转染细胞上清Endo蛋白浓度，MTT法检测热诱导后Endo对HepG2和ECV304细胞生长的影响，动物实验观察热诱导后Endo对肝癌移植瘤的抑制作用。结果载DNA纳米粒呈圆形或椭圆形，粒径约90～120nm，转染效率约30．65％。低温加热可增强HepG2细胞中Endo／EGFP表达，43℃组EGFP表达强度达37℃组的3．3倍。43℃热诱导后转染细胞上清中Endo浓度为（177±28）μg／L，高于不加热组（41±10）μg／L。Endo抑制ECV304的生长，72h时热诱导后细胞抑制率为96．3％，对HepG2细胞的生长却无影响。体内实验显示热诱导后Endo显著抑制肝癌移植瘤的生长，肿瘤抑制率为58．5％，高于不加热组（34．9％）。结论纳米载体可介导Endo基因转染HepG2细胞，低温加热可增强HepG2细胞内Endo基因的表达和分泌，抑制肝癌移植瘤的生长。; 周嘉嘉陈汝福李志花周泉波唐启彬贺晓玉卢红伟郭宁; 关键词：肝细胞癌基因治疗内皮抑素纳米粒

阻断NF-κB信号通路对人肝门部胆管癌细胞QBC939增殖的影响被引量：1: 2012年; 目的:研究阻断NF-κB信号通路对人肝门部胆管癌细胞QBC939生长增殖的影响。方法:常规培养QBC939细胞,采用PDTC(100μmol/L)阻断NF-κB信号通路,Western blot检测核内P65蛋白水平的表达,CCK-8检测细胞生长增殖抑制率,流式细胞仪观察细胞周期与凋亡的变化情况。结果:经PDTC阻断NF-κB信号通路后,与对照组相比,细胞核内P65蛋白水平明显下降(P<0.05)。CCK-8检测显示细胞增殖活性明显受到抑制,并随时间的延长而愈渐明显,12、24、36h后细胞增殖抑制率分别为(22.53±0.03)%、(46.54±0.03)%、(58.02±0.03)%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测发现实验组G0/G1期细胞比例高于对照组,分别为(68.53±1.72)%、(38.3±1.35)%,差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率在实验组为(27.68±2.77)%,对照组仅为(9.27±2.36)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:阻断NF-κB信号通路诱导人肝门部胆管癌细胞G_0/G_1期阻滞及细胞凋亡,从而抑制细胞生长与增殖,提示NF-κB信号通路组成性激活参与人肝门部胆管癌的发生发展,以NF-κB信号通路作为治疗的靶点可能给人肝门部胆管癌带来新的治疗选择。; 刘勇刚陈汝福于新发周成宇李志花; 关键词：胆管癌细胞QBC939 NF-ΚB 细胞周期

重组质粒pcDNA3．1（＋）／HSP70-Endo／EGFP的构建及在HepG2细胞的表达: 2009年; 目的构建热休克蛋白70（HSP70）启动子调控内皮抑素（Endo）基因的重组质粒pcDNA3．1（＋）／HSP70－Endo／EGFP，观察其在HepG2细胞中的表达规律。方法用聚合酶链反应（PCR）法体外扩增HSP70启动子（350bp）；用EcoRI、SalI双酶切法切取质粒pSP—Endo／EGFP中Endo／EGFP，克隆到pcDNA3．1（＋）中获得重组质粒pcDNA3．1（＋）／HSP70-Endo／EGFP。脂质体介导转染HepG2细胞，转染24h后予以37、39、41、43、45℃加热诱导30min，荧光显微镜和流式细胞术检测EGFP的表达，逆转录（RT）－PCR法检测细胞内EndomRNA的表达；ELISA法检测转染细胞上清中Endo蛋白浓度。结果合成HSP70启动子序列测序结果与GeneBank中AL671762所提供序列完全一致。低温加热可增强HepG2细胞中Endo／EGFP表达，43℃组EGFP表达强度达37℃组的3．3倍。43℃组EndomRNA表达水平高于不加热组。43℃组上清Endo蛋白浓度为（177±28）μg/L，高于不加热组（43±11）μg/L。结论成功构建HSP70启动子调控Endo基因的重组质粒，低温加热可增强HepG2细胞中Endo基因的表达。; 陈汝福李志花周嘉嘉唐启彬周泉波吴畏郭宁彭宁福; 关键词：热休克蛋白

SET-及MYND-结构域含有蛋白3真核表达载体的构建及对肝门部胆管癌细胞生物学行为的影响被引量：1: 2012年; 目的构建SET-及MYND-结构域含有蛋白3（SMYD3）荧光质粒并观察组蛋白甲基转移酶SMYD3对肝门部胆管癌细胞生物学行为的影响。方法在人源组织中调取并扩增SMYD3基因酶切并连接于pEGFP—C3质粒构建SMYD3荧光质粒pEGFP—C3-SMYD3。利用质粒转染人肝门部胆管癌细胞株FRH0201并检测SMYD3表达改变，利用细胞计数试剂盒（CCK-8）方法及Transwell方法检测过表达SMYD3后细胞生长及迁移能力变化。结果酶切及测序结果显示SMYD3成功连接入pEGFP—C3载体中，Westernblot法结果显示在质粒转染组中SMYD3表达较未转染组升高（73．23±5．60）％，较未转染组及空质粒转染组SMYD3表达水平差异有统计学意义（P〈0．05）；CCK-8方法及Transwell方法显示转染组细胞生长速度较未转染组及空白组加快，迁移能力增强，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论SMYD3的过表达促进肝门部胆管癌细胞的增殖及迁移，可能是调控肝门部胆管癌发生发展的因素之一。; 郭宁陈汝福周泉波林青程帝曾兵周嘉嘉李志花; 关键词：组蛋白甲基转移酶肝门部胆管癌

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