中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(ITBBZX2008-4-2)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：张爱联屈直潘英文罗进贤张添元更多>>
- 相关机构：中国热带农业科学院中山大学海南医学院更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目海南省重点科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- Canstatin-N基因在Pichia pastoris中表达及产物活性分析被引量：2
- 2010年
- 目的:应用P.pastoris的pAOX1表达系统胞内表达canstatin-N蛋白。方法:通过PCR DNA合成技术以及DNA的酶切和连接技术,除去pPIC9K分泌型表达载体的信号肽,并使其载体的多克隆位点的3′端融合his6纯化标签,获得新的载体pPIC9Ki。以含canstatin N端序列的pET-CTN质粒为模版,PCR法扩增1～89个氨基酸的267bp的canstatin的N端基因片段,将其连接于pPIC9Ki的多克隆位点,获得重组表达质粒pPIC9Ki-CTN-N,用电转法将pPIC9Ki-CTN-N转化P.pastorisGS115,通过G418抗性筛选获得工程菌GS115(pPIC9Ki-CTN-N)。通过摇瓶发酵甲醇诱导表达Canstatin-N蛋白。用蜗牛酶裂解P.pastoris细胞,SDS-PAGE分析蛋白表达情况,在鸡胚中进行活性分析。结果:在pAOX1的调控下,canstatin-N基因能在P.pastoris中经甲醇诱导表达,摇瓶发酵表达量为65mg/L,纯化的目的蛋白具有显著的抑制鸡胚尿囊膜血管生成的作用。结论:实现应用P.pastoris表达Canstatin-N蛋白,为Canstatin-N蛋白的规模化生产和进一步的药用研究奠定了基础。
- 潘英文张爱联屈直张添元罗进贤
- 关键词：P.PASTORIS基因表达
- 用P. pastoris的pAOX1表达系统表达木糖异构酶
- 2011年
- 目的:应用P. pastoris的pAOX1表达系统分泌表达重组木糖异构酶。方法:用PCR法从大肠杆菌基因组中扩增木糖异构酶基因(xi)。用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切将其基因克隆进P. pastoris表达载体。通过电转法将其木糖异构酶基因重组于P. pastoris基因组,筛选G418抗性700μg/ml的重组子作为工程菌GS115(pPIC9K-xi)。在摇瓶中发酵用甲醇诱导表达重组木糖异构酶。用SDS-PAGE分析重组蛋白的表达情况,用糖酵解法对表达产物进行活性分析。结果:木糖异构酶基因在pAOX1的调控下,在P. pastoris中经甲醇诱导能分泌表达,摇瓶发酵2d表达量为35mg/L,表达产物具有代谢木糖的作用。结论:成功地克隆了大肠杆菌的木糖异构酶基因,并实现用pAOX1系统在P. pastoris中表达中木糖异构酶,为用P. pastoris规模化生产重组木糖异构酶奠定了基础。
- 易国辉尹慧祥张爱联
- 关键词：木糖异构酶PASTORIS
