国家自然科学基金(30080020)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：朱诗应赵平任浩戚中田赵兰娟更多>>
- 相关机构：第二军医大学安庆市第一人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HCV核心和截短的包膜蛋白E2基因在昆虫细胞中的表达及其抗原性被引量：1
- 2004年
- 目的 :构建含 HCV全长核心基因和截短的包膜蛋白 E2基因的重组杆状病毒表达载体 ,研究其表达和抗原性。 方法 :以含 HCV全长 c DNA克隆的 p GEM- HCJ4质粒为模板 ,PCR扩增全长的 HCV核心抗原基因和截短的 E2基因片段 ,插入转座载体 p Fast Bac HTa构建重组转座质粒 p FB- CE2 t,转化 DH10 Bac大肠杆菌 ,获得重组杆状病毒穿梭质粒 Bacmid- CE2 t,以之转染昆虫 Sf9细胞进行外源基因的表达 ,并对其抗原性进行 EL ISA检测。 结果 :SDS- PAGE和 Western blot分析表明Bacmid- CE2 t在 Sf9细胞表达了 HCV C- E2蛋白 ,并能利用细胞内蛋白酶将其裂解为单独的 C蛋白和截短的 E2蛋白。纯化后的蛋白能分别与 HCV C蛋白、E2蛋白单抗以及慢性丙型肝炎患者血清反应。 结论 :HCV核心蛋白和截短的
- 朱诗应赵平任浩赵兰娟戚中田
- 关键词：核心蛋白
- 截短的丙型肝炎病毒核心蛋白基因和绿色荧光蛋白基因在Sf9细胞中的融合表达
- 2009年
- 目的构建含截短的HCV核心蛋白基因和绿色荧光蛋白基因的重组杆状病毒表达载体,探讨其在Sf9细胞中的表达和抗原性。方法用PCR法扩增截短的HCV核心蛋白基因片段(Ct)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,将其插入转座子载体pFastBac1,构建成重组表达载体pFastCt-EGFP,转化大肠埃希菌DH10Bac,获得重组杆状病毒穿梭质粒BacmidCt-EGFP,转染昆虫Sf 9细胞。结果SDS-PAGE和western blot鉴定表明成功表达了分子量约40 000的融合蛋白。以ELISA法检测发现该融合蛋白能与28份抗HCV抗体阳性血清中的15份发生反应,阳性率为53.6%。结论该融合蛋白在昆虫Sf 9细胞中成功表达并具有一定的抗原性。
- 沈剑平朱诗应
- 关键词：丙型肝炎病毒绿色荧光蛋白
