重庆市自然科学基金(CSTC2007BA5008)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 人BNIP3基因真核表达载体的构建及其对HT-29细胞化疗敏感性的影响
- 2013年
- 目的构建人BNIP3真核表达载体,观察BNIP3高表达对人结肠癌细胞HT-29化疗敏感性的影响。方法PCR法扩增BNIP3基因,酶切后插入质粒pEGFP-C3,构建重组真核表达载体pEGFP-C3/BNIP3。脂质体转染人结肠癌细胞HT-29,Western blot检测BNIP3蛋白表达。MTT法检测5-氟尿嘧啶(5-Fu)的化疗敏感性和细胞增殖,AnnexinV-APC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果酶切电泳分析和DNA序列测定证实,重组质粒pEGFP-C3/BNIP3构建成功;转染重组质粒的HT-29细胞BNIP3蛋白明显高表达。与未转染组和转染空质粒pEGFP-C3组比较,转染pEGFP-C3/BNIP3组5-Fu的IC50值显著降低[(120.11±5.45)、(113.40±4.72)μg/mL vs(19.08±2.62)μg/mL,P<0.05],细胞凋亡率显著增加[(5.51±0.32)%、(7.19±0.47)%vs(41.72±1.48)%,P<0.05],细胞克隆形成显著减少[(52±6)、(49±5)vs(11±3),P<0.05],细胞增殖速度减慢。结论成功构建了人BNIP3真核表达载体,BNIP3高表达可增加HT-29细胞对5-Fu的化疗敏感性。
- 裴莉边志衡江恒陈克力陈建芳梁后杰
- 关键词：结肠肿瘤HT-29细胞化疗凋亡
