吉林省科技厅白求恩医学专项基金(200705295)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：吉林大学中日联谊医院吉林大学更多>>
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- 人LIMK1基因荧光真核表达载体的构建及在人成骨肉瘤MG63细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的构建并表达人LIMK1与绿色荧光蛋白(EGFP-C1)的融合蛋白EGFP-LIMK1,并监测其在人成骨肉瘤MG63细胞内的表达及活性。方法利用基因重组技术将LIMK1与绿色荧光蛋白融合并构建真核细胞表达质粒,通过脂质体介导法导入人成骨肉瘤MG63细胞内,用荧光显微镜观察LIMK1基因表达情况,通过Western blot检测其在MG63细胞中的活性。结果双酶切鉴定证实LIMK1片段已克隆到pEGFP-C1载体的KpnⅠ和NotⅠ位点之间,测序结果证实了插入片段的正确性,转染MG63细胞后,利用荧光显微镜观察可见到绿色荧光蛋白的表达;Western blot检测证实LIMK1在MG63细胞中活性上调。结论成功构建了含有绿色荧光蛋白基因的LIMK1真核表达载体并检测到其在真核细胞MG63中的表达及活性。
- 邢志军赵建武王岩高忠礼
- 关键词：转染LIMK1MG63
- 靶向人SSH1L的siRNA真核表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的构建靶向人SSH1L的siRNA真核表达载体(pSUPER-SSH1L)。方法将设计好的SSH1L的siRNA的寡聚脱氧核苷酸链与真核表达载体pSUPER连接,构建重组pSUPER-SSH1L真核表达载体。对该重组表达载体进行酶切鉴定及DNA测序;通过Western blot检测SSH1L蛋白的表达。结果酶切鉴定、DNA测序以及Western blot检测结果证实表达质粒构建成功,无碱基突变。结论成功构建了靶向人SSH1L基因表达的siRNA干扰质粒载体pSUPER-SSH1L,为进一步运用RNA干扰技术进行SSH1L基因功能研究奠定了基础。
- 邢志军赵建武王岩高忠礼
- 关键词：SIRNA真核表达载体
