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Expression,purification and characterization of Mycobacterium tuberculosis RpfE protein被引量：2: 2012年; Resuscitation promoting factor E （RpfE） is one of the five Rpf-like proteins in Mycobacterium tuberculos＆（M. tuberculosis）. These Rpf-like proteins are secretory, which make them candidates for recognition by the host immune system. In this study, the RpfE gene was amplified from M. tuberculosis, cloned into the expression vectors pDE22 and pPRO EXHT, and were expressed in Mycobacterium vaccae （M. vaccae） and Escherichia coli DHSa, respec- tively. Both recombinant RpfE proteins were purified by Ni-Sepharose affinity chromatography, and were given to C57BL/6 mice. The RpfE proteins elicited T cell proliferation, and stimulated the production of gamma interferon （IFN-y）, interleukin-10 （IL-10） and IL-12. Our results indicated that the RpfE protein expressed in M. vaccae could more efficiently stimulate cellular immune response, making it a promising candidate as a subunit vaccine.; Ying XueYinlan BaiXue GaoHong JiangLimei WangHui GaoZhikai Xu; 关键词：PURIFICATION

Toll样受体与抗结核感染免疫被引量：2: 2006年; 结核分枝杆菌(MTB)是结核病的致病菌,其发病机制仍未阐明。Toll样受体(TLR)蛋白家族属于动物模式识别受体家族。研究表明,TLR对先天免疫和获得性免疫都有调控作用,与抗结核感染免疫有关的主要是TLR2和TLR4。对TLR的研究为MTB诱导先天免疫反应机制的阐明以及治疗方法的进步提供了新的思路。; 柏银兰薛莹徐志凯; 关键词：结核分枝杆菌 TOLL样受体免疫

结核分枝杆菌Rv1009结构域多肽的免疫学特性研究被引量：2: 2008年; 目的研究结核分枝杆菌Rv1009结构域多肽的免疫学特性。方法用原核表达的Rv1009结构域多肽免疫BALB／c小鼠3次，每次间隔2周。用ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性抗体滴度。分离免疫小鼠的脾淋巴细胞，体外用抗原再刺激后，用MTF比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖指数。ELISA方法检测淋巴细胞悬液中γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-10和IL-12的产生水平。另一部分免疫的小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv，4周后，计数脾脏细菌负荷数。结果Rv1009结构域多肽免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1：12800。淋巴细胞增殖指数为2．40±0．18，明显高于生理盐水对照组的0．90±0．21。ELISA方法检测Rvl009结构域多肽免疫组IFN-γ IL—10和IL-12水平为（1432±30）ng／L、（503±11）ng／L和（311±11）ng／L，显著高于生理盐水对照组的（256±20）ng／L、（76±6）ng／L和（56±8）ng／L（P〈0．01）。与生理盐水免疫组（细菌负荷6．64±0．13）相比较，Rv1009结构域多肽免疫组小鼠，对攻击感染后抗MTB在脾脏中增殖有显著作用（细菌负荷为4．86±0．14，P〈0．05），但不及BCG免疫组的3．81±0．16。结论Rv1009结构域多肽有可能作为新型结核疫苗的候选组分。; 樊爱琳师长宏苏明权简文程晓东柏银兰徐志凯郝晓柯; 关键词：细菌蛋白质类细胞因子类

医学微生物学小班教学理念探讨被引量：1: 2007年; 教学理念就是人们对教学和学习活动内在规律的认识的集中体现。微生物学小班教学理念以“一切为了学生的发展”为中心，正确处理教学与教程的关系，并采用多种手段，促进学生自主学习，培养求异思维，激发学生勇于创新的精神。; 柏银兰柴春雨薛莹; 关键词：微生物学教学方法教学理念

结核分枝杆菌MPT64重组母牛分枝杆菌免疫学特性被引量：1: 2009年; 目的:研究结核分枝杆菌MPT64重组母牛分枝杆菌疫苗免疫学特性。方法:用分泌表达MPT64的重组母牛分枝杆菌疫苗免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度和抗体亚类。分离免疫小鼠脾淋巴细胞,检测淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-12产生水平、CD4+细胞和CD8+细胞数、脾淋巴细胞特异性CTL杀伤效应。毒株攻击后对脾脏细菌负荷计数。结果:MPT64重组母牛分枝杆菌疫苗免疫可诱导小鼠高水平的体液免疫应答,免疫小鼠脾淋巴增殖明显,IFN-γ和IL-12含量增加,CD4+和CD8+细胞百分比明显增加,CTL杀伤效应明显,对MTBH37Rv攻击后有一定的保护作用。结论:MPT64重组母牛分枝杆菌疫苗可诱导小鼠有效的体液和细胞免疫应答,有可能作为新型TB疫苗候选。; 柏银兰薛莹王丽梅樊爱琳张薇何俊杰康健徐志凯; 关键词：结核分枝杆菌母牛分枝杆菌疫苗 MPT64

结核分枝杆菌mpt64基因稳定表达细胞系的建立: 2009年; 为建立稳定表达结核分枝杆菌分泌蛋白MTP64的P815细胞系,将mpt64基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-),构建mpt64真核表达载体。重组质粒酶切鉴定正确后,以Lipofectamine2000转染P815细胞,通过G418筛选后,得到阳性克隆,分别以RT-PCR方法检测mRNA表达,间接免疫荧光和Western-blot检测目的蛋白的表达。表达结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64的真核表达载体转染细胞后,RT-PCR可扩增出目的基因片段,转染细胞间接免疫荧光检测阳性,Western-blot检测在约26 kDa处有特异显色条带,证实转染细胞表达目的基因。成功地建立mpt64稳定表达细胞系,为进一步结核疫苗评价奠定一定基础。; 柏银兰王丽梅杨芳薛莹樊爱琳康健张薇何俊杰徐志凯; 关键词：结核分枝杆菌 MPT64 细胞

结核分枝杆菌MPT64抗原DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答被引量：8: 2009年; 目的研究结核分枝杆菌MPT64抗原DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答。方法用表达MPT64的真核表达质粒pcDNA-M免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度和抗体亚类。分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,检测淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-12产生水平、流式细胞仪计CD4+细胞和CD8+细胞数、脾淋巴细胞特异性CTL杀伤效应。结果MPT64基因免疫可诱导小鼠高水平的体液免疫应答,免疫小鼠脾淋巴增殖显著,IFN-γ和IL-12含量增加,CD4+细胞和CD8+细胞百分比明显增加,CTL杀伤效应明显。结论MPT64 DNA疫苗可诱导小鼠有效的体液和细胞免疫应答,有可能作为新型TB疫苗的组分。; 柏银兰薛莹王丽梅樊爱琳张薇康健何俊杰徐志凯; 关键词：结核分枝杆菌 MPT64 DNA 免疫应答

藤黄微球菌Rpf及其结构域蛋白对结核分枝杆菌生长的影响: 2009年; 目的表达纯化藤黄微球菌（Micrococcus luteus）复活促进因子（Rpf）及结构域（domain）蛋白，研究其对结核分枝杆菌生长的影响。方法诱导表达含有藤黄微球菌Rpf及其结构域基因的融合表达载体pPro-EXHT—Rpf和pPro—EXHT-Rpf domain，在变性条件下对目的蛋白进行纯化。用不同浓度的纯化蛋白刺激不可培养状态结核分枝杆菌的生长。结果获得藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白的纯度分别为95％和93％，相对分子质量（Mr）大小分别为30×10^3和12×10^3，蛋白质含量分别为471mg／L和337ms／L。Western blot证实，获得的蛋白为我们所需要的目的蛋白。所获得的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白能够促进不可培养状态的结核分枝杆菌的生长，而抗藤黄微球菌Rpf结构域的单克隆抗体可以明显抑制结核分枝杆菌的生长。结论表达的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白可以促进结核分枝杆菌的生长，而且藤黄微球菌Rpf蛋白与Rpf结构域蛋白具有一致的生物活性。; 樊爱琳简文郑善銮师长宏马越云杨麦贵柏银兰徐志凯郝晓柯; 关键词：藤黄微球菌结核分枝杆菌结构域

结核分支杆菌ESAT6-MPT64融合蛋白的构建及应用性初步研究被引量：3: 2009年; 目的:构建表达结核分支杆菌ESAT6和MPT64融合蛋白,并评价其在血清学诊断中的价值。方法:PCR法扩增esat6和mpt64基因,构建原核表达载体pProEX HTb-EM,表达、纯化ESAT6-MPT64融合蛋白,Western-blot分析其抗原性。用该重组蛋白ELISA法检测结核病患者血清。结果:原核表达的ESAT6-MPT64融合蛋白约40 000,Western-blot证实重组蛋白与ESAT6和MPT64多克隆抗体特异结合。重组蛋白用于检测结核病患者血清,敏感性为67.7%,特异性为82%。结论:重组的ESAT6-MPT64融合蛋白有可能用于结核病免疫诊断试剂的制备。; 柏银兰薛莹王丽梅樊爱琳张薇康健何俊杰段艳徐志凯; 关键词：结核分支杆菌 ESAT-6 MPT64

结核分枝杆菌mpt64基因真核表达载体的构建及表达被引量：2: 2007年; 构建结核分枝杆菌分泌蛋白mpt64基因真核表达载体。通过PCR法从MTBH37Rv株基因组中扩增mpt64基因,插入pGEM-T-easy载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-),重组质粒酶切鉴定正确后,以Lipo-fectamine2000转染COS-7细胞后,分别以RT-PCR方法检测mRNA表达和间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达。构建了真核表达载体pcDNA-mpt64,RT-PCR结果证明mpt64基因可在COS-7细胞中转录,用间接免疫荧光检测,有表达mpt64蛋白的细胞着染。结果表明,构建结核分枝杆菌mpt64基因的真核表达载体pcDNA-mpt64成功,mpt64基因可以在COS—7细胞中表达。; 柏银兰薛莹徐志凯高辉王丽梅师长宏张海樊爱琳; 关键词：结核分枝杆菌 MPT64 真核表达

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