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骆驼β-防御素-1(caBD-1)基因在组织中的表达定位检测被引量：3: 2005年; Mammalian β-defensins are endogenous cysteine-rich peptide antibiotics that are produced either by epithelial cells lining the respiratory,digestive and urogenital tracts or by granulocytes and macrophages.Here,we examined the expressive tissues of caBD-1 mRNA in camels through RNA in situ hybridization using the digoxigenin-labeled antisense nucleic acid probe which is 42bp and was designed and synthesized according the known caBD-1 cDNA sequence.The result indicates that caBD-1 mRNA express in the stratified squamous epithelium of dorsal tongue and the columnar epithelium of intestinal crypts.; 杨银凤余兴邦唐博曹贵方范光丽; 关键词：原位杂交

骆驼β-防御素caBD-1全长cDNA的扩增被引量：2: 2005年; 获得全长cDNA序列是研究基因结构、基因表达和基因功能的前提。我们根据已获得的骆驼β_防御素caBD_1cDNA的已知序列设计一条上游引物,反转录引物中的部分序列即3′末端序列。另外,采用反向嵌套PCRRACE法,根据caBD_1cDNA的已知序列,设计一条5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物,首先进行反转录(RT),然后将mRNA反转录成的cDNA进行环化,最后进行反向嵌套巢式PCR,成功的克隆了骆驼β_防御素caBD_1cD NA的5′末端序列。本研究扩增出的caBD_1cDNA序列全322bp,其中包含一个由192bp组成的开放读码框(ORF),该ORF编码64个氨基酸残基的前原caBD_1肽。; 杨银凤唐博曹贵方王永胜; 关键词：Β-防御素

绵羊上皮细胞三种纯化与培养方法的比较研究被引量：5: 2006年; 为了探索一种简便、高纯度分离子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞的方法,以及建立高纯度体外子宫内膜细胞培养模型,该试验将原代细胞的3种培养方法,即组织块贴壁法、胰蛋白酶消化法和胶原蛋白酶消化法进行比较,结果表明胶原蛋白酶消化法对细胞的损伤小,细胞生长良好,相比较而言使用胶原蛋白酶消化法最理想。; 袁荣华白萨日娜曹贵方; 关键词：子宫内膜上皮细胞基质细胞细胞培养

骆驼β-防御素caBD-1cDNA的克隆及序列分析被引量：8: 2004年; β-防御素是一类富含半胱氨酸的抗微生物多肽,主要表达在哺乳动物黏膜上皮内。我们发现了一种新的β-防御素—骆驼β-防御素-1(caBD-1)。从骆驼舌黏膜上皮组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出caBD-1的cDNA,并重组到pBlueselectT载体,经限制性内切酶谱分析和DNA序列测定,证实所克隆的caBD-1的cDNA为β-防御素,因为该cDNA包含由192个碱基组成的开放读码框(ORF),该ORF编码64个氨基酸残基的前原防御素,该前原防御素含有β-防御素特征性结构即6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基。骆驼β-防御素的发现对我们更好地理解骆驼黏膜防御机制有很大帮助。; 杨银凤唐博曹贵方; 关键词：Β-防御素 CDNA 基因克隆先天性免疫

骆驼β-防御素caBD-1 cDNA基因全序列RACE扩增方法的建立被引量：2: 2006年; 为获得骆驼β-防御素基因(caBD-1 cDNA)的全长序列,采用锚定PCR RACE技术,根据已获得的骆驼β-防御素基因的部分已知序列,设计了1条特异性引物作为上游引物,将反转录引物中的部分序列即3′接合器引物作为下游引物,成功地克隆了caBD-1 cDNA的3′末端序列;采用反向嵌套PCR RACE技术,根据已获得的骆驼β-防御素cDNA的部分序列,设计了1条5′末端磷酸化的特异性反转录引物和2对特异性反向嵌套PCR引物,首先进行反转录(RT),然后将mRNA反转录的cDNA进行环化,最后进行反向嵌套巢式PCR,成功地克隆了骆驼β-防御素caBD-1cDNA的5′末端序列。结果显示,获得了骆驼β-防御素caBD-1 cDNA基因的全序列。证实,RACE技术用于防御素基因的扩增是可行的。; 唐博曹贵方杨银凤王秀梅; 关键词：Β-防御素

绵羊输卵管上皮细胞的分离与培养被引量：7: 2006年; 通过建立输卵管上皮细胞的体外培养和传代的方法,进行形态学观察及冻存。取雌性绵羊输卵管上皮细胞,用胶原酶消化和不锈钢网过筛法分离输卵管内膜基质细胞和上皮细胞,进行单细胞原代及传代培养。在输卵管上皮细胞的培养可持续培养4～6周,传3～4代。原代培养细胞7d长成单层,传代细胞4d长成单层。该研究旨在建立一套输卵管上皮细胞体外培养和传代的方法,为进一步研究β-防御素在雌性生殖道的作用方面提供很好的研究模型。; 白萨日娜曹贵方唐博; 关键词：绵羊输卵管上皮细胞细胞培养

抗菌肽家族成员——防御素: 2003年; 抗菌肽是生物天然免疫系统中的重要组成部分,具有杀灭病菌、保护机体的作用。病原微生物入侵机体后,诱导机体产生抗菌肽。有的抗菌肽可预先合成并存储于特定的细胞和颗粒中。目前已发现了近120余种抗菌肽。防御素是其中一大家族,广泛分布于动物、植物和昆虫体内,具有高效、广谱抗微生物活性,具有不同于抗生素的独特的抗菌机制。因此,防御素的研究成为当今医药学界的一个热点。; 唐博曹贵方杨银凤额尔敦朝鲁; 关键词：抗菌肽防御素抗菌机制分子结构哺乳动物

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国家自然科学基金(30160063)