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适合于悬浮培养的枇杷愈伤组织诱导及状态调控被引量：4: 2013年; 以枇杷不同品种和不同器官为外植体,通过对愈伤组织诱导率、诱导状态、熊果酸(UA)和齐墩果酸(OA)含量的综合考虑,筛选适合于悬浮培养的枇杷愈伤组织,并通过调整2,4-D、6-BA浓度,同时加入酸水解酪蛋白(CH)、谷氨酰胺(Gln)、KCl等物质对花丝愈伤组织状态进行调控。结果表明:枇杷‘早钟6号’幼胚诱导的愈伤组织最适用于枇杷悬浮培养,愈伤诱导率为83.70%,愈伤组织嫩黄、疏松、颗粒明显,UA、OA含量分别为6.90、2.34 mg/g dw。在MS中附加2,4-D 6.0 mg/L、6-BA 0.8 mg/L、CH 200 mg/L、KCl 500mg/L,花丝诱导的坚硬愈伤出现细软、嫩黄的愈伤组织,但多次继代后水渍化,状态不佳。; 李惠华刘小英王伟常强苏明华; 关键词：枇杷愈伤组织诱导

枇杷细胞悬浮培养生产熊果酸的调控: 以枇杷悬浮培养细胞的生长量及熊果酸的含量为考察指标,从蔗糖浓度、装液量、pH、接种量、温度、光照强度、摇床转速、激素等开展培养参数的筛选。结果表明:接种量8 g/100 m L,p H 6.0,蔗糖30 g/L,25℃,...; 李惠华刘小英常强王伟姚德恒苏明华

枇杷细胞悬浮培养生产熊果酸的调控: 以枇杷悬浮培养细胞的生长量及熊果酸的含量为考察指标,从蔗糖浓度、装液量、pH、接种量、温度、光照强度、摇床转速、激素等开展培养参数的筛选。结果表明:接种量8 g/100 m L,p H 6.0,蔗糖30 g/L,25℃,...; 李惠华刘小英常强王伟姚德恒苏明华; 文献传递

龙脑樟幼茎愈伤组织的诱导被引量：2: 2014年; 以龙脑樟Cinnamomum camphora chvar.Borneol组培苗幼茎为材料诱导优良愈伤组织,采用正交设计法,以愈伤组织的出愈时间、诱导率、生长状态、鲜重生长指数和右旋龙脑含量为指标,筛选最适培养基,尤其是培养基中最佳生长调节剂组合,为利用龙脑樟细胞悬浮培养调控右旋龙脑提供理论依据。结果表明,龙脑樟组培苗幼茎诱导愈伤组织的最适培养基为MS+2,4-D 2 mg·L-1+6-BA 0.6 mg·L-1,右旋龙脑的提取产量为2.6698μg·g-1 DW。; 徐剑李惠华常强王伟苏明华; 关键词：龙脑樟愈伤组织

枇杷悬浮细胞中熊果酸的超声提取及HPLC测定: 2014年; 以枇杷悬浮细胞培养物为材料，通过单因素、正交实验，采用方差分析方法，探索枇杷细胞收集方法、熊果酸提取及测定工艺。结果表明：适宜的收集方法为枇杷悬浮培养细胞液经4层医用纱布布式漏斗抽滤收集。超声波提取条件为：95％乙醇为提取剂，超声功率50w，超声时间25min，料液比1：40，超声次数2次。HPLC色谱条件为：流动相由甲醇和水-冰乙酸-三胺=10：0．03：0．06（V：V：V）两相组成，两相体积比为83：17；流速是1．0mL／min；检测波长是203nm；柱温是30℃。在此条件下，平均加样回收率为99．3％。; 李惠华刘小英陈淳苏明华林建忠; 关键词：枇杷细胞悬浮培养熊果酸超声提取

‘解放钟’枇杷香树脂醇合成酶基因ejAS保守区的克隆被引量：3: 2013年; 以‘解放钟’枇杷(Eriobotrya japonica‘Jie Fang Zhong’)叶片为材料,采用改良SDS法提取总RNA,通过同源克隆和巢氏PCR方法首次从枇杷叶片中分离得到AS基因的保守区序列。结果表明:该AS基因保守区长854 bp,编码284个氨基酸残基,命名为ejAS(GenBank注册号:JX173279.1);经比对,与同为蔷薇科的嘎啦果的同源性最高,达98%,与辽东楤木、乌拉尔甘草、绿玉树等均有70%以上的相似性。; 刘小英苏明华吴少华李惠华; 关键词：枇杷基因克隆同源性

枇杷鲨烯合酶(Squalene synthase)基因的克隆及序列分析被引量：2: 2014年; 鲨烯合酶（SQS）是枇杷三萜酸生物合成过程中的关键酶。以枇杷（Eriobotrya iaponicn L．）悬浮培养细胞为材料，采用RT—PCR和RACE方法分离得到枇杷鲨烯合酶Ej-SQS（Squalene svnthase）基因的cDNA全长序列（GenBank，JQ294055），共1775bp，包含了5’非编码区为97bp，开放阅读框为1239bp，3’非编码区为439bp。该cDNA的开放阅读框推定的氨基酸序列（含412个氨基酸）与其它植物SQS具有79％～94％同源性．包含Trans_IPPS_HH保守结构域，可能属于Isoprenoid Biosynthesis enzymes，Class 1家族。为今后利用基因工程调控枇杷细胞悬浮培养物以提取目标产物奠定基础。; 李惠华刘小英王伟常强苏明华; 关键词：枇杷基因克隆

枇杷细胞悬浮培养生产熊果酸的调控被引量：5: 2015年; 以枇杷悬浮培养细胞的生长量及熊果酸(UA)的含量为考察指标,从蔗糖浓度、装液量、p H值、接种量、温度、光照强度、摇床转速、激素等开展培养参数的筛选。结果表明:接种量8 g/100 m L,p H6.0,蔗糖30 g/L,25℃,白炽灯400 lx,转速130 r/min,装液量130 m L/250 m L,MS+NAA 0.5 mg/L,15 d收获,细胞鲜重是起始的3.577倍,UA含量为34.993 mg/g DW,是自然界枇杷叶的约3.5倍。; 李惠华刘小英常强王伟姚德恒苏明华; 关键词：枇杷熊果酸细胞悬浮培养

波浪式WAVE生物反应器悬浮培养枇杷细胞生产熊果酸的研究被引量：3: 2015年; 采用波浪式WAVE生物反应器放大培养枇杷悬浮细胞,研究细胞生长及熊果酸(UA)的累积情况。摇瓶和反应器中,以细胞的干重和UA的含量为指标进行对比试验;反应器中1 L和5 L工作体积下,以培养液中元素代谢、细胞的干重、UA的含量为指标进行对比试验;生物反应器中,1 L的工作体积下,以接种量、转速、转动角度为因素开展正交试验筛选最佳的组合。反应器中细胞的干重增长及UA含量比摇瓶中高出了105.5%,27.65%;生物反应器中不同的工作体积下,培养液中元素的代谢、细胞的干重及UA的累积情况相似;生物反应器中,接种量为80 g,转速为26 r·min-1,角度为6°是最佳组合,接种后100 h收获,细胞的干重为19.01 g·L-1,UA质量分数为27.750 mg·g-1。结果表明WAVE生物反应器比摇瓶更适合枇杷细胞悬浮培养,并且可实现1 L到5 L的培养放大。; 李惠华姚德恒徐剑王伟常强苏明华; 关键词：枇杷细胞悬浮培养生物反应器熊果酸

枇杷Amyrin Synthase(AS)基因的5'RACE与3'RACE扩增及序列分析: 2014年; 以‘解放钟’枇杷(Eriobotrya japonica L.)叶片为材料,在前期获得保守区的基础上,采用RT-PCR结合RACE技术,扩增得到枇杷三萜合成途径中关键酶香树脂醇合成酶基因的5'和3'序列,并进行序列分析。结果表明,AS基因5'非编码区长96 bp;3'非编码区长321bp,在GenBank中更新的登录号为JX173279.2,结合已发表保守区序列,通过拼接,得到AS基因全长2 700 bp,含有一个2 283 bp的开放阅读框,编码760个氨基酸。生物信息学分析表明,该蛋白是定位于细胞核的蛋白,具有29个磷酸化位点,属于ISOPREN_C2_like超家族,含有Camelliol C synthase、squalene/oxidosqualene cyclases、Squalene cyclase多结构域,与苹果AS基因98%同源。; 李惠华刘小英; 关键词：枇杷基因克隆

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