美国国立卫生研究院基金(IR01AI47997-01)
- 作品数：4 被引量：12H指数：3
- 相关作者：宋桂芹王振辉郝敏常晓彤张颖骞更多>>
- 相关机构：解放军第251医院河北北方学院德克萨斯大学更多>>
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- 沙眼衣原体OmcBc基因的克隆、表达与抗原性研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨重组沙眼衣原体OmcB基因C端编码蛋白的抗原性,为衣原体感染性疾病的早期诊断和疫苗研究提供新的靶标。方法采用PCR技术从沙眼衣原体基因组中扩增OmcB的C端(T270-Y553)序列,并构建pGEX-6p-CtOmcBc原核表达质粒,转染大肠杆菌XL-1blue,IPTG诱导表达重组GST-OmcBc融合蛋白;收集120例Ct生殖道感染患者血清,以CtD血清型灭活的EB分别于皮下和腹腔免疫7只新西兰大白兔和5只Balb/C小鼠,以CtD血清型活的EB滴鼻感染9只Balb/C小鼠,分别收集这些动物免疫血清;间接免疫荧光法检测各血清中抗衣原体特异性抗体的效价;ELISA法检测重组GST-OmcBc融合蛋白与各免疫血清的反应性。结果成功构建了pGEX-6p-CtOmcBc原核表达质粒,经测序显示插入基因长度为852bp,编码284个氨基酸。IPTG成功诱导表达了重组GST-OmcBc融合蛋白,其分子质量约为57kDa;所制备和收集的各免疫血清均含高滴度抗衣原体特异性抗体;ELISA结果显示重组GST-OmcBc融合蛋白对各免疫血清均具有强的抗原性。结论 CtOmcBc是衣原体的一个免疫优势蛋白,重组GST-OmcBc融合蛋白的成功表达及其良好的抗原性为进一步开展衣原体感染早期诊断研究和疫苗的研发奠定了基础。
- 王洁张颖骞钟光明余平
- 关键词：沙眼衣原体抗原性
- TLR2信号在沙眼衣原体生殖道感染中介导了早期炎症细胞因子的产生被引量：5
- 2015年
- 目的探讨TLR2和TLR4在小鼠沙眼衣原体生殖道感染免疫应答中的作用。方法用沙眼衣原体小鼠肺炎株(Mo Pn,1×104IFUs)经生殖道感染野生型小鼠(WT,11只)、TLR2基因缺陷小鼠(TLR2 KO,14只)和TLR4基因缺陷小鼠(TLR4 KO,11只),复制生殖道沙眼衣原体感染模型。于感染后不同时间点取生殖道分泌物,部分用于免疫荧光法检测衣原体包涵体数量,部分用于炎症细胞因子IL-1α、IL-6和MIP-2水平检测。在感染后第70天,处死小鼠,无菌分离腹腔巨噬细胞,于体外衣原体Mo Pn感染,培养24 h后,测定上清液中IL-1α、IL-6和MIP-2含量。细胞因子含量测定均采用ELISA法。结果 TLR2 KO或TLR4 KO小鼠与WT小鼠在每一个检测时间点下生殖道带菌量无差异,且带菌持续时间相同,截止到感染后第38天,3种基因型所有小鼠均清除了下生殖道感染的衣原体。TLR2基因缺失小鼠巨噬细胞产生的炎症细胞因子IL-1α、IL-6和MIP-2水平均明显低于野生型WT小鼠(P<0.01),而TLR4基因缺失小鼠巨噬细胞产生的3种炎症细胞因子水平均与野生型WT小鼠无差异(P>0.05);TLR2基因缺失小鼠棉拭子标本同样具有较低水平的炎症细胞因子(P<0.05)。结论在沙眼衣原体生殖道感染中,TLR2介导了早期炎症细胞因子的产生。沙眼衣原体诱导的早期免疫应答部分依赖于TLR2,而不依赖TLR4。
- 王振辉常晓彤郝敏宋桂芹侯丽娟张颖骞
- 关键词：沙眼衣原体TOLL样受体2TOLL样受体4生殖道感染
- TLR2和TLR4在小鼠生殖道沙眼衣原体感染免疫应答中的应用研究被引量：2
- 2015年
- 目的探讨TLR2和TLR4在小鼠沙眼衣原体生殖道感染免疫应答中的作用。方法用沙眼衣原体小鼠肺炎株(MoPn)1×104 IFUs经生殖道感染野生型小鼠(WT,11只)、TLR2基因缺陷小鼠(TLR2KO,14只)和TLR4基因缺陷小鼠(TLR4KO,11只),复制生殖道沙眼衣原体感染模型。于感染后不同时间点取生殖道分泌物,采用免疫荧光法检测衣原体包涵体数量。在感染后第70d处死小鼠,留取血清,采用免疫荧光法检测抗体类型和效价;无菌分离的脾细胞,用经紫外线灭活的衣原体EB刺激培养72h,采用ELISA法测定上清液中细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-4和IL-5水平。结果 TLR2KO或TLR4KO小鼠与WT小鼠在每一个检测时间点生殖道带菌量差异无统计学意义(P>0.05),3组小鼠带菌持续时间相同,截止到感染后第38d,所有小鼠下生殖道感染的衣原体均被清除.。3种基因型小鼠脾细胞均产生高水平的IFN-γ和IL-17,且3组间差异无统计学意义(P>0.05);但IL-4及IL-5水平均降低,且3组间差异无统计学意义(P>0.05)。3种基因型小鼠血清IgG2a/IgG1比值均>1,且组间差异无统计学意义(P>0.05)。3种基因型小鼠均发展为Th1偏倚的免疫应答。结论在沙眼衣原体生殖道感染中,TLR2或TLR4介导的信号通路对控制小鼠下生殖道衣原体感染不是必需的,沙眼衣原体诱导的适应性免疫应答既不依赖于TLR2,也不依赖于TLR4。
- 马科王振辉宋桂芹郝敏张颖骞常晓彤
- 关键词：沙眼衣原体TOLL样受体2TOLL样受体4生殖道感染免疫应答
- Toll样受体2(TLR2)和TLR4在沙眼衣原体生殖道感染介导的免疫应答被引量：4
- 2015年
- 目的 探讨Toll样受体2（TLR2）和TLR4在小鼠沙眼衣原体生殖道感染中的作用。方法用1×104包涵体形成单位的MoPn沙眼衣原体小鼠肺炎株经生殖道感染野生型（WT）小鼠（n=11）、 TLR2基因缺陷 （TLR2-/-）小鼠（n=14）和TLR4-/-小鼠（n=11）, 复制生殖道沙眼衣原体感染模型。在感染后第3、7、10、17、24、31、38、45天取阴道棉拭子, 免疫荧光法检测衣原体包涵体数量, ELISA检测白细胞介素1α（IL-1α）、IL-6和巨噬细胞炎性蛋白2（MIP-2）水平。感染后第70天, 采用免疫荧光法分析血清抗体类型和效价; 用MoPn沙眼衣原体感染无菌分离的腹腔巨噬细胞, 培养24 h, ELISA测定上清液中IL-1α、IL-6和MIP-2含量; 体外用紫外线灭活的衣原体抗原刺激无菌分离的脾细胞, 培养72 h, ELISA测定上清液中γ干扰素（IFN-γ）、IL-17、IL-4和IL-5水平。结果 与WT小鼠相比, TLR2-/-或TLR4-/-小鼠在各时间点的生殖道带菌量无差异、且带菌持续时间相同, 感染后第38天, 所有小鼠均清除了下生殖道感染的衣原体。TLR2-/-小鼠巨噬细胞产生的IL-1α、IL-6和MIP-2水平均明显低于WT小鼠,而TLR4-/-小鼠巨噬细胞产生的3种炎症细胞因子水平均与WT小鼠无显著性差异; TLR2-/-小鼠棉拭子标本具有较低水平的炎症细胞因子。所有小鼠脾细胞均产生高水平的IFN-γ和IL-17、 较低水平的IL-4和IL-5、血清IgG2a/ IgG1比值均大于1, 但各组间无显著性差异。结论 TLR2而不是TLR4介导了沙眼衣原体生殖道感染的早期免疫应答, 但沙眼衣原体诱导的适应性免疫应答可能既不依赖于TLR4, 也不依赖于TLR2。
- 王振辉常晓彤郝敏宋桂芹朱晓波张颖骞
- 关键词：沙眼衣原体TOLL样受体2TOLL样受体4生殖道感染免疫应答
