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H7N9亚型禽流感病毒RT-PCR检测方法建立被引量：17: 2015年; 【目的】2013年3月,中国国家卫生和计划生育委员会宣布在上海、安徽地区发现了人感染H7N9亚型流感病毒事件,由于这种新型重组H7N9流感病毒未曾有过感染人或者动物的报道,因此出现了一系列亟待解决的问题,引起了全世界范围的广泛关注。根据H7N9亚型禽流感病毒HA和NA核苷酸序列,设计并合成靶基因为HA和NA的2对引物,建立快速检测H7N9亚型禽流感病毒的一步法RT-PCR检测方法。【方法】根据测序结果,用DNAStar生物软件进行同源性分析比较,选出H7和N9基因中高度保守且特异的核苷酸区域,用oligo6.0软件设计针对H7和N9基因的引物。用Trizol LS提取RNA,采用一步法Access RT-PCR扩增反应液,建立了一步法检测H7N9亚型禽流感病毒RT-PCR方法。以H7N9亚型流感病毒为阳性对照,其他亚型流感病毒以及新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊等其他禽病病原作为阴性对照,按所建立的反应体系和反应程序进行RT-PCR反应,验证所建立方法的特异性。对病毒含量为106.5 EID50·m L-1的H7N9亚型禽流感病毒尿囊液依次进行10倍倍比稀释,提取RNA用RT-PCR方法检测,评价其敏感性。另外,采取双盲试验用荧光定量RT-PCR对该方法进行了比对验证。【结果】用H7亚型特异性引物检测H1—H15亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他禽病病原,除H7亚型流感病毒外,其他样品均为阴性;用N9亚型特异性引物检测N1—N9亚型禽流感病毒和其他禽病病原,仅当前流行的H7N9亚型AIV样品有特异性目的条带,与其他N1—N9亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他禽病病原均无交叉反应。通过对H7N9亚型禽流感病毒尿囊液进行10倍倍比稀释检测,证实该方法最低检出量为1.4×102.5 EID50·m L-1,并可以从阳性棉拭子浸出液中扩增出目的基因片段。【结论】该RT-PCR方法具有特异性强和准确率高的特点,可以作为H7N9亚型AIV核酸检测的一种有; 王云鹤包红梅孙佳善李雁冰徐晓龙王子龙施建忠曾显营王秀荣陈化兰; 关键词：禽流感病毒 RT-PCR

不同体型比格犬血清肿瘤标志物含量调查: 2017年; 本试验拟对大、中、小体型3个品系的健康成年比格犬血清肿瘤标志物AFP、CEA、CA125、CA153、CA199进行检测,用犬肿瘤标志物AFP、CEA、CA125、CA153、CA199 ELISA试剂盒,对97只健康成年大体型比格犬、228只中体型比格犬、63只小体型比格犬的血清进行相关肿瘤标志物浓度测定,为比格犬肿瘤模型筛选提供参考。试验结果表明,小体型比格犬血清中AFP、CA125、CA153、CEA的浓度明显低于其他两个品系犬(P<0.05);而CA199的浓度明显高于中体型比格犬(P<0.05)。大体型比格犬血清中AFP、CEA、CA125、CA153的浓度最高,小体型比格犬血清中CA199最高,推测认为大体型比格犬患消化系统和生殖系统肿瘤的风险较高,小体型比格犬患腺癌的风险较高。; 刘宏王森黄凯杨宗统项路娟王冬冬刘永举王建琳尹燕博; 关键词：比格犬血清肿瘤标志物 ELISA

猫用高效狂犬病灭活疫苗研究被引量：2: 2015年; 目的研制水包油新型佐剂狂犬病疫苗开展猫的免疫试验。方法利用BHK-21细胞培养狂犬病病毒鼬獾源性JX04-45株,病毒滴度达到107.5 TCID50/mL以上的病毒培养物用于灭活和疫苗制备,佐剂为新型水包油型;通过本实验室建立的荧光抗体病毒中和试验(FAVN)测定疫苗效力和猫免疫后的中和抗体,并进行了攻毒试验,评价本疫苗免疫效果。结果一个剂量的疫苗免疫小鼠后FAVN方法测定的疫苗效力≥3.0IU/剂量;水包油佐剂型狂犬病灭活疫苗免疫猫后14d时无不良反应,FAVN测得其诱导的中和抗体水平平均达16.04±4.29IU/mL,28d平均达37.13±6.12IU/mL,56d为21.01±7.61IU/mL。180d为6.71±3.44IU/mL,360d为2.66±2.01IU/mL。至15个月时,咬肌攻毒106 MIC LD50狂犬病病毒BD06株,观察90d试验组无一死亡,对照组全部死亡。结论本疫苗诱导长达1年的免疫保护,可扩大安全评价和临床试验,以验证其实用价值。; 张菲何娜王颖刘晔张守峰扈荣良; 关键词：狂犬病灭活疫苗中和抗体攻毒试验

西瓜嫁接育苗与机械嫁接技术研究进展被引量：9: 2012年; 西瓜是我国园艺生产中的重要经济作物,为了克服连作而引起的枯萎病、根结线虫病和土壤盐渍化等问题,嫁接技术被广泛的应用于西瓜生产。人工嫁接劳动强度大,嫁接和管理用工量大、技术要求高,是嫁接西瓜苗推广应用的主要限制因素。在回顾西瓜嫁接育苗技术发展的基础上,阐述了机械嫁接机及其配套的断根嫁接、大接穗嫁接、苗床四段式管理等关键技术在西瓜工厂化育苗中的应用。; 丁明黄丹枫; 关键词：西瓜工厂化育苗机械嫁接嫁接机断根嫁接

家蚕丝腺生物反应器表达狂犬病病毒核蛋白被引量：3: 2013年; 【目的】采用家蚕丝腺生物反应器这一蛋白高效表达系统,尝试建立一种高效、低廉、稳定生产狂犬病病毒核蛋白(RVNP)的技术体系,为生产基因工程疫苗奠定基础。【方法】通过RT-PCR方法克隆获得RVNP序列,采用家蚕丝胶蛋白基因(Ser1)启动子为特异性启动子,将RVNP构建到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记基因的piggyBac转座子表达载体(pBA3EGFP)中,并采用显微注射转基因家蚕技术构建家蚕丝腺生物反应器。【结果】G1代通过EGFP标记的筛选获得转基因家蚕阳性蛾区26个,蛾圈阳性率为59.09%。PCR实验证实RVNP已经整合到家蚕基因组中,Western blot分析表明RVNP蛋白可能附着于丝胶蛋白并随家蚕吐丝行为分泌到蚕茧中。【结论】获得了能够表达外源的RVNP蛋白的转基因家蚕品系,该系统有望成为高效、低廉、稳定地生产狂犬病基因工程疫苗的技术体系之一。; 尤征英危浩阮系真叶露鹏王少华周继勇钟伯雄; 关键词：狂犬病 PIGGYBAC 家蚕

创新应用信息技术促进蔬菜种苗产业发展被引量：14: 2012年; 从蔬菜产业发展对穴盘育苗的需求出发,综述了中国育苗技术的研究与发展。通过分析穴盘育苗的技术瓶颈,提出了以信息技术、智能装备和种苗质量管理多目标控制技术为核心的关键技术突破点;阐述了幼苗生长-环境-执行设备的信息获取与解析、精量播种、智能灌溉、温室物流、多点管理和多目标控制的育苗质量管理等关键技术与装备的创新驱动对种苗产业发展的支撑。; 黄丹枫; 关键词：蔬菜穴盘育苗信息技术智能灌溉

叶菜类蔬菜生产机械化发展对策研究被引量：68: 2012年; 叶菜类蔬菜约占蔬菜生产的1/3,劳动力紧缺、机械化水平低已经成为叶菜类蔬菜生产发展的制约因素。本文以蔬菜生产产业链为主线,论述叶菜类蔬菜生产的主要环节和对机械化的技术需求,在分析叶菜类蔬菜生产机械化现状和存在问题的基础上,结合国际蔬菜生产装备先进经验,提出叶菜类蔬菜生产机械装备和技术的发展对策。; 黄丹枫; 关键词：叶菜类机械化产业链

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国家高技术研究发展计划(2012AA101303)

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