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国家自然科学基金(81172404)
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CUIAB低表达抑制神经胶质母细胞瘤增生的实验研究
2016年
目的通过抑制Cullin4B(简称为CUIAB)在神经胶质母细胞瘤U87和U251细胞中的表达,探讨CUL4B在神经胶质母细胞瘤形成中的作用及其机制。方法体外实验设立3组,分别为空白对照组、Lv-shCon组以及Lv-shCUL4B组;体内实验设立2组,分别为Lv-shCon组和Lv-shCUL4B组。采用CUL4BsiRNA构建慢病毒并感染U87和U251细胞株,以下调细胞中CUL4B的表达。通过实时定量PCR(qPCR)和Westernblot方法检测各组细胞中CUL4B的表达。以MTF法和细胞集落形成实验分别检测细胞增殖能力和集落形成能力。通过Transwell实验检测细胞的迁移能力。采用流式细胞术进行细胞周期分析。以Westernblot方法检测细胞周期和细胞迁移的相关调控因子的表达。建立U87和U251细胞移植瘤裸鼠模型,观察各组动物的瘤体生长情况。结果qPCR和Westernblot结果表明,与空白对照组和Lv-shCon组相比,Lv-shCUL4B组U87细胞和U251细胞的CUIAB表达均下降(均P〈0.01)。MTF实验表明,与空白对照组相比,Lv-shCUL4B组的生长均明显受到抑制,U87细胞的增殖能力降低了63.7%,U251细胞降低了45.5%(均P〈0.01)。与空白对照组和Lv.shCon组相比,Lv-shCUL4B组U87和U251细胞集落均数均减少(均P〈0.01)。Transwell实验结果显示,U87和U251细胞Lv-shCUIAB组发生迁移的能力均低于空白对照组和Lv-shCon组(均P〈0.01)。流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组及Lv-shCon组相比,U87和U251细胞Lv-shCUL4B组处于G1期的比例上升,处于S期的比例下降。与空白对照组和Lv-shCon组相比,U87和U251细胞Lv.shCUL4B组CyclinD1和MMP-9的表达水平下降(均P〈0.01),p16(INK4A)和PTEN的表达水平升高(均P〈0.01)。体内实验结果表明,与Lv-shCon组相比,Lv-shCUL4B组U87细胞种植裸鼠的肿瘤重量下降57.7%,U251细胞种植裸鼠的肿瘤重量下降75.4%(均P〈0.01)。结论CUL4B低表�
董军
姚静静
王兴强
付莛凯
杨允学
张玉海
孙国庆
李新钢
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胶质母细胞瘤
细胞增殖
细胞周期蛋白质类
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