国家自然科学基金(81172433)
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
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- 过表达miR-17—92基因簇对前列腺癌细胞生物学特性的影响及机制被引量：3
- 2017年
- 目的探讨过表达miR-17-92基因簇对前列腺癌细胞生物学特性的影响及潜在机制。方法采用过表达miR-17-92基因的质粒转染包装细胞，并构建过表达miR-17-92基因簇的前列腺癌DU145-17-92细胞。采用xCelligence系统实时动态监测DU145-control和DU145-17-92细胞的生长能力，采用Ki-67抗原检测技术和原位末端转移酶标记技术（TUNEL）分别检测DU145-control和DU145-17-92细胞中细胞增殖和凋亡情况，采用流式细胞术分析DU145-control和DU145-17-92细胞的细胞周期，采用Western blot检测DU145-control和DU145-17-92细胞中凋亡相关蛋白和增殖相关蛋白的表达。结果xCelligence系统监测显示，从接种24 h后，DU145-17-92细胞的生长速度显著高于DU145-control细胞（P〈0.01）。细胞培养24、48、72 h后，DU145-control组的Ki-67阳性细胞率分别为（56.57±1.68）%、（85.48±0.26）%和（90.85±2.08）%，DU145-17-92组的Ki-67阳性细胞率分别为（73.64±0.68）%、（93.43±1.23）%和（97.36±0.86）%，两组仅在培养24 h时差异有统计学意义（P〈0.01）。细胞培养24、48、72 h后，DU145-control组的细胞凋亡率分别为（6.76±0.09）%、（14.51±0.86）%和（20.73±1.64）%，DU145-17-92组的细胞凋亡率分别为（1.86±0.15）%、（7.90±0.40）%和（4.92±0.48）%，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。Western blot检测显示，DU145-control和DU145-17-92细胞中，Bcl-2家族促凋亡蛋白（BIM）的表达水平分别为0.83±0.00和0.16±0.00, 人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物（PTEN）蛋白的表达水平分别为0.91±0.00和0.13±0.00，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。过表达miR-17-92基因簇促进了蛋白激酶B（Akt）中丝氨酸473位点（p-Akt-473）的磷酸化，但对308位点（p-Akt-308）的磷酸化无明显影响。DU145-control和DU145-17-92细胞中磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）蛋白的表达水平分别为0.21±0.01和0.72±0.01，�
- 周鹏马亮周珺徐晶晶刘菲国风
- 关键词：细胞外调节蛋白激酶
- 前列腺癌细胞中核因子κB家族成员调控乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂表达的机制
- 2012年
- 目的探讨核因子κB（NF—κB）家族成员（RelA、pSO、RelB和p52）调控抑癌基因乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂（Maspin）表达的可能机制。方法采用Westernblot法检测前列腺癌细胞株DUl45、PC-3和LNCaP中NF-κB家族成员和Maspin蛋白的表达情况。采用RNA干扰技术结合Westernblot法，检测RelB或RelA沉默对前列腺癌DUl45细胞中Maspin蛋白表达的影响。采用流式细胞术检测RelB沉默后前列腺癌DUl45细胞的死亡情况。通过转染RelB表达质粒并建立稳定表达细胞株，观察过表达RelB对前列腺癌PC-3细胞中Maspin蛋白表达的影响。结果RelA、pSO、RelB和p52蛋白在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株DUl45和PC-3中呈持续性高表达，其中RelB蛋白在DUl45细胞中的表达最为显著。Maspin蛋白在LNCaP和DUl45细胞中低表达，而在PC-3细胞中高表达。在DUl45细胞中，沉默RelB可以诱导Maspin蛋白表达上调，同时促进细胞死亡[死亡率为（13．3±4．2）％]。在PC．3细胞中，过表达RelB可抑制Maspin的内源性表达。RelA沉默对DUl45细胞中Maspin蛋白的表达无显著影响。结论在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株中，NF-κB经典与非经典通路蛋白持续性活化，RelB与Maspin的表达呈负相关性。RelB负性调控了内源性Maspin的表达，进而影响了前列腺癌细胞的存活。RelA并不参与对Maspin表达的调控。
- 马亮沈雅颖周鹏周珺国风
- 关键词：核因子ΚB
- Maspin在非小细胞肺癌A549细胞生物学行为中的作用
- 2015年
- 目的:探讨乳腺丝氨酸蛋白酶抑制物(maspin)对于非小细胞肺癌细胞生物学有何影响及其作用机制。方法:PCR扩增人类maspin编码区全长,并构建maspin过表达载体,转染A549细胞。药物筛选出稳定高表达maspin蛋白的细胞株,并通过real-time PCR和Western blot鉴定。通过x Celligence系统实时动态观测转染后A549细胞的生长、迁移和侵袭情况。利用Western blot和real-time PCR的方法对此细胞生物学变化的相关基因进行分析,探讨相应的作用机制。结果:成功构建过表达Maspin的载体MSCV-maspin,并获得稳定高表达maspin的A549细胞株(A549-maspin)。A549-control细胞和A549-maspin细胞生长曲线无差异,但是迁移和侵袭曲线有显著差异。在A549-maspin细胞中integrinβ1的表达水平低于A549-control细胞。结论:Maspin对于A549细胞的生长无影响,但是抑制了A549细胞的迁移和侵袭能力,并且此抑制作用与integrinβ1相关。
- 周珺周鹏秦华龙国风
- 关键词：非小细胞肺癌细胞迁移细胞侵袭
- CHIP在乳腺癌组织中的表达及其临床意义
- 2015年
- 目的探讨Hsc70羧基末端反应蛋白(CHIP)在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征、分子分型的关系。方法采用免疫组化检测128例乳腺癌组织中CHIP蛋白的表达,分析CHIP表达与临床病理特征以及与不同分子分型乳腺癌的关系。结果乳腺癌组织中CHIP阳性表达率为60.2%,Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌患者CHIP阳性表达率为43.2%,显著低于Ⅰ、Ⅱ期的67.0%;伴有淋巴结转移者CHIP阳性表达率显著低于无淋巴结转移者,差异有统计学意义(P<0.05);Luminal A型、Luminal B型、HER-2型、Basal-like型中CHIP阳性表达率分别为66.7%、70.5%、50.0%和44.0%,差异亦具有统计学意义(P<0.05)。CHIP表达与年龄、组织学分级、肿瘤大小、有无远处转移及HER-2表达等无关。结论乳腺癌CHIP表达与肿瘤发生发展密切相关,并可能作为预测患者复发风险的指标。
- 王欢王杰刘菲国风
- 关键词：乳腺癌分子分型
- miR-17-92基因簇增强前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂的耐药性被引量：3
- 2017年
- 背景与目的:mi R-17-92基因簇与多种疾病的发生密切相关,其在肺癌、肝癌、胃癌和前列腺癌等多种肿瘤细胞中均高表达。本研究利用慢病毒包装系统建立稳定高表达mi R-17-92基因簇的DU145细胞株,探讨mi R-17-92基因簇对前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的影响。方法:构建高表达mi R-17-92基因簇的表达载体,转染DU145细胞株,同时转染空载体作为对照,并用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)进行鉴定。用x CELLigence系统监测细胞的迁移、侵袭能力及顺铂处理后的生长情况;通过划痕实验观察细胞的迁移情况;采用蛋白[质]印迹法(Western blot)、凝胶酶谱实验和RTFQ-PCR检测相关蛋白质和基因的表达以探讨mi R-17-92增强DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的相关机制。结果:DU145-mi R-17-92细胞迁移速率和侵袭能力高于DU145-control细胞(P<0.01)。DU145-mi R-17-92细胞中整合素β1的蛋白质表达水平和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)的活性显著高于DU145-control细胞。顺铂处理后,DU145-mi R-17-92细胞的生长速度自12 h起快于DU145-control细胞并呈顺铂耐药性(P<0.01)。细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)在DU145-mi R-17-92细胞中呈现持续高水平磷酸化,顺铂处理后,其磷酸化水平无明显变化。DU145-mi R-17-92细胞中切除修复互补交叉基因1(excision repair cross complementing1,ERCC1)的m RNA和蛋白质表达水平显著高于DU145-control细胞。结论:高表达mi R-17-92增强了DU145细胞的迁移、侵袭能力,其机制与整合素β1的表达上调及MMP-9活性增强有关。此外,高表达mi R-17-92增强了DU145细胞对顺铂的耐药性,该过程与ERK1/2的磷酸化水平增加和ERCC1的表达水平上调相关。
- 陈昊周鹏徐晶晶周珺国风
- 关键词：前列腺肿瘤迁移顺铂
- 核转录因子RelB对慢性B淋巴细胞白血病细胞蛋白酶体抑制剂敏感性的影响被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨核转录因子RelB对慢性B淋巴细胞白血病（B-CLL）细胞蛋白酶体抑制剂敏感性的影响.方法 以初诊B-CLL患者CD5＋CD19＋细胞为研究对象,用RT-PCR法检测NF-κB家族成员RelB mRNA的表达水平;采用凝胶迁移实验及TransAMTMELISA法分析细胞核中RelB的活性;根据CLL细胞RelB活性将细胞分为RelB阳性（RelB＋）和RelB阴性（RelB-）两组,与人骨髓基质细胞共培养,分别加入氟达拉滨（10 μmol/L）、MG-132（1 μmol/L）和硼替佐米（1μmol/L）作用不同时间,采用碘化丙锭染色法分析药物对RelB＋和RelB-细胞死亡率的影响.结果 CLL细胞存在RelB mRNA表达及RelB活化,不同CLL细胞RelB mRNA表达水平及RelB活化水平不一.与骨髓基质细胞共培养时,三种药物均可促进细胞死亡,并具有时间依赖性.氟达拉滨对RelB＋和RelB-组CLL细胞的杀伤活性无明显差异,作用72 h后,两组CLL细胞死亡率分别为（61.11±6.91）％和（67.57±9.45）％;MG-132处理72 h对RelB＋细胞的杀伤活性高于RelB-组,两组细胞死亡率分别为（66.22±3.39）％和（51.07±5.93）％;硼替佐米处理24及48 h对RelB＋细胞杀伤活性高于RelB-组.24 h,两组细胞死亡率分别为（75.50±4.66）％和（66.32±10.20）％;48 h,死亡率分别为（92.11±3.14）％和（85.84±5.81）％.结论 骨髓来源CLL细胞中存在以RelB为代表的非经典性NF-κB活性.RelB活性增强可增加CLL细胞对蛋白酶体抑制剂硼替佐米和MG-132的敏感性,而对氟达拉滨的敏感性无明显影响.
- 徐晶晶周鹏孙爱宁国风
- 关键词：蛋白酶体抑制剂
- 非经典性NF—κB活性在慢性B淋巴细胞白血病中的作用被引量：2
- 2014年
- 目的探讨非经典性NF—κB信号通路在慢性B淋巴细胞白血病（B—CLL）中的作用。方法采用实时荧光定量RT-PCR法检测56例B—CLL初诊患者骨髓CD5＋CD19＋细胞（CLL—B细胞）NF-κB家族成员mRNA表达水平；采用TransAM^TM ELISA法定量分析CLL—B细胞核中NF-κB蛋白质复合物的活性成分；采用流式细胞术分析CLL—B细胞体外单独或与骨髓基质细胞（hBMSC）共培养后细胞死亡率；采用Westemblot法检测共培养对骨髓CLL-B细胞中NF-κB家族成员RelA和RelB蛋白水平表达的影响。结果CLL—B细胞的NF-κB家族成员RelA、p50、RelB和p52mRNA水平均高于正常B细胞，差异有统计学意义（P值均〈0．01）。所有标本中CLL—B细胞都存在RelA活化，而RelB只在部分标本中活性增强。CLL．B细胞核中平均RelA活性比正常B细胞显著增强，而平均RelB活性与正常B细胞相似。体外单独培养24、48和72h时，RelA＋／RelB组CLL．B细胞死亡率分别为（35．544-4．43）％、（50．92土8．44）％和（49．24士8．16）％；RelA＋／RelB＋组CLL—B细胞死亡率分别为（20．65±2．37）％、（18．17±1.36）％和（26．55±4．08）％。与hBMSC共培养，RelA＋／RelB一组CLL．B细胞死亡率较单独培养时下降，但相对于RelA＋／RelB＋组CLL—B细胞死亡率仍较高；共培养48h后，RelA＋／RelB-组CLL—B细胞中RelA和RelB显著上调，RelA＋／RelB＋组中CLL—B细胞质中RelA表达上调，RelB在胞质中显著下调并在胞核中轻度上调。结论骨髓CLL—B细胞中存在非经典性NF-κB的活化，RelB活化程度在不同的CLL—B细胞中差异显著；RelB和RelA活化共表达赋予骨髓CLL—B细胞存活优势，CLL—B细胞与hBMSC共培养，通过诱导CLL—B细胞中RelA和RelB的表达发挥对其体外存活的保护作用。
- 徐晶晶周鹏国风
- 关键词：骨髓基质细胞
