国家科技重大专项(2008ZX10001-013)
- 作品数：14 被引量：60H指数：4
- 相关作者：安小平陈斌童贻刚米志强李存更多>>
- 相关机构：军事医学科学院中山大学中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 利用移码突变和终止密码子提高下游目的基因的表达水平被引量：3
- 2011年
- 目的:在基因结构复杂的慢病毒载体插入报告基因并提高目的基因表达量。方法:慢病毒载体上有复杂的基因排列,为了不影响慢病毒载体的活性,必须尽量保留原有的基因,替换不必要的基因。首先将报告基因萤光素酶插入慢病毒载体替换基因Env后,结果检测不到报告基因的表达。为了提高报告基因的表达水平,将报告基因的读码框向后移动一个碱基,同时在其上游增加一个终止密码子,然后检测报告基因的表达水平。结果:通过移动报告基因的读码框同时在上游增加终止密码子,使报告基因的表达水平大大提高。结论:在构建基因表达载体时,通过改变目的基因与上游起始密码子ATG之间的相对位置以及增加终止密码子,可以大幅提高目的基因的表达水平。
- 陈斌李建彬米志强安小平李存刘大斌姜焕焕王娟黄芬张宝中范华昊何后军童贻刚
- 关键词：慢病毒载体报告基因基因表达定点突变
- 改进的反向斑点杂交方法被引量：1
- 2011年
- 目的改进反向斑点杂交的操作方法,探索更为简便快捷的实验流程。方法优化杂交液II的组分,使用HPV基因分型、β-地中海贫血基因突变和HBV基因分型三个试剂盒验证改进的实验方法。结果 HPV基因分型、β-地中海贫血基因突变和HBV基因分型试剂盒的实验结果证实,使用优化后的杂交液II,链霉亲和素过氧化物酶在杂交温度能够有效地与生物素结合,试剂盒的灵敏度不受影响且膜条的背景低。结论改进的反向斑点杂交方法不影响试剂盒的灵敏度,并且操作简便、实验时间短、实验结果背景低。
- 林炳生张太松胥顺董瑞华陈华云李明程钢
- 关键词：反向斑点杂交
- Dot-ELISA法检测血液及唾液HIV抗体的应用评价被引量：2
- 2014年
- 评价人类免疫缺陷病毒1+2型抗体检测试剂盒(Dot-ELISA法)检测血清和唾液样本的临床性能。采用对照试验研究,选取背景清晰的研究对象200例,采集同一研究对象的血清和唾液样本,应用万泰生物药业公司生产的人类免疫缺陷病毒1+2型抗体检测试剂盒作为考核试剂,法国生物梅里埃公司生产的人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒(ELISA法)作为参考试剂,考核试剂检测结果与参考试剂及研究对象背景进行比较分析。考核试剂检测血清HIV抗体与参考试剂相比较,阳性符合率100%,阴性符合率100%,总符合率100%,Kappa值1.00,一致性为最强;考核试剂检测唾液HIV抗体与参考试剂检测结果相比较,阳性符合率98.78%,阴性符合率100%,总符合率99.50%,Kappa值0.99,一致性为最强。Dot-ELISA法人类免疫缺陷病毒1+2型抗体检测试剂盒对血清及唾液样本检测性能优越,适合HIV抗体快速筛查。
- 王倩崔晨杨志东尚红
- 关键词：人类免疫缺陷病毒抗体ELISA
- 三种HIV抗体确证试剂盒检测早期感染的比较被引量：15
- 2011年
- 目的 比较3种HIV抗体确证试剂盒检测HIV早期感染的性能.方法 对5份HIV抗体阳性血浆样品进行10倍系列稀释,然后用ELISA检测.对检测结果呈阳性反应的稀释样品分别用3种HIV抗体确证试剂盒进行检测以测试其灵敏度,所用试剂盒包括北京万泰公司的HIV 1＋2型抗体检测试剂盒（万泰RIBA）、新加坡MP公司的HIV 1＋2型抗体检测试剂盒（MP-WB）和比利时Innogenetics公司的INNO-LIA TM HIV Ⅰ/ⅡScore（INNO-LIA）.用这些试剂盒检测11套HIV抗体阳转血清盘中ELISA试验呈阳性反应的样品（共48份）.结果 对HIV抗体阳性稀释样品的检测结果显示,当5份样品在稀释100倍时,万泰RIBA均检测出阳性结果.在ELISA试验呈阳性反应的48份HIV抗体阳转血清盘样品中,万泰RIBA、MP-WB和INNO-LIA的确证阳性率分别为97.92%（47/48）、81.25%（39/48）和91.67%（44/48）.万泰RIBA与MP-WB之间差异有统计学意义（χ2=6.13,P＜0.05）,INNO-LIA与MP-WB之间差异有统计学意义（χ2=5.48,P＜0.05）,而万泰RIBA与INNO-LIA之间差异无统计学意义（χ2=1.33,P＞0.05）.对于含有HIV抗体检测结果不确定样品的6套阳转血清盘,用万泰RIBA、MP-WB和INNO-LIA检测的平均阳转时间分别为0.7、13.3、3.7 d.结论 与我国目前常用的MP-WB相比,万泰RIBA和INNO-LIA可以缩短HIV抗体确证的窗口期.
- 王增强张桂云蒋岩张辉江华洲沈圣潘品良刘波邱茂锋
- 关键词：HIV抗体确证试验
- HIV-1B′亚型毒株新型耐药相关突变位点的筛选被引量：3
- 2011年
- 目的筛选HIV—1 B′亚型病毒株中可能存在的新型耐药相关突变位点。方法收集整理前期研究获得的451条H1V-1B′亚型pol区基因序列，序列含蛋白酶全长（1～99个密码子）和反转录酶全长（1～560个密码子），长度约1977bp。将354条来自接受抗病毒治疗艾滋病患者的（服药组）序列与97条来自未接受治疗患者的（未服药组）序列，分别与B亚型野生型pol基因共享序列进行逐个密码子比对，筛选在服药组序列中出现的频率显著高于未服药组序列的突变位点，将筛选出来的突变位点在斯坦福大学HIV-1耐药数据库中检索，根据数据库收录的情况及解释，初步分析突变与耐药的关系。结果在服药组序列中反转录酶区有6个位点7个突变的频率显著高于未服药组，分别是D123E、V292I、K366R、T369A、T369V、A371V和1375V，即前2个突变位于反转录酶的聚合酶区、后5个突变位于反转录酶的连接区。检索数据库收录情况，有7个突变均为相应位点的主要变异形式，在服药患者中出现的频率显著高于未服药患者。结论筛选出的HIV-1B′亚型病毒株7个突变可能与耐药有关。
- 李韩平郭伟刘永健鲍作义李林庄道民刘思扬王铮王晓林李敬云
- 关键词：HIV-1
- 表达萤光素酶的HIV药物筛选细胞模型的建立被引量：1
- 2010年
- 目的:构建基于萤光素酶的单次复制人免疫缺陷病毒(HIV)细胞模型,用于抗HIV药物的筛选。方法:构建含萤光素酶报告基因的假型慢病毒质粒,将疱疹性口炎病毒外膜糖蛋白(VSV-G)的表达质粒、HIV-1 Rev蛋白表达质粒、HIV Gag-Pol蛋白表达质粒和含萤光素酶报告基因的重组慢病毒质粒共转染HEK 293FT细胞,制备假型慢病毒;在假型慢病毒生产和再感染新鲜HEK 293FT细胞的过程中加入逆转录酶和蛋白酶抑制剂(如AZT),检测再感染的细胞中萤光素酶的表达水平,从而判断药物对HIV的抑制作用。结果:构建了含萤光素酶报告基因的重组慢病毒质粒pLenti-Luc;利用已知抗HIV药物AZT进行测试,发现HIV药物处理组细胞中萤光素酶活性远低于对照组。结论:建立了基于萤光素酶的HIV药物筛选细胞模型,该系统使用单次复制的报告病毒,具有良好的安全性,而使用萤光素酶基因作为报告基因使该系统具备极高的敏感性,该系统适合于进行高通量药物筛选。
- 张昕安小平陈斌张宝中王盛刘大斌童贻刚
- 关键词：人免疫缺陷病毒药物筛选
- 免疫渗滤法检测血液及尿液HIV抗体的应用评价被引量：1
- 2014年
- 评价免疫渗滤法人类免疫缺陷病毒1+2型抗体诊断试剂盒检测人血浆和尿液样本的临床性能。采用对照试验研究,选取背景清晰的研究对象200例,采集同一研究对象的血浆和尿液样本,应用万泰生物药业公司生产的人类免疫缺陷病毒1+2型抗体诊断试剂盒作为考核试剂,法国生物梅里埃公司生产的人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒(ELISA法)作为参考试剂进行检测,考核试剂检测结果与参考试剂及研究对象背景进行比较分析。考核试剂检测血浆HIV抗体与参考试剂相比较,阳性符合率100.00%,阴性符合率100.00%,总符合率100.00%,Kappa值1.00,一致性强度为最强;考核试剂检测尿液HIV抗体与参考试剂检测结果相比较,阳性符合率68.29%,阴性符合率100.00%,总符合率87.00%,Kappa值0.72,一致性强度为高度。免疫渗滤法人类免疫缺陷病毒1+2型抗体诊断试剂盒对血浆、尿液样本检测性能优越,适合临床快速诊断。
- 王倩杨志东崔晨尚红
- 关键词：人类免疫缺陷病毒抗体
- 人免疫缺陷病毒假病毒药物筛选模型的构建及其应用被引量：1
- 2012年
- 目的:构建人免疫缺陷病毒(HIV)假病毒模型,用多种HIV逆转录酶和蛋白酶抑制剂作用于该模型,以检测其是否能有效用于HIV抑制药物的筛选。方法:通过载体改造获得最终慢病毒载体puc18-NL4-3-LUC-stop,其中含有萤光素酶基因,将该载体与包膜质粒VSV-G共转染293FT细胞,包装产生HIV假病毒,在假病毒包装和病毒感染293FT细胞的过程中加入蛋白酶和逆转录酶抑制剂,通过检测感染细胞中萤光素酶的表达来检测该模型的有效性,并利用此模型检测药物的抗病毒效果。结果:将HIV逆转录酶和蛋白酶抑制剂作用于该假病毒模型时发现萤光素酶的表达得到很大程度的抑制。结论:建立了HIV假病毒药物筛选模型,该模型以萤光素酶基因作为报告基因,快速灵敏,在抗HIV药物筛选中有一定的应用价值。
- 李建彬陈斌米志强安小平李存刘大斌王晓娜范华昊方祥童贻刚
- 关键词：人免疫缺陷病毒慢病毒载体假病毒药物筛选
- 基于Vif-APOBEC3G相互作用的抗HIV-1药物研究
- 2010年
- 载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalyticpolypeptidelike3G,APOBEC3G或A3G)是人体天然抗病毒分子,可以使病毒逆转录形成的cDNA的胞嘧啶(C)脱氨为尿嘧啶(U),产生鸟嘌呤(G)→腺嘌呤(A)超突变,导致病毒转录产物突变,从而达到抑制病毒复制的作用。HIV-1的辅助蛋白Vif,可与APOBEC3G相互作用并导致其被降解,使得这一天然抗病毒机制失效,进而增强了HIV的感染力。Vif与APOBEC3G这种相互作用为抗HIV药物提供了新靶点。针对Vif-APOBEC3G相互作用的抗HIV抑制剂已经成为研究热点。本文综述了Vif和APOBEC3G的结构、二者的相互作用,以及基于这一相互作用的抗HIV-1抑制剂研究进展。
- 张兴杰王睿睿郑永唐
- 关键词：人免疫缺陷病毒I型VIFAPOBEC3G抑制剂
- 四种常用高通量测序拼接软件的应用比较被引量：13
- 2011年
- 新一代测序平台的诞生推动了对全基因组鸟枪法测序数据的拼接算法和软件的研究,自2005年以来多种用于高通量测序的序列拼接软件已经被开发出来,并且在不断地进行改进以提高拼接效果。本文利用目前广泛使用的高通量测序拼接软件Velvet、AbySS、SOAPdenovo和CLC Genomic Workbench分别对本试验室分离的一株噬菌体IME08的高通量测序结果进行拼接,介绍这几种拼接软件的安装使用及参数优化,并对不同软件的拼接结果进行比较,针对不同的拼接软件得到优化的拼接参数,可为其他研究人员使用上述软件提供参考借鉴。
- 朱大强李存陈斌姜焕焕江晓芳安小平米志强陈禹保童贻刚
- 关键词：VELVETABYSSCLCGENOMICWORKBENCH
