新疆生物资源基因工程重点实验室开放基金(XJDX0201-2008-04)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：马纪刘忠渊王芸张富春更多>>
- 相关机构：新疆大学更多>>
- 发文基金：新疆生物资源基因工程重点实验室开放基金科技部基础研究重大项目前期研究专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 洛氏脊漠甲抗冻蛋白基因的克隆、表达和功能检测被引量：2
- 2008年
- 为了研究抗冻蛋白基因是否在新疆荒漠昆虫洛氏脊漠甲Pterocomaloczyi中存在,利用RT-PCR技术克隆获得了洛氏脊漠甲抗冻蛋白的cDNA片段,命名为Plafp743。测序结果表明洛氏脊漠甲Plafp743所编码的蛋白质由94个氨基酸组成,蛋白序列呈现规则结构CTX1X2X3X4CX5X6X7X8X9。利用原核表达载体构建重组质粒pGEX-4T-1-Plafp743,转化Escherichia coliBL21进行融合蛋白表达,SDS-PAGE结果表明抗冻蛋白PLAFP基因以可溶性融合蛋白形式表达,相对分子质量36kD。用Glutathione Sepharose4B亲和柱对表达蛋白进行纯化后,通过赤翅甲Dendroidescanadensis抗冻蛋白的小鼠抗血清进行Western blot分析,结果表明纯化的GST-PLAFP融合蛋白与赤翅甲抗血清能够发生特异性的免疫反应。大肠杆菌的低温抗冻保护实验结果证明,30μg/mL的GST-PLAFP在-6℃对细菌具有显著的保护作用,且随着抗冻蛋白浓度的增加,抗冻保护作用的效果也随之增加。本研究首次报道了从荒漠昆虫洛氏脊漠甲扩增得到抗冻蛋白基因,提示抗冻蛋白可能是荒漠昆虫普遍采取的过冬生存策略,为进一步开发利用昆虫抗冻蛋白奠定了基础。
- 马纪王芸刘忠渊张富春
- 关键词：抗冻蛋白克隆原核表达
