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牛病毒性腹泻病病毒NS3表位串联蛋白表达及抗体间接ELISA方法的建立被引量：11: 2011年; 为建立一种有效的牛病毒性腹泻病病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体检测方法,作者将BVDVNS3蛋白2个抗原表位的编码核酸序列进行串联,构建重组表达载体pET-30a-EXnN,并在原核表达系统中表达了重组蛋白。选取包含12个表位肽的重组蛋白(r-BVDV-EX6N)作为包被抗原建立NS3蛋白抗体间接ELISA方法。该方法的特异性和稳定性良好,与2种商品化试剂盒的符合率分别为96.05%和78.95%。试验结果表明建立的ELISA方法可用于BVDV NS3蛋白抗体的检测。; 贾莹李岩尹鑫温凯刘华张文龙王君伟; 关键词：BVDV NS3蛋白间接ELISA

牛病毒性腹泻病毒VEDEVAC株E2蛋白线性表位区的筛选: 为了筛选牛病毒性腹泻病毒E2 B细胞线性表位区域,本研究分段克隆了BVDVVEDEVAC株E2基因,并利用pET原核表达系统,分段表达目的蛋白,表达的蛋白经过纯化后,利用western blot方法筛选与感染血清反应的片...; 李岩贾莹温凯刘华王君伟; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白抗原性

口蹄疫病毒非结构蛋白3AB单克隆抗体的制备及其对应表位区分析被引量：1: 2011年; 为鉴定口蹄疫病毒(FMDV)的非结构蛋白3AB的抗原表位,本研究以原核表达并纯化的FMDV 3AB重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,获得6株能够稳定分泌抗3AB蛋白特异性单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞。这6株MAbs亚类鉴定均为IgG1型,轻链均为κ链。间接免疫荧光试验结果表明,这6株MAbs均能够识别FMDV 3AB蛋白。采用制备的MAb对分段表达的3AB蛋白进行western blot分析,结合位点分别位于3AB的第aa 55～aa 70、aa 64～aa 79、aa 130～aa 145区段。该结果为进一步探索3AB蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。; 刘丹丹高明春宋军宋鸽曹永生张润祥李爽于力王君伟; 关键词：口蹄疫病毒单克隆抗体

牛口蹄疫病毒VP2结构蛋白抗体间接ELISA方法的建立被引量：5: 2010年; 为建立牛口蹄疫(FMD)抗体的检测方法,本研究将口蹄疫病毒(FMDV)的VP2基因,通过pPROEXTM HTb表达载体在大肠杆菌DH5α中表达,获得大小为35ku的重组VP2蛋白(rVP2),western blot证实rVP2可与FMDV5种血清型的牛阳性血清发生特异性反应。以纯化复性的rVP2为抗原建立了FMDVrVP2间接ELISA方法。重复性试验证实批内、批间变异系数均小于10%。特异性交叉试验表明,该抗原不与常见的其他7种牛病阳性血清发生交叉反应。检测非免疫无口蹄疫国家牛阴性血清的特异性为100%;检测感染血清敏感性为97.3%;检测O-AsiaⅠ的二价苗免疫牛血清,与4种商品化试剂盒比较,其符合率分别为69.0%、95.0%、90.4%和86.8%。实验结果表明建立的ELISA方法可以用于口蹄疫感染和免疫抗体检测。; 张润祥高明春曲哲会李爽曹永生宋军宋鸽刘丹丹王君伟; 关键词：口蹄疫病毒 VP2蛋白间接ELISA

牛源支气管败血波氏杆菌的分离与鉴定被引量：5: 2009年; 从2008年黑龙江省某奶牛场犊牛中暴发的一种以呼吸道病变为主疾病的患病牛中分离出3株细菌,根据其形态特征、培养特性、生化特性等将分离菌鉴定为支气管败血波氏杆菌。对分离菌进行药敏试验、皮肤坏死试验及16 S rRNA基因的克隆和序列分析。结果显示,该菌对氟哌酸、丁胺卡那霉素、庆大霉素、氯霉素敏感,可导致豚鼠皮肤坏死;其16 S rRNA基因序列与GenBank中收录的标准菌株Bb RB50株(BX640449)同源性为100%。证实,引起该病的病原是支气管败血波氏杆菌。; 刘晓民杨华张润祥高明春王君伟; 关键词：犊牛支气管败血波氏杆菌 RRNA基因

牛病毒性腹泻病毒NS3基因的序列分析、表达与抗原性鉴定被引量：8: 2010年; 本研究应用套式RT-PCR方法扩增出牛病毒性腹泻病毒VEDEVAC株编码NS3蛋白的基因,克隆至表达载体pET-30a(+),并进行测序。对瘟病毒属病毒NS3基因进行氨基酸差异性分析,显示平均P-distance为0.07,系统进化树分析表明VEDEVAC株隶属于BVDV1型。将构建成功的重组质粒转化大肠埃希氏菌Rosetta(DE3),在IPTG诱导下表达NS3重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化和尿素梯度透析后进行反应原性鉴定。Western blotting结果显示表达的重组蛋白可以与牛病毒性腹泻病毒阳性血清反应,并与猪瘟阳性血清有交叉反应,ELISA结果显示该重组蛋白具有良好的反应原性。所获得的蛋白为建立针对NS3抗体的ELISA检测方法奠定了基础。; 李岩聂明非魏伟温凯贾莹霍慧王君伟; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 NS3蛋白进化树抗原性

黑龙江省部分奶牛场奶牛布氏杆菌病血清学调查被引量：6: 2010年; 杨华张玉杰刘晓民高明春王君伟; 关键词：牛布氏杆菌病奶牛场血清学调查人畜共患传染病流产

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：3: 2010年; 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的特异性单克隆抗体(MAb),用含有BVDV E2基因的真核表达质粒pcDNA-E2免疫4周龄～6周龄BALB/c鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,以BVDV作为抗原建立间接ELISA筛选及4次连续克隆获得3株能稳定分泌抗E2MAb的杂交瘤细胞系,分别命名为2E2、3D12、4D6。MAb亚类鉴定表明,2E2和4D6为IgM类,3D12为IgG2a亚类,轻链均为κ链。经western blot和间接免疫荧光检测证明3株MAb针对E2的构象表位,并且3D12株MAb能与BVDV及猪瘟病毒(CSFV)结合,2E2和4D6MAb只能与BVDV结合。; 聂明非李岩温凯贾莹王君伟; 关键词：BVDV E2 单克隆抗体 CSFV

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国家现代农业产业技术体系建设项目(NYCYTX-0303)