国家自然科学基金(31101939)
- 作品数：14 被引量：52H指数：3
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- 三角帆蚌KuSPI基因的克隆及表达分析
- 2017年
- Kuntiz型丝氨酸蛋白酶抑制剂(Kuntiz-type serine proteinase inhibitor,KuSPI)又称胰腺胰蛋白酶抑制剂,能够和相应的蛋白酶互作来调控生物体内的级联反应。本研究通过RACE克隆得到三角帆蚌KuSPI cDNA全序列共624 bp,包含38 bp和148 bp的5'和3'端UTR,ORF(open reading frame)438 bp,编码氨基酸145个,分子量为16 397.5 u,KuSPI氨基酸序列的同源性分析后发现其包含1个典型Kuntiz结构域,属于典型的KuSPI基因。qRT-PCR检测表明:KuSPI基因在闭壳肌、外套膜、肠、斧足、肝、血液、鳃、性腺和肾脏中均有表达,在外套膜中最高。利用嗜水气单胞菌进行诱导后发现,KuSPI基因在外套膜中表达量变化最大,呈现明显的先升高再降低趋势。外套膜是三角帆蚌先天免疫的首道防线,我们推测Ku SPI基因在其免疫反应中起到重要作用。
- 王雅昱徐龙威汪桂玲吴丛迪李家乐
- 关键词：三角帆蚌
- 三角帆蚌活化蛋白激酶C受体1基因(HcRACK1)的克隆及表达分析
- 2016年
- 为了探究RACK1基因在三角帆蚌免疫系统中的调控机制,采用RACE技术克隆得到三角帆蚌RACK1基因(命名为HcRACK1)的c DNA全序列,并对该序列进行分析。结果显示,HcRACK1基因全长为1249 bp,其中开放阅读框957 bp,编码318个氨基酸。蛋白质结构域分析显示HcRACK1含有RACK1家族特有的7个WD40结构域。运用荧光定量PCR技术分析HcRACK1在正常组织中及受到嗜水气单胞菌侵染和重金属镉暴露后相关组织表达量的变化。结果显示,HcRACK1在各个组织中均有表达,其中闭壳肌中表达量最高;嗜水气单胞菌侵染后,HcRACK1在血淋巴中的表达量逐渐上升,24 h时达到峰值,随后下降;暴露在100μg/L浓度的重金属镉中,HcRACK1在肝胰腺中的表达量逐渐上升,在第3天达到峰值;血淋巴在第2天达到峰值,随后下降;鳃中HcRACK1的表达量无明显变化。上述结果表明,Hc RACK1与细菌及镉引起的机体的氧化应激反应有关,并能参与到机体的免疫反应中。
- 王俊南汪桂玲白志毅李家乐
- 关键词：三角帆蚌氧化应激嗜水气单胞菌镉暴露
- 背角无齿蚌抗菌肽theromacin基因cDNA全序列克隆及表达分析被引量：3
- 2014年
- 采用RACE方法,克隆了背角无齿蚌抗菌肽theromacin基因的cDNA全序列。结果显示,该cDNA序列全长为870 bp,5'端非翻译区104 bp,3'端非翻译区460 bp,开放阅读框长为306 bp,共编码101个氨基酸,相对分子量为11 166.9 u。同源性分析显示,该基因编码的蛋白与三角帆蚌theromacin基因氨基酸序列的相似度最高,为73%;与贻贝中发现的抗菌肽defensins、mytilins、myticins和mytimycins等4种类型相似度较低,属于Macin家族(登录号:KJ598604)。实时荧光定量PCR分析结果显示,该基因在血液、肝脏、外套膜、鳃、斧足和肠等组织中均有表达,在外套膜中的表达量最高,在其他组织中的表达量较低;经嗜水气单胞菌诱导后,各个组织的表达量出现明显上调的趋势且与对照组显著差异,推测theromacin基因可能在背角无齿蚌的免疫反应中起重要作用。
- 张果苹汪桂玲郭诗照白志毅李家乐
- 关键词：背角无齿蚌分子特征实时荧光定量PCR
- 三角帆蚌BPI/LBP基因cDNA的分子特征及表达分析被引量：1
- 2017年
- 杀菌通透性增加蛋白/脂多糖结合蛋白(bactericidal permeability-increasing protein/LPS-binding protein,BPI/LBP)在生物体的免疫应答过程中发挥着重要作用,但是在三角帆蚌中未见其相关的研究。我们采用RACE法获得三角帆蚌BPI/LBP基因c DNA全长(Gen Bank KX363568),该基因序列全长为1 793 bp,5'非编码区(untranslated region,UTR)和3'UTR分别为65 bp和219 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)1 509 bp,共编码氨基酸502个。氨基酸序列包括BPI1和BPI2两个结构域,同源性分析其与一些已知物种的BPI/LBP基因氨基酸发现各物种间具有相似的结构域,属于典型的BPI/LBP基因。q RT-PCR(Quantitative Real-time PCR)分析结果表明BPI/LBP基因表达于血液、肠、肾脏、外套膜、肝、腮、闭壳肌、性腺和斧足9个正常组织,表达量最高的是血液,最低的是肝脏。利用嗜水气单胞菌诱导后检测发现,血液、外套膜变化趋势最为明显,均呈现出先升高再降低的趋势,在3 h或12 h达到最大值,之后开始逐渐下降并趋于稳定,我们推测BPI/LBP基因在三角帆蚌的免疫反应中发挥着重要的作用。
- 王芹徐龙威汪桂玲徐智诚李家乐
- 关键词：三角帆蚌分子特征
- RNA干扰沉默三角帆蚌HcCA3基因对贝类矿化作用的影响被引量：4
- 2018年
- 为探究三角帆蚌基质蛋白基因HcCA3的功能,本研究根据HcCA3基因的c DNA全长序列,设计并合成特定的干扰链（siRNA）,将干扰链注射到三角帆蚌闭壳肌内,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测HcCA3基因在外套膜不同部位即前端缘膜（amp）、后端缘膜（pmp）和中央膜（mc）的表达变化。在RNA干扰预实验中,筛选了三条目的基因干扰链,其中siRNA-HcCA3-1干扰链干扰效果最好;同时筛选了4条阴性对照链,发现HcCA3基因在注射不同的阴性对照链的各个组织中的表达均呈现不同程度的显著性下降,并没有筛选到合适的阴性对照链。在RNA干扰正式实验中,随着累计注射干扰链si RNA-HcCA3-1,HcCA3基因在前端缘膜和后端缘膜内出现了相似的表达特征,12 d出现了敲降作用（分别为对照组的28%和30%）,HcCA3基因在中央膜中表达从12 d开始显著下降（为对照组的84%）,18 d为对照组的76%。本实验通过累积注射si RNAHcCA3-1,成功的抑制了HcCA3基因在外套膜不同部位的表达,推测该基因参与了贝壳和珍珠的矿化,为进一步研究HcCA3基因的功能提供了基础。
- 王芹汪桂玲陈亚王雅昱徐智诚
- 关键词：三角帆蚌HCRNA干扰荧光定量
- M、F型ATP8基因在雌雄三角帆蚌不同发育时期的表达差异研究被引量：1
- 2018年
- 双壳贝类中有两种线粒体遗传方式,一种通过精子传递线粒体基因组,一种通过卵子传递线粒体基因组。这种现象被称为线粒体基因组的双单亲遗传（doubly uniparental inheritance, DUI）。本实验首先对三角帆蚌（Hyriopsis cumingii） F、M-type ATP8基因进行了克隆,得到了它们的cDNA全序列。F-type ATP8基因全长275 bp,编码49个氨基酸;M-type ATP8基因全长222 bp,编码58个氨基酸。在此基础上研究了三角帆蚌从胚胎时期到三龄成熟时期时F、M-type ATP8基因的表达差异。胚胎期到8月龄的三角帆蚌性腺部位组织团中,M、F-type ATP8基因在各时期均有表达,同时期对比发现,F-type ATP8基因的表达量明显高于M-type ATP8基因。12月龄雌雄三角帆蚌各组织中,F-type ATP8表达量高于M-type ATP8,处于主导地位。24月龄雌雄三角帆蚌各组织中,M、F-type ATP8均能检测到表达,M-type ATP8仅在性腺中高表达。36月龄雌雄三角帆蚌各组织中,F-type ATP8均能检测到,M-type ATP8表达量都非常低;而在雄性中,仅在性腺中高表达。研究表明,随着三角帆蚌的发育,M-type ATP8仅在雄性性腺中存在,在其他组织中选择性降解。
- 吴丛迪陈亚汪桂玲李家乐王雅昱郭鹏飞
- 关键词：三角帆蚌
- 三角帆蚌钙网蛋白基因cDNA的分子特征与表达分析被引量：3
- 2013年
- 为研究淡水珍珠形成相关基因及调控机理,以三角帆蚌为研究对象,借助cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得了三角帆蚌的钙网蛋白基因(calreticulin,HcCRT)cDNA序列,该序列长1 437 bp,包含231 bp的5'非编码区(untranslated region,UTR)和615 bp 3'UTR以及591 bp的开放阅读框(ORF),共编码196个氨基酸残基,包含一段由21个氨基酸组成的信号肽和一段由175个氨基酸的成熟肽,分子量约为22.4 ku,理论等电点5.01。氨基酸序列分析表明,该序列不存在跨膜结构,疏水性分析显示该蛋白整体为亲水性蛋白。氨基酸列比对分析显示,HcCRT具有保守的钙网蛋白家族结构,具有2个保守的钙网蛋白家族标签序列:KHEQNIDCGGGYLKVF和IMFGPDICG,与其他已知物种的CRT具有较高保守性,其中与斑马鱼的相似度为77%,与长牡蛎和马氏珠母贝的相似度为70%。对三角帆蚌HcCRT蛋白序列的二级结构和三级结构进行预测分析,显示该蛋白同时含螺旋和折叠。实时荧光定量PCR分析结果显示,HcCRT在外套膜、血液、鳃、斧足、肝脏、肾脏、肠和闭壳肌等8个组织中均有表达,其中在外套膜中表达量最高,血液次之,在其他组织的表达量极少。初步推测HcCRT参与了三角帆蚌珍珠形成的生物矿化过程。
- 夏秀琳汪桂玲白志毅李家乐
- 关键词：三角帆蚌钙网蛋白分子特征实时荧光定量PCR
- 三角帆蚌KSPI cDNA的分子特征及表达分析
- 2016年
- Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子(KSPI)在生物体的免疫应答过程中发挥着重要作用,但在三角帆蚌中尚未进行其相关研究与报道,为研究KSPI对三角帆蚌免疫过程的影响,采用RACE法克隆了三角帆蚌KSPI c DNA全序列(登录号:KT901291),获得了1029 bp的全长,其中包含5'、3'端非翻译区分别为61 bp、206 bp,开放阅读框762bp,共编码氨基酸253个,分子质量为27 397.5 u,氨基酸序列包含5个Kazal结构域,与一些已知物种的KSPI编码的氨基酸序列进行同源性分析后发现,与各种物种间具有相似的结构域,属于典型的KSPI。实时荧光定量PCR分析结果表明KSPI在外套膜、血液、肝、腮、闭壳肌、性腺、斧足7个组织中均存在一定的表达量,表达量最高的是外套膜,表达量最低的是肝脏。利用嗜水气单胞菌诱导后检测发现,各个组织呈现出先升高再降低的趋势,在12或24 h达到最大值,之后开始逐渐下降并趋于稳定,推测出KSPI对三角帆蚌的免疫反应发挥重要作用。
- 徐龙威王芹汪桂玲李家乐
- 关键词：三角帆蚌荧光定量
- 三角帆蚌GPX基因结构特征及抗性相关SNP的筛选被引量：3
- 2012年
- 根据三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GPX)基因cDNA序列,通过PCR和基因组步移法,从三角帆蚌基因组DNA中扩增出GPX基因全长及其5′调控区。序列分析表明,该基因序列全长6 708 bp,含有2个外显子,1个内含子。5′调控区为992 bp,含有启动子的核心序列TATA盒以及其他一些转录调控元件,如AP1、C/EBP、CdxA。2个外显子长度分别为273 bp和991 bp,内含子长度为4 491 bp。通过直接测序法在三角帆蚌抗性群体和易感群体中筛选GPX基因的SNPs,并研究这些多态性位点与抗逆性状的相关性。共获得了16个SNP位点,其中启动子区的A-99G位点、A-86C位点、A-49C位点,内含子区的A2841T位点、C2847T位点、G3146C位点、A3150G位点以及G4645T位点共8个SNP位点的基因型频率和等位基因频率在抗性和易感群体中均存在显著性差异(P<0.05)。连锁不平衡分析结果显示GPX基因A-86C位点、A-49C位点、C2847T位点、A3150G位点与G4645T位点之间,以及A2841T位点与G3146C位点之间均存在强连锁不平衡。同时单倍型分析发现,在抗性群体中单倍型分别为ACTGT和TG的个体出现的频率显著高于易感群体中出现的频率。这些结果表明,GPX基因的部分SNPs可作为三角帆蚌抗病辅助育种的候选分子标记。
- 李西雷汪桂玲李家乐
- 关键词：三角帆蚌SNP抗性性状
- 赣江水系日本沼虾18个群体遗传多样性的微卫星分析
- 日本沼虾是我国重要的经济淡水虾类。随着该物种养殖产业不断扩大,种质衰退已严重影响其养殖业的发展。为客观评估我国日本沼虾野生群体种质资源情况,该研究利用微卫星分子标记对赣江水系18个日本沼虾野生群体的遗传多样性进行分析。结...
- 汪桂玲苏翔朱琴冯建彬李家乐
