山西省自然科学基金(2012011046-6)
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 相关作者：耿建军董常生庞亚妙白俊明范瑞文更多>>
- 相关机构：山西农业大学河南科技大学中国农业大学更多>>
- 发文基金：山西省自然科学基金公益性行业(农业)科研专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 人KRT2促进体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞的黑色素生成被引量：2
- 2017年
- 基因表达谱显示,绵羊角蛋白2(keratin2,Krt2)的mRNA在不同毛色皮肤的表达不同,暗示Krt2基因可能对皮肤黑色素生成有一定的影响。为探索角蛋白2对体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞黑色素生成的影响,首先采用PCR扩增产物测序,结合DNAMAN软件比对分析发现,羊驼Krt2编码序列(c DNA)与NCBI公布的人KRT2高度同源(91%);将人KRT2添加于培养的羊驼皮肤黑色素细胞,观察人KRT2对羊驼皮肤黑色素细胞黑色素的生成作用。免疫组织化学显示,外源性的人KRT2处理羊驼皮肤黑色素细胞72 h后,黑色素细胞的细胞质中Krt2表达增强。实时定量PCR及Western印迹实验揭示,与胎牛血清清蛋白处理的羊驼皮肤黑色素细胞比较,1 ng/m L、10 ng/m L和100 ng/m L人KTR2处理的羊驼皮肤黑色素细胞酪氨酸酶(Tyr)、酪氨酸相关蛋白-1(Tyrp1)、小眼畸形相关转录因子(Mitf)基因表达明显上调(P<0.05);尤其在添加10 ng/m L KTR2的细胞中,3个基因的mRNA相对表达水平升高尤其显著,分别是对照细胞的4倍、10倍和12.9倍(P<0.01),蛋白质相对表达水平分别是对照细胞的2倍、2.1倍和1.7倍(P<0.01)。分光光度法测量A490结果证明,1 ng/m L、10 ng/m L和100 ng/m L人KTR2处理的羊驼皮肤黑色素细胞产生的黑色素含量分别是对照细胞的1.3倍(P<0.05)、1.8倍(P<0.01)和1.5倍(P<0.05)。上述结果说明,人KTR2处理可通过刺激羊驼皮肤黑色素细胞黑色素合成相关信号通路,促进黑色素的合成。
- 崔玉琮耿建军耿庆玲丁增峰董常生
- 关键词：黑色素细胞羊驼
- 内皮素3在不同毛色绵羊皮肤的表达与定位被引量：1
- 2015年
- 旨在探索内皮素3(Endothelin 3,EDN3)在不同毛色绵羊皮肤的表达差异以及对毛色的影响。以不同毛色绵羊为研究对象,通过荧光定量PCR技术分析EDN3基因在不同毛色绵羊皮肤的表达量,通过免疫组织化学和ELISA方法对EDN3蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的定位和表达进行研究。1)qRT-PCR结果显示,EDN3在白色绵羊皮肤的相对表达量为5.540 6±0.030 7,在黑色绵羊皮肤的相对表达量为1.005 8±0.062 0。黑白花色绵羊的白色区和黑色区的相对表达量分别为4.341 9±0.087 7和1.150 1±0.005 3。2)ELISA结果显示,EDN3在白色绵羊皮肤中的表达量为128.424 7±2.223 4,在黑色绵羊皮肤的相对表达量为25.114 4±3.248 3。在黑白花色绵羊白色皮肤中的表达量为93.945 3±7.562 2,黑色皮肤的表达量为28.606 0±9.295 9。3)免疫组织化学显示,EDN3在绵羊皮肤毛囊的毛基质、内外毛根鞘、毛乳头等区域均有表达。综上表明,EDN3在不同毛色绵羊皮肤中均可正常表达,且表达量存在显著差异。EDN3是维持黑色素细胞存在不可缺少的基因,但不影响绵羊黑白花的形成。
- 李亚楠赵兵令马淑慧赫晓燕范瑞文王海东耿建军董常生
- 关键词：绵羊免疫组织化学
- 内皮素-3对羊驼黑色素细胞特征及细胞内毛色基因表达的影响被引量：8
- 2013年
- 为了研究内皮素-3(Endothelin-3,EDN3)对羊驼皮肤黑色素细胞内毛色形成相关基因的影响。本研究在体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞中添加不同浓度(0、10-9、10-8、10-7 mol·L-1)的EDN3,通过MTT法、紫外分光光度法、qRT-PCR和Western blotting技术分别检测黑色素细胞活力、黑色素产量、相关基因和蛋白(包括内皮素受体B(Endothelin receptor B,EDNRB)、KIT、小眼畸形相关转录因子(Microphthalmia-associtated transcriptionfactor,MITF)和酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR))的表达情况。结果表明,在羊驼皮肤黑色素细胞添加EDN3 72h后,黑色素细胞呈双树突或三树突状,且细胞数量明显增加;在添加适当浓度10-8 mol·L-1时,细胞具有明显的增殖,细胞内EDNRB、KIT、MITF和TRY在转录水平和蛋白水平的表达量被上调,黑色素细胞产生黑色素的量也被上调,且与对照组相比,差异显著(P<0.05)。EDN3对羊驼黑色素细胞内黑色素的产生具有重要的调节作用。
- 耿建军白俊明范瑞文杨姗姗庞亚妙董常生
- 关键词：羊驼黑色素细胞
- Claudin-11在成年羊驼卵巢中的表达与定位被引量：1
- 2013年
- 【目的】研究生长分化因子9(growth differentiation facter9,GDF9)的潜在靶蛋白Claudin-11在成年羊驼卵巢中的表达与定位,探索Claudin-11对促进卵泡发育、调节排卵的作用机理。【方法】以成年雌性羊驼为研究对象,用RT-PCR技术分析潜在靶蛋白Claudin-11在成年羊驼卵巢中的表达,并使用实时荧光定量PCR技术分析其相对表达量,采用免疫组织化学法和western blotting法对Claudin-11在成年羊驼卵巢中的表达进行定位分析。【结果】荧光定量PCR结果显示,Claudin-11在羊驼卵巢的初级卵泡中弱表达于次级卵泡;westernblotting结果显示,多克隆兔抗Claudin-11抗体与成年羊驼卵巢组织粗提取物可以发生特异性的免疫反应;免疫组织化学试验结果显示,Claudin-11在羊驼卵巢的原始卵泡和次级卵泡中弱表达于卵泡细胞周围的扁平或立方形卵泡细胞的胞质,而在次级卵泡中Claudin-11在最内层颗粒细胞的胞质中进行表达。【结论】Claudin-11在成年羊驼卵巢组织中表达且存在特异性的细胞定位。
- 耿建军郭青云庞亚妙白俊明贺俊平
- 关键词：卵巢卵泡发育
- 内皮素-2促进体外培养的绵羊皮肤黑色素细胞增殖及黑色素生成被引量：4
- 2015年
- 内皮素(endothelin,ET)及其受体在黑色素细胞成熟分化时起着有效的促进作用.然而,内皮素-2(ET-2)在黑色素生成的作用方面,还处于争论中或报道不一致.在此,我们研究ET-2对体外培养的绵羊皮肤黑色素细胞增殖和黑色素生成的影响.比较实验组ET-2(1,10,100 nmol/L)与空白对照组,通过MTT法和Ando等的方法检测出黑色素细胞的增殖率和黑色素含量显著增加.荧光定量PCR和Western印迹分别检测出内皮素受体B(Bdnrb);酪氨酸激酶受体(Kit);酪氨酸酶(Tyr);酪氨酸相关蛋白-1(Tyrp-1)基因的mRNA水平及蛋白水平的相对表达量显著增加.这些数据表明,ET-2可能促进绵羊的皮肤黑色素细胞增殖和黑色素生成.
- 秦以龙董常生庞亚妙崔玉琮赵园园耿建军
- 关键词：黑色素细胞内皮素受体B酪氨酸激酶受体黑色素
