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湖北钉螺凝集素分离纯化及相对分子质量的测定: 2011年; 目的分离、纯化湖北钉螺(Oncomelania hupensis)体内凝集素,测定其相对分子质量。方法用饱和度为0～40%的硫酸铵对钉螺腹足部软体组织匀浆液进行分离,对其沉淀物先后采用Sephadex G-75凝胶过滤层析和Sepharose 4B亲和层析进行纯化。采用Brandford法测定纯化后凝集素的蛋白质含量,红细胞凝集试验测定其凝集活性,并计算比活力。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测凝集素的纯化效果,并测定其亚基相对分子质量。利用Sephadex G-75凝胶层析测定钉螺凝集素的相对分子质量。结果饱和度为0～40%硫酸铵对钉螺凝集素组织匀浆液进行分离,比活力从组织匀浆液的21.74 titer/mg提高到了61.93 titer/mg。经Sephadex G-75凝胶层析和Sepharose 4B亲和层析,钉螺凝集素的比活力分别提高到75.89 titer/mg和963.86 titer/mg。对凝胶过滤层析和亲和层析纯化后的凝集素进行SDS-PAGE分析,可见单一清晰条带,凝集素亚基的相对分子质量约为Mr 53 000。凝胶层析测定钉螺凝集素的相对分子质量约为Mr 78 000。结论盐析法、凝胶层析和亲和层析联合应用可对湖北钉螺凝集素进行有效的分离纯化。湖北钉螺凝集素为单亚基蛋白。; 周书林彭怀明李朝品刘辉赵劲松操治国; 关键词：湖北钉螺凝集素纯化相对分子质量

湖北钉螺凝集素的提取及其活性研究被引量：6: 2011年; 目的探讨湖北钉螺(Oncomelania hupensis)体内凝集素的提取方法及其凝集活性。方法用20%～100%硫酸铵对钉螺蛋白进行梯度分级沉淀,检测不同沉淀对兔红细胞的凝集活性。分别用2.5 mg/ml D-半乳糖、D-果糖、D-葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖等6种糖溶液对有凝集活性的沉淀进行倍比稀释,测定其红细胞凝集活性的变化。并测定不同温度(25～90℃)和pH值(3.0～10.0)对钉螺凝集素凝集活性的影响。结果硫酸铵分级沉淀法提取钉螺凝集素时,20%～40%饱和梯度所得的沉淀具有较高的凝集活性。其凝集活性能被半乳糖和乳糖抑制。当pH值为7.0时钉螺凝集素活性最高。30～70℃水浴时,随温度的增加其凝集活性降低,高于80℃时无凝集活性。结论钉螺体内存在半乳糖和乳糖凝集素,其凝集活性受温度和酸碱度的影响。; 彭怀明李朝品刘辉赵劲松周书林; 关键词：湖北钉螺凝集素凝集活性

钉螺不同季节及不同螺龄酚氧化酶活力研究被引量：4: 2010年; 目的对钉螺不同季节及不同螺龄酚氧化酶活力进行研究。方法将钉螺分为不同季节组及成、幼螺组。钉螺去壳,取软体组织通过匀浆、离心分别获取粗制酶液,以邻苯二酚为底物用比色法测定各组酶活力,结果进行方差分析。结果不同季节组(春季、夏季、秋季、冬季)钉螺体内酚氧化酶活力差异明显(P<0.01),分别为383.32±3.09、271.43±4.16、351.34±2.89、237.37±5.05(U/g)。成、幼螺体内酚氧化酶活力差异明显(P<0.01),分别为271.43±4.16、473.31±6.13(U/g)。结论钉螺酚氧化酶活力在不同季节及不同螺龄均有差异。; 周书林赵磊赵涛; 关键词：钉螺酚氧化酶酶活力

一种压碎钉螺螺壳的新方法被引量：14: 2010年; 对传统的压碎钉螺螺壳方法进行了改进,建立了一种新的压碎螺壳方法。新方法能在保证钉螺软体完整的前提下,提高了压碎钉螺螺壳的速度,在钉螺的解剖操作中具有较大的实用性。; 彭怀明周书林; 关键词：钉螺

重组粉尘螨Ⅱ类变应原致敏小鼠肺部变应性炎症模型的建立: 2012年; 目的探讨以重组粉尘螨Ⅱ类变应原(rDerf2)建立小鼠肺部变应性炎症模型的方法。方法将30只6～8周龄雌性SPF级BALB/c小鼠,随机分为PBS组(阴性对照组)、卵清蛋白(OVA)组(阳性对照组)和rDerf2组(实验组)。实验组分别于第0、7、14天用rDerf2对小鼠腹腔进行注射致敏;再于第21天开始,连续7d进行雾化激发;对照组分别用PBS和OVA代替。最后一次雾化激发后24h内处死动物,观察肺组织病理变化、支气管肺泡灌洗液(BLAF)中的白细胞计数及分类,用ELISA测定BLAF和脾细胞培养上清中白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-17和IFN-γ的含量及血清中IgG1、IgE抗体水平变化。结果实验组和阳性对照组BALB/c小鼠肺组织呈现明显的炎症性病理改变;rDerf2组的BALF中白细胞总数〔(17.39±1.03)×106/L〕及嗜酸性粒细胞(EOS)〔(1.61±0.03)×106/L〕计数,均明显高于PBS组(P<0.01);BALF中IL-4〔(78.92±9.06)pg/ml〕、IL-17〔(201.63±31.26)pg/ml〕与PBS组比较呈明显的高水平表达(P<0.01);而IL-2〔(8.29±1.27)pg/ml〕和IFN-γ〔(51.04±15.85)pg/ml〕的含量则显著下降(P<0.01);上述指标在脾细胞培养上清中出现类似的变化。rDerf2组血清中IgE〔(37.63±6.57)IU/ml〕、IgG1〔(16.68±2.90)μg/ml〕的含量表现为Th2型反应增强趋势;但OVA组和rDerf2组间所有指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论用rDerf2腹腔注射致敏后再雾化激发的方式能够成功构建小鼠肺部变应性炎症模型。; 周书林常维佳姜玉新陈文魁; 关键词：粉尘螨哮喘模型

重组粉尘螨Ⅱ类变应原的原核表达及纯化被引量：2: 2012年; 目的表达并纯化粉尘螨2类变应原Der f 2蛋白,检测其变应原性。方法用1mmol/L的IPTG诱导含重组质粒pET30a-Der f2的大肠埃希菌BL21(DE3),SDS-PAGE电泳检测并纯化目的蛋白,ELISA检测其与尘螨哮喘患者血清IgE的结合活性。结果 SDS-PAGE电泳检测重组质粒pET30a-Der f 2表达产物,其分子质量单位为15ku,与预期大小相符。ELISA检测纯化的Der f 2蛋白可与尘螨哮喘患者血清IgE反应。结论成功获得并纯化了Der f2重组蛋白,该蛋白具有变应原性,为进行尘螨过敏性疾病的变应原特异性免疫治疗的动物实验奠定了物质基础。; 常维佳姜玉新陈文魁周书林; 关键词：粉尘螨原核表达蛋白纯化

软体动物免疫功能研究进展被引量：8: 2010年; 软体动物的免疫主要由细胞免疫和体液免疫组成。细胞免疫功能的完成主要依靠吞噬作用,体液免疫则主要以凝集素、抗菌肽、溶菌酶、酚氧化酶等诸多非特异性免疫因子的综合作用而完成。近年来,国内外对软体动物的免疫功能作了大量的研究,特别是在上述诸多非特异性免疫因子在软体动物体内的定位、分类、免疫功能及其机制的研究有了较大的进展。论文就现有的研究结果对软体动的免疫功能做一概述。; 彭怀明周书林; 关键词：软体动物细胞免疫体液免疫

重组粉尘螨变应原第2组分的研究概况被引量：2: 2012年; 尘螨是最常见的室内变应原来源之一，约80％以上尘螨过敏性疾病患者血清螨特异性IgE可与尘螨变应原第2组分结合。粉尘螨变应原第2组分Derf2为螨体的组织成分，被认为是诱导哮喘与变态反应性疾病的最重要变应原之一。近年来，变态反应性疾病的发病率呈现逐年增高的趋势，而重组变应原在过敏性疾病诊断和治疗中具有独特的优势和前景，故正日益成为此领域中研究的热点之一。该文就Derf2的生物学特征、重组变应原的制备、免疫学效果及其在特异性免疫诊治中的应用前景予以综述。; 常维佳姜玉新陈文魁周书林; 关键词：粉尘螨基因重组特异性免疫治疗

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安徽省高校省级自然科学研究项目(kj2009B152)

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