山东省自然科学基金(Y2007D31)
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
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- 相关机构：青岛农业大学中国海洋大学更多>>
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- 牙鲆淋巴囊肿病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立被引量：6
- 2009年
- 以牙鲆淋巴囊肿病毒(Lymphocystis disease virus,LCDV)特异性单克隆抗体为捕获抗体,纯化的兔抗LCDV血清为检测抗体,建立了LCDV病毒双抗夹心间接ELISA检测方法。该方法最佳反应条件为:单克隆抗体包被质量浓度为2μg/ml,兔抗血清工作浓度为1∶1200稀释,以3%牛血清白蛋白作为封闭液。应用本方法对体表具有明显发病症状的牙鲆、与发病鱼同池但体表无症状的牙鲆及健康牙鲆的肝、脾、肾、胃、肠、心脏、鳃等7种组织进行检测,在前两种鱼的胃、肠、鳃等组织检测到病毒,而健康牙鲆各组织器官反应结果均为阴性,试验结果表明,所建立的ELISA检测方法具有特异性强、可靠性高的特点,可用于养殖牙鲆LCDV的检测。
- 程顺峰
- 关键词：淋巴囊肿病毒ELISA双抗体夹心
- 牙鲆淋巴囊肿病毒纯化及不同来源病毒免疫特性比较
- 2009年
- 比较了3种不同的牙鲆淋巴囊肿病毒纯化方法,优化后的方法如下:剥离囊肿表面薄膜,收集内容物,匀浆后再用超声波细胞破碎仪破碎,反复冻融,650×g、1800×g差速离心,30%(W/W)蔗糖垫底超速离心(78500×g)浓缩病毒,最后蔗糖密度梯度超速离心(78500×g)纯化病毒。电镜观察发现,出现在47%～52%蔗糖密度区域的病毒带含有多量、纯净和结构一致的病毒粒子。此外,利用制备的兔抗血清对不同地区的病毒进行了免疫特性分析,Westernblotting检测显示来自威海、青岛及秦皇岛3个地区的淋巴囊肿病毒反应结果是一致的,均有3条蛋白带发生反应,其分子量分别为125、66和55kDa。
- 程顺峰绳秀珍战文斌
- 关键词：淋巴囊肿病毒超速离心分离纯化
- 溶藻弧菌疫苗对牙鲆免疫效果的研究被引量：5
- 2009年
- 利用福尔马林灭活法制备了溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）疫苗，腹腔注射接种牙鲆（Paralichthys olivaceus），在以牙鲆血清为抗原制备兔抗鱼血清多克隆抗体的基础上，采用ELISA方法检测了接种疫苗后鱼血清中特异性抗体的变化；此外通过攻毒实验测定了疫苗对牙鲆的保护率。ELISA检测结果表明在接种疫苗后第7d抗体效价为1：64，在免疫后第7～8周达到最高抗体效价1：2048；攻毒实验结果显示受免鱼对溶藻弧菌的免疫保护率为73．3％，且溶藻弧菌疫苗对鳗弧菌（Vibrio anguillarium）、副溶血弧菌（Vibrio prarhaemolyticus）也具有一定的免疫保护性，其免疫保护率分别为56．25％、64．71％。
- 程顺峰
- 关键词：牙鲆免疫保护率
- 鱼类淋巴囊肿病毒免疫诊断技术的研究被引量：2
- 2009年
- 在获得鱼类淋巴囊肿病毒(lymphocystis disease virus,LCDV)单克隆抗体的基础上,建立了淋巴囊肿病毒的免疫电镜(IEM)和斑点免疫印迹(Dot-blot)诊断方法。应用免疫电镜方法检测样品,观察结果显示:胶体金颗粒集中结合在淋巴囊肿病毒粒子囊膜周围,在病毒外区域没有胶体金颗粒散布,整个视野背景清洁,无散在的金颗粒和其他污染物;斑点免疫印迹诊断结果显示:在使用EDTA抑制内源酶后,所检测样品发色后呈明显褐色,呈现明显的LCDV阳性反应,而设立的两组阴性对照结果均不发色;诊断结果说明所建立的淋巴囊肿病毒单克隆抗体诊断技术灵敏、稳定、特异、可靠。
- 程顺峰
- 关键词：单克隆抗体淋巴囊肿病毒
