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脂联素对人胃癌细胞HGC27生长和迁移能力的影响: 2013年; 目的探讨脂联素对胃癌细胞HGC27的生长和迁移能力的影响。方法应用Western blot方法检测脂联素受体adipoR1和adipoR2在HGC27细胞中的表达。以不同浓度脂联素干预细胞,MTT法检测细胞生长情况,应用细胞划痕试验检测脂联素干预对细胞迁移能力的影响。结果两种脂联素受体在HGC27细胞中均有表达,随着脂联素浓度的升高和培养时间的延长HGC27细胞的生长受到抑制,脂联素可以抑制细胞的迁移能力。结论脂联素可抑制HGC27细胞生长和迁移能力,其机制可能是通过与受体结合完成的。; 耿东华王冬冬杨志亮王晓黎; 关键词：脂联素胃癌细胞生长

NK4基因转染对人宫颈癌细胞CaSki生物学特性的影响: 2012年; 目的通过在人宫颈癌细胞CaSki中转染NK4 cDNA片段,研究NK4对人宫颈癌的潜在治疗作用。方法将NK4和荧光霉素表达质粒分别稳定转染人宫颈癌细胞CaSki。采用Western blot检测细胞培养基中NK4蛋白以及经不同培养基(CaSki,CaSki/LUC及CaSki/NK4培养上清)培养后CaSki细胞中c-Met和磷酸化c-Met的表达。采用MTT法绘制细胞生长曲线。采用细胞划痕实验检测NK4对细胞转移的作用。结果在CaSki/NK4培养基中有NK4蛋白表达,对照细胞(CaSki,CaSki/LUC)中无表达。磷酸化c-Met的表达在CaSki/NK4培养基培养的CaSki细胞中被抑制,而在对照细胞(CaSki,CaSki/LUC)培养基培养的CaSki细胞中正常表达。各组c-Met表达无差异。3种细胞体外生长曲线差异无统计学意义(P>0.05)。细胞划痕实验结果表明,CaSki/NK4划痕区域的细胞个数明显少于CaSki和CaSki/LUC。结论 NK4能抑制人宫颈癌细胞c-Met受体磷酸化,并能抑制宫颈癌细胞体外活动能力。; 王晓黎王冬冬赖亚新林蓓; 关键词：NK4 宫颈癌基因治疗

NK4基因转染对人卵巢癌细胞SKOV-3生物学特性的影响: 2013年; 目的通过在人卵巢癌细胞SKOV-3中转染NK4基因表达片段,研究NK4对人卵巢癌的治疗作用,从而验证NK4可作为卵巢癌潜在的基因治疗新策略。方法用NK4和荧光霉素表达质粒分别稳定转染人卵巢癌细胞SKOV-3。用West-ern blot检测细胞培养基中NK4蛋白表达,以及经不同培养基(SKOV-3、SKOV-3/LUC和SKOV-3/NK4培养上清)培养后SKOV-3细胞中c-Met和磷酸化-c-Met的表达。用MTT试剂盒绘制细胞生长曲线。用细胞划痕试验检测NK4对细胞转移的作用。结果在SKOV-3/NK4培养基中有NK4蛋白表达,对照(SKOV-3,SKOV-3/LUC)细胞中无表达。磷酸化-c-Met在SKOV-3/NK4培养基培养的SKOV-3细胞中被抑制,而在对照(SKOV-3,SKOV-3/LUC)细胞培养基培养的SKOV-3细胞中正常表达。c-Met表达在各组差异无统计学意义。三种细胞体外生长曲线差异无统计学意义(P>0.05)。细胞划痕试验表明SKOV-3/NK4划痕区域的细胞个数明显少于SKOV-3和SKOV-3/LUC细胞。结论 NK4蛋白在SKOV-3/NK4细胞培养基中大量分泌,NK4能抑制人卵巢癌细胞c-Met受体磷酸化,并能抑制卵巢癌细胞体外活动能力,为应用NK4作为卵巢癌基因治疗方法提供了研究基础。; 王冬冬霍乃晨耿东华杨志亮蔡峰尹少尉张淑兰; 关键词：NK4 卵巢癌基因治疗

NK4基因转染对裸鼠人卵巢癌种植瘤生长的影响: 2012年; 目的 NK4不仅具有肝细胞生长因子(HGF)拮抗剂的作用,而且具有抗血管生成作用。该实验通过在人卵巢癌细胞SKOV-3中转染NK4cDNA片段,研究NK4在裸鼠体内对人卵巢癌的治疗作用。方法 NK4和荧光霉素(luciferase)表达质粒分别转染人卵巢癌细胞SKOV-3,稳定转染后,得到SKOV-3/NK4细胞和对照(SKOV-3/LUC)细胞。检测NK4在细胞培养基中的表达情况以及经不同培养基(SKOV-3、SKOV-3/LUC和SKOV-3/NK4培养基上清)培养后SKOV-3细胞中c-Met和磷酸化-c-Met的表达,检测三组肿瘤细胞(SKOV-3、SKOV-3/LUC和SKOV-3/NK4)体外生长速度,建立裸鼠皮下肿瘤生长模型,比较三组肿瘤细胞在裸鼠体内的生长速度。结果在SKOV-3/NK4培养基中有NK4蛋白表达,对照(SKOV-3和SKOV-3/LUC)细胞中无表达。磷酸化-c-Met在SKOV-3/NK4培养基培养的SKOV-3细胞中被抑制,而在对照(SKOV-3和SKOV-3/LUC)细胞培养基培养的SKOV-3细胞中正常表达。c-Met表达在各组无差别。三种细胞体外生长曲线差异无显著性(P>0.05)。一周后SKOV-3/NK4细胞接种的肿瘤生长缓慢,SKOV-3和SKOV-3/LUC细胞接种的肿瘤生长迅速,与SKOV-3/NK4组相比有统计学意义(P<0.05)。结论 NK4蛋白在SKOV-3/NK4细胞培养基中大量分泌,NK4能抑制人卵巢癌细胞c-Met受体磷酸化。在裸鼠体内NK4能抑制卵巢癌细胞生长,NK4可作为卵巢癌基因治疗的新方法。; 王冬冬王晓黎耿东华杨志亮霍乃晨张淑兰; 关键词：卵巢癌 NK4 基因治疗

shRNA沉默卵巢癌细胞SKOV-3的IDO基因表达在体外对NK细胞杀伤作用敏感性的影响: 2012年; 目的通过shRNA沉默吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)基因表达,研究IDO表达在体外对NK细胞杀伤能力的作用。方法 shRNA沉默IDO基因表达质粒和空白质粒分别稳定转染至人卵巢癌细胞SKOV-3,应用Western blot检测IDO在SKOV-3、SKOV-3/Mock和SKOV-3/shIDO细胞中的表达情况,用MTT试剂盒检测3组肿瘤细胞体外生长速度和对NK细胞杀伤作用的敏感性。结果 IDO蛋白在SKOV-3/shIDO细胞中表达被抑制,在SKOV-3和SKOV-3/Mock细胞中有表达。3组肿瘤细胞体外生长曲线比较差异无统计学意义(P>0.05)。SKOV-3/shIDO细胞存活的百分比明显低于其他2组对照(SKOV-3和SKOV-3/Mock)细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究应用shRNA沉默IDO基因表达质粒稳定转染卵巢癌细胞SKOV-3,获得IDO无表达卵巢癌细胞SKOV-3/shIDO,结果显示抑制IDO表达对卵巢癌细胞体外生长速度无影响,但可增强卵巢癌细胞SKOV-3对NK细胞杀伤作用的敏感性。因此,IDO可以作为卵巢癌基因治疗的潜在新靶点,shRNA沉默IDO基因表达可以作为卵巢癌治疗的新方法。; 王冬冬王晓黎张淑兰; 关键词：吲哚胺2,3-双加氧酶卵巢癌 NK细胞

shRNA沉默IDO基因的表达对裸鼠卵巢癌腹水瘤生长的影响: 2013年; 目的:IDO(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)是色氨酸代谢途径中的催化酶,其与肿瘤免疫抑制关系密切。本研究通过shRNA沉默IDO基因表达,研究抑制IDO表达在裸鼠体内对人卵巢癌移植瘤的治疗作用。方法:shRNA沉默IDO基因表达质粒和空白质粒分别稳定转染至人卵巢癌细胞SKOV-3,应用Westernblot检测IDO在SKOV-3,SKOV-3/Mock和SKOV-3/shIDO细胞中的表达情况,用MTT试剂盒检测3组肿瘤细胞体外生长速度。种植3组肿瘤细胞于裸鼠腹腔内,建立裸鼠卵巢癌腹水瘤模型,用Kaplan-Meier方法比较SKOV-3/Mock和SKOV-3/shIDO细胞接种所形成的腹水瘤裸鼠的累积生存率的差异。结果:IDO蛋白在SKOV-3/shIDO细胞中表达被抑制,在SKOV-3和SKOV-3/Mock细胞中有表达。3组肿瘤细胞体外生长曲线无统计学差异(P>0.05)。腹腔内接种SKOV-3/Mock细胞的裸鼠,均产生腹腔内转移伴腹水形成,于50天内相继死亡,而接种SKOV-3/shIDO细胞的裸鼠生存期均大于77天,此差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论:本研究应用shRNA沉默IDO基因表达质粒稳定转染卵巢癌细胞SKOV-3,获得IDO无表达卵巢癌细胞SKOV-3/shIDO,抑制IDO表达对卵巢癌细胞体外生长速度无影响,但能抑制卵巢癌细胞腹腔内转移和腹水形成,提高累积生存率,改善预后。因此,IDO可以作为卵巢癌基因治疗的新靶点,shRNA沉默IDO基因表达可以作为卵巢癌治疗的新方法。; 王冬冬王晓黎霍乃晨陈英汉张淑兰; 关键词：IDO 卵巢癌基因治疗

卵磷脂胆固醇酰基转移酶缺陷症LCAT^(G179R)突变的初步研究被引量：1: 2012年; 目的研究1个新近发现的卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)突变型LCATG179R对其编码蛋白正常功能的影响。方法构建LCAT cDNA野生型和突变型表达载体,通过在HEK293细胞中瞬时表达,测定细胞合成的LCAT的活性,并通过实时定量PCR测定内质网应激相关基因的表达情况。结果成功构建载体,野生型LCAT酶活力明显高于突变型LCATG179R,且表达突变型LCATG179R的细胞中内质网应激相关基因表达量明显升高。结论 LCAT突变型G179R会导致该酶的活力降低,可能与该突变型蛋白的异常结构有关。携带此种基因突变的患者有患LCAT缺陷症的可能。; 王晓黎王冬冬张锦; 关键词：卵磷脂胆固醇酰基转移酶基因突变高密度脂蛋白胆固醇内质网应激

IDO基因转染宫颈癌细胞SiHa在体外抑制NK细胞杀伤作用的研究: 2012年; 目的通过IDO基因转染,研究IDO在体外对NK细胞杀伤能力的抑制作用。方法 IDO蛋白表达和空白质粒分别稳定转染至人宫颈癌细胞SiHa,应用Western blot检测IDO在SiHa、SiHa/Mock和SiHa/IDO细胞中的表达情况,用MTT试剂盒检测3组肿瘤细胞体外生长速度和对NK细胞杀伤作用的敏感性。结果 IDO蛋白在Si-Ha/IDO细胞中表达阳性,在SiHa和SiHa/Mock细胞中无表达。3组肿瘤细胞体外生长曲线无统计学差异,P>0.05。SiHa/IDO细胞存活的百分比高于其他2组对照(SiHa和SiHa/Mock)细胞,P<0.05。结论 IDO对宫颈癌细胞体外生长速度无影响,但可抑制宫颈癌细胞SiHa对NK细胞杀伤作用的敏感性。因此,IDO不仅可以作为宫颈癌判断预后的指标,同时也可以作为宫颈癌基因治疗的潜在新靶点。; 王冬冬霍乃晨王晓黎张淑兰; 关键词：IDO 子宫肿瘤

遗传性LCAT缺陷症与动脉粥样硬化被引量：2: 2012年; 卵磷脂:胆固醇酰基转移酶(lecithin:cholesterol acyltransferase,LCAT)参与胆固醇酯的合成并在高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)的代谢中起重要作用。遗传性LCAT缺陷症是一种以低HDL-胆固醇(HDL-C)为特点的罕见遗传疾病。近年来,LCAT在HDL-C代谢中以及在动脉粥样硬化发生和发展中的作用逐渐被本领域研究者所关注。本文就LCAT缺陷症的遗传学和生化学特点做一综述,重点阐述为何尽管HDL-C水平明显减低,LCAT突变携带者却并未发生早期动脉粥样硬化。; 王晓黎曹艳丽张锦; 关键词：高密度脂蛋白动脉粥样硬化

NK4基因转染对裸鼠卵巢癌腹水瘤生长影响及其机制的探讨: 2012年; 目的在人卵巢癌细胞SKOV-3中转染NK4cDNA片段,研究NK4在裸鼠体内对人卵巢癌的治疗作用。方法 NK4和荧光霉素(luciferase)表达质粒分别转染人卵巢癌细胞SKOV-3,稳定转染后,得到SKOV-3/NK4细胞和对照(SKOV-3/LUC)细胞。检测NK4在细胞培养基中的表达情况以及经不同培养基(SKOV-3、SKOV-3/LUC和SKOV-3/NK4培养基上清)培养后SKOV-3细胞中c-Met和磷酸化-c-Met的表达,检测三组肿瘤细胞(SKOV-3/LUC和SKOV-3/NK4)体外生长速度,建立裸鼠卵巢癌腹水瘤模型,用Kaplan-Meier方法比较SKOV-3/LUC和SKOV-3/NK4细胞接种形成腹水瘤的裸鼠的累积生存率的差异。结果在SKOV-3/NK4培养基中有NK4蛋白表达,对照(SKOV-3和SKOV-3/LUC)细胞中无表达。磷酸化-c-Met在SKOV-3/NK4培养基培养的SKOV-3细胞中被抑制,而在对照(SKOV-3和SKOV-3/LUC)细胞培养基培养的SKOV-3细胞中正常表达。c-Met表达在各组差异无统计学意义。三种细胞体外生长曲线比较差异无统计学意义(P>0.05)。腹腔内接种SKOV-3/LUC细胞的裸鼠,均产生腹腔内种植肿瘤伴腹水形成,于50 d内相继死亡,而接种SKOV-3/NK4细胞的裸鼠生存期均大于70 d,差异有统计学意义(P<0.01)。结论SKOV-3/NK4细胞在培养基中大量分泌NK4蛋白,NK4能抑制人卵巢癌细胞c-Met受体磷酸化。在裸鼠体内NK4通过抗血管生成作用抑制卵巢癌细胞腹腔内种植瘤的生长和腹水形成,提高累积生存率,改善预后。NK4可作为卵巢癌基因治疗的新方法。; 王冬冬王晓黎霍乃晨蔡峰陈英汉张淑兰; 关键词：卵巢癌 NK4 基因治疗

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辽宁省博士科研启动基金(20111108)

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