公共文化服务平台

共 5 条记录，以下是 1-5

全选清除导出

排序方式：

慢性髓细胞性白血病K562细胞适体的筛选与鉴定被引量：10: 2009年; 目的:筛选并鉴定出慢性髓细胞性白血病(CML)K562细胞的寡核苷酸适体.方法:体外合成长度为88个碱基的随机单链DNA(ssDNA)文库,采用生物素-链霉亲和素磁珠法制备次级文库,以正常人血液中提取的中性粒细胞为反筛细胞,利用指数富集的配基系统进化(SELEX)技术筛选出与CMLK562细胞特异结合的适体.将筛选得到的适体回收纯化后连接pGEM-T质粒载体,经蓝白筛选后,随机挑选24个克隆子进行序列测定.采用荧光标记引物法检测ssDNA文库与K562细胞的亲和力,并用Clustal 2.05和DNA sis V2.5软件对适体序列进行一级结构同源性分析和二级结构预测.结果:经过13轮循环筛选,CML K562细胞适体的A值从0.12上升到1.25,至第13轮A值无明显增高.一级结构分析无同源序列,但可分为6个家族,其中5个家族各自具有保守序列,家族6无保守序列.二级结构分析表明,适体形成的茎环、凸环结构可能是与K562细胞特异性结合的结构基础.结论:利用SELEX技术成功筛选出高亲和性的CML K562细胞适体.; 刘玲玲韩跃武祝凯华李真真韩亚萍路艳王春霞; 关键词：白血病髓样 K562细胞 SELEX 适体

抗白念珠菌人源性单链抗体库的构建及筛选被引量：4: 2009年; 目的构建多样性良好的抗白念珠菌人源性单链抗体库,筛选抗白念珠菌特异性的噬菌体抗体。方法从20份人外周血淋巴细胞(包括正常成年人5份、新生儿5份和白念珠菌感染恢复期患者10份)中提取总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增人抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,以重叠延伸PCR法将VH和VL拼接成scFv基因,克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,构建人源抗白念珠菌天然噬菌体抗体库,并从中筛选阳性克隆抗体。结果构建的人源性抗白念珠菌天然噬菌体抗体库库容为2.8×109,多样性良好。共筛选出18个阳性克隆。结论已成功构建了1个多样性良好的抗白念珠菌人源性噬菌体抗体库,为筛选有效治疗白念珠菌和耐药性白念珠菌感染的药物提供了条件。; 路艳韩跃武韩亚萍刘玲玲王春霞李真真; 关键词：白念珠菌单链抗体

牛乳铁蛋白素基因及其突变基因在大肠埃希菌中的融合表达: 2010年; 目的构建牛乳铁蛋白素基因(LfcinB)及牛乳铁蛋白素突变基因(mLfcinB)的表达载体,建立在大肠埃希菌中融合表达的方法。方法依据大肠埃希菌偏爱密码子设计LfcinB和mLfcinB,进行克隆扩增并测序,构建LfcinB和mLfcinB的融合表达载体并转化入大肠埃希菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,产物经谷胱甘肽-琼脂糖凝胶法纯化。结果成功构建了融合表达载体pGEX-4T-1-LfcinB和pGEX-4T-1-mLfcinB,表达载体转化大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导3 h后LfcinB和mLfcinB融合蛋白表达率约为30%,洗脱纯化后产物约为60%。聚丙烯酰氨凝胶电泳显示融合蛋白为29 kDa,主要以包涵体形式存在,谷胱甘肽-琼脂糖凝胶纯化后得到3.1 kDa的目的蛋白。结论LfcinB及其突变基因在大肠埃希菌中的融合表达可提高LfcinB的表达率。; 吴建军闵现华岳嘉刘喜平韩跃武; 关键词：大肠埃希菌

LfcinB突变基因在大肠杆菌中的融合表达及其活性测定: 2010年; 测定LfcinB突变基因(mLfcinB)在大肠杆菌中的融合表达及其表达产物的抗菌活性。对LfcinB基因突变后进行克隆并测定序列,mLfcinB基因融合表达载体构建后并在大肠杆菌中的表达,分离提纯表达物并测定其活性。结果显示,Lf-cinB突变基因克隆后表达产物在经SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝G250染色可在29kD处看到预期的融合蛋白条带;对照组空质粒pGEX-4T-1经相同条件诱导后表达的蛋白为26kD。通过抑菌试验发现其对金黄色葡萄球菌ATCC25938具有较强抗菌活性。表明mLfcinB基因表达物具有较强的抗菌作用。; 吴建军韩跃武刘凯张延英刘永琦; 关键词：抗菌

SELEX法体外筛选胃癌细胞适配子方法的建立被引量：11: 2009年; 目的:建立SELEX技术筛选胃癌细胞SGC-7901适配子的方法,并初步鉴定获得的SGC-7901细胞适配子。方法:体外合成全长88bp中间含52bp随机序列的ssDNA文库,通过优化PCR扩增条件,利用地高辛-抗地高辛抗体-碱性磷酸酶系统测定亲和力,经SELEX反复筛选获得胃癌SGC-7901细胞的特异性适配子。将最后一轮筛选产物克隆、测序并用相关软件分析适配子序列的一级结构和二级结构。结果:经12轮SELEX筛选,ssDNA文库与SGC-7901细胞的亲和力由0.16上升至1.14,表明特异性适配子得到逐步富集。22个克隆子测序,有4个序列完全一致,二级结构预测茎环可能是适配子与胃癌细胞作用的结构基础。结论:成功建立了SELEX技术体外筛选胃癌细胞SGC-7901高亲和性适配子的方法。; 李真真韩跃武刘玲玲韩亚萍路艳王春霞; 关键词：胃癌细胞 SELEX 适配子

全选清除导出

共1页<1>

甘肃省科技攻关计划(2GS064-A43-020-21)