国家重点基础研究发展计划(2001CB510004)
- 作品数：28 被引量：86H指数：7
- 相关作者：金伯泉朱立平刘音田云鞠吉雨更多>>
- 相关机构：第四军医大学中国医学科学院北京协和医学院第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 夹心ELISA检测可溶型LAIR-1方法的建立及其应用的研究被引量：11
- 2003年
- 为了探讨血清可溶型白细胞相关免疫球蛋白样受体 1 (sLAIR 1 )的水平与疾病的关系 ,用生物传感器鉴定了 3种抗LAIR 1分子胞膜外区mAb识别的表位 ,并应用 2种识别不同LAIR 1表位的mAb首次建立了检测sLAIR 1的夹心ELISA方法 ,其检测灵敏度达到 1 5 μg/L。以此方法检测了活化的人PBMC培养上清以及正常人和肾综合征出血热 (HFRS )患者血清中sLAIR 1的水平。在经PMA、PHA、LPS和抗CD3mAb活化的人PBMC细胞培养上清中检测到sLAIR 1。 2 4例正常人血清sLAIR 1的平均水平为 (6 2± 3 3) μg/L ,6 2例HFRS患者血清sLAIR 1的平均水平为 (4 7 2± 35 9) μg/L。证明体内和体外存在天然sLAIR 1。HFRS患者血清sLAIR 1水平明显升高。为进一步研究LAIR
- 薛江楠欧阳为明贾卫谢鑫刘京梅宁双飞户义宋朝君金伯泉
- 关键词：MAB夹心ELISALAIR-1HFRS
- 分化抗原gp42表达对B细胞株增殖和血清撤除致死的影响被引量：1
- 2003年
- 目的 研究分化抗原gp4 2表达对 3D5B细胞株功能的影响。方法 以生长曲线检测细胞的增殖 ,碘化丙啶 (PI)染色 ,DNA流式细胞仪分析细胞周期 ,Annexin Ⅴ PI染色检测细胞死亡 ,间接免疫荧光染色流式细胞仪分析CD分子的表达 ,用Fluo 3AM作探针激光共聚焦显微镜观察胞内Ca2 + 浓度的变化。结果 分化抗原gp4 2表达抑制的 3D5细胞生长明显加速 (P <0 .0 0 1) ,从S期进入G2 M期的比率明显增加。对血清撤除所致的死亡发生抵抗。分化抗原gp4 2表达抑制的 3D5细胞间的粘附消失 ,CD11c的表达明显减弱。在McAb 5D4的刺激下 ,3D5细胞胞内的Ca2 + 浓度随时间逐步增高。结论 分化抗原gp4 2表达抑制致使 3D5细胞生长加速 ,细胞间粘附消失。分化抗原gp4 2是一个信号传导分子。
- 汪燚刘音马凤蓉崔薇史耕先赵方萄朱立平
- 关键词：信号传导分子钙离子细胞增殖细胞死亡
- BCSC-1基因异位表达抑制鼻咽癌细胞的恶性生物学行为被引量：8
- 2007年
- 目的研究BCSC-1基因异位表达对人鼻咽癌细胞CNE-2L2恶性生物学行为的影响。方法RT-PCR扩增BCSC-1cDNA,分别构建原核重组表达载体pMAL-c2X-BCSC-1和真核重组表达载体pcDNA4/myc-HisA-BCSC-1。在原核细胞表达BCSC-1蛋白。用BCSC-1蛋白免疫新西兰白兔,制备BCSC-1抗血清。采用实时定量RT-PCR与用BCSC-1抗血清免疫荧光染色确认野生型CNE-2L2细胞的BCSC-1基因低表达。藉脂质体把pcDNA4/myc-HisA-BCSC-1转染入野生型CNE-2L2细胞。Westernblot检测BCSC-1基因在野生型CNE-2L2细胞异位表达。用体外培养中的生长曲线和集落生成检测细胞生长。接种细胞于裸鼠,定时测量肿瘤大小。小鼠肺做连续组织切片,观察肿瘤的肺转移。结果制备了BCSC-1抗血清。明确BCSC-1基因在野生型CNE-2L2细胞的表达极低。制备了BCSC-1基因异位表达的CNE-2L2细胞。与对照细胞(野生型CNE-2L2细胞和转染pcDNA4/myc-HisA的CNE-2L2细胞)相比,BCSC-1基因异位表达的CNE-2L2细胞在培养中的生长、集落生成、细胞的成瘤性生长和所长肿瘤的肺转移均明显抑制。结论BCSC-1基因异位表达对CNE-2L2细胞的恶性生物学行为有明显抑制作用。
- 陈双玲周异群田云鞠吉雨刘音朱立平
- 关键词：鼻咽癌
- 人Man2c1转基因小鼠模型的建立被引量：4
- 2006年
- 目的为在体内研究MAN2C1的生物学意义而建立转hMan2c1基因的小鼠。方法构建pIRES2-EGFP-hMan2c1重组表达载体,经体外转染实验鉴定转染的基因能在COS-7细胞表达后,注射入ICR小鼠受精卵,以制备转基因小鼠。用基因组PCR鉴定目的基因在宿主基因组DNA的整合。用RT-PCR和Western blot分析hMan2c1在转基因小鼠的表达。结果在116只原代小鼠中,有7只hMan2cl基因组PCR阳性。在所检测的20只F1代小鼠中,有9只hMan2c1基因组PCR阳性。在所检测的21只F2代小鼠中,有16只基因组PCR阳性。用鼠尾组织RT-PCR和Western blot检测hMan2c1基因表达,确定基因组PCR阳性的7个系中有4个系阳性。结论建立了4个稳定表达hMan2c1的转基因小鼠系,为深入研究MAN2C1的生物学意义打下了基础。
- 向志光蒋东东曲莉鞠吉雨周异群田云刘音张连峰朱立平
- 关键词：转基因小鼠
- 人CD226(PTA1)分子胞膜外区截短体真核表达载体的构建、表达及其识别结构域的分析被引量：1
- 2003年
- 目的 确定一套CD2 2 6单克隆抗体 (McAb)识别CD2 2 6分子胞膜外区结构域的部位。方法 应用计算机软件分析CD2 2 6分子蛋白质序列疏水性 ,确定其亲水性区域。采用PCR方法扩增CD2 2 6分子基因序列 ,分别缺失相应亲水性区域 ,构建CD2 2 6截短体重组真核细胞表达载体pcDNA3 PTA1T1和pcDNA3 PTA1T2。测序正确后 ,转染COS7细胞 ,抗CD2 2 6分子多克隆抗体间接免疫荧光染色 ,流式细胞术检测CD2 2 6分子截短体的表达。表达成功后 ,采用间接免疫荧光染色和流式细胞术分析 ,用一套CD2 2 6McAb检测与截短突变体的免疫反应性 ,从而确定CD2 2 6McAb识别CD2 2 6分子结构域的部位。结果 PCR扩增出CD2 2 6分子相应目的片段序列 ,定向克隆入pcDNA3真核表达载体 ,DNA序列测定正确。转染COS7细胞后 ,流式细胞术检测CD2 2 6截短体分子有较高水平的表达。CD2 2 6McAbLeoA1、NewE1和FMU1～ 7均可识别CD2 2 6全长分子 ;LeoA1、NewE1、FMU1、FMU2、FMU4和FMU5与截短突变体PTA1T1和PTA1T2均无反应性 ;FMU3可结合PTA1T1分子 ,不结合PTA1T2分子 ;FMU6和FMU7均可结合PTA1T1及PTA1T2分子。结论 CD2 2 6McAbLeoA1、NewE1、FMU1、FMU2、FMU3、FMU4和FMU5识别CD2 2 6分子胞膜外区D1结构域 ,其中FMU3识别的位点位于V1和V2环之间 ;FMU6?
- 贾卫刘雪松张新海朱勇张贇李琦杨琨欧阳为明宁双飞金伯泉
- 关键词：CD226PTA1基因表达
- 腺病毒介导siCD44实验性治疗人CNE-2L2鼻咽癌被引量：1
- 2007年
- 目的探讨用siCD44治疗实体瘤的可能性。方法以高表达CD44的人鼻咽癌细胞CNE-2L2为研究对象,用软琼脂集落形成实验和细胞接种裸鼠后成瘤性生长及肿瘤肺转移检测细胞恶性生物学行为。构建Ad5-siCD44,用293细胞包装产生病毒。接种CNE-2L2细胞于裸鼠皮下,待肿瘤长到50～100mm3大小,瘤体内注射Ad5-siCD44,以注射PBS或Ad5-egfp为对照,2周后比较肿瘤的大小和重量。结果CD44表达抑制致细胞的恶性生物学行为明显受抑。瘤体内注射PBS、Ad5-egfp和Ad5-siCD442周后,肿瘤的平均体积分别为(3.139±0.850)、(3.612±0.888)和(1.512±0.742)cm3,实验组与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。3组的平均瘤重分别为(2.28±0.73)、(1.83±0.26)和(1.20±0.64)g,实验组与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。结论瘤体内注射Ad5-siCD44对CD44高表达的鼻咽癌细胞CNE-2L2所生成的肿瘤有一定治疗作用。
- 鞠吉雨时岩周异群田云沈濂刘音朱立平
- 关键词：鼻咽癌集落形成基因治疗
- 含3C蛋白酶切位点的人CD226胞膜外区Ig融合蛋白的真核表达及应用被引量：2
- 2003年
- 目的 :构建含 3C蛋白酶酶切位点的人CD2 2 6 (PTA1)分子胞膜外区Ig融合蛋白编码基因的真核表达载体 ,并进行表达和初步鉴定。方法 :将人CD2 2 6分子的胞膜外区基因 ,克隆入含 3C蛋白酶靶序列的Ig真核表达载体 p 3C Ig中。测序证实后 ,转染COS7细胞并进行瞬时表达。表达产物经亲和层析柱纯化 ,并通过免疫荧光染色及 3C蛋白酶酶切反应进行鉴定。结果 :经表达和纯化获得CD2 2 6胞膜外区的Ig融合蛋白。该融合蛋白可与表达于ECV30 4细胞表面的CD2 2 6配体有效结合。同时 ,融合蛋白的Fc段亦经 3C蛋白酶切除 ,从而获得CD2 2 6胞膜外区的真核表达分子。结论 :成功地获得了含有 3C蛋白酶酶切位点的人CD2 2 6分子胞膜外区Ig真核表达产物 ,为进一步对CD2 2 6分子进行结构和功能研究 。
- 张新海杨琨贾卫欧阳为明刘莹许晓光李琦金伯泉
- 关键词：真核表达融合蛋白
- CD54和LFA-1的相互作用在6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的JurkatT细胞的黏附性增强中的作用被引量：2
- 2005年
- 目的研究CD54和LFA-1的相互作用在6A8α甘露糖苷酶表达抑制的Jurkat细胞(AS)的黏附性增强中的作用。方法用细胞凝集试验确证AS细胞间黏附的增强,用细胞与细胞间黏附分子1人IgG的Fc片段(ICAM1Fc)的黏附试验和阻断性抗CD11a抗体的阻断试验研究CD54LFA1的作用,用单克隆抗体MEM148检测AS细胞LFA-1亲和力的变化,用单克隆抗体NKIL16检测AS细胞LFA1亲合力的变化,用鬼笔环肽染色细胞骨架,用JurkatRaji细胞间的作用作模型研究6A8α甘露糖苷酶表达抑制对T和B细胞间黏附的影响,用ConA结合试验检测细胞中蛋白质N糖基化的变化。结果(1)AS细胞间的黏附性增强主要与CD54及CD11a表达的增强相关,也与LFA-1亲和力的增高相关;(2)AS细胞的细胞骨架发生重排;(3)AS细胞与Raji细胞间的黏附也增强;(4)ConA与AS细胞的结合增强。结论CD54和LFA-1的相互作用在ASJurkatT细胞的黏附性增强中起重要作用。细胞骨架重排也可能起作用。AS细胞的蛋白质发生了N-糖基化修饰。
- 曲莉刘荣刘音朱立平
- 关键词：LFA-1CD54相互作用黏附性CD11A细胞骨架重排
- 一种筛选中和活性抗人TNF单抗细胞模型的建立及其应用被引量：1
- 2005年
- 目的:建立一种筛选中和活性抗人肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF)mAb细胞模型,并从一组抗人TNFmAb中筛选出具有相对较高中和活性的mAb.方法:用含100mL/LFCS的DMEM细胞培养液将L929细胞的浓度调整到1×108/L,按每孔100μL,加入至96孔细胞培养板中,培养过夜.弃细胞培养上清后,将200μL的实验液转入培养板中,继续培养16h.活细胞用结晶紫染色,脱色后,于570nm波长测定A值.结果:浓度在0.3～0.5mg/L范围内的放线菌素D(antinomycinD,ActD)对L929细胞的生长抑制作用比较稳定;TNF的浓度高于20kU/L时,能够使95%以上的实验细胞发生凋亡;浓度在12.5～50.0μg/L范围的mAb对TNF的中和作用具有明显的剂量依赖关系;在ActD,TNF和mAb的浓度分别为0.35mg/L,20kU/L和25.0μg/L的条件下,发现D2的中和活性与阳性对照抗体无显著性差异(P>0.05),但高于阴性对照抗体,E6,D12,E11(P<0.01).与阴性对照抗体比较,E6,E11也具有一定的中和活性(P<0.05),而D12无中和活性(P>0.05).结论:本研究建立的mAb抑制TNF诱导L929细胞凋亡的细胞模型可用于筛选中和活性抗TNFmAb;D2的中和活性相对较高,可作为构建治疗性嵌合抗体的制剂.
- 朱参胜刘雪松金伯泉
- 关键词：肿瘤坏死因子单克隆抗体中和活性细胞模型
- 与鼻咽癌细胞CNE-2L2恶性生物学行为相关的蛋白质被引量：11
- 2007年
- 目的寻找与人鼻咽癌细胞CNE-2L2恶性生物学行为相关的蛋白质。方法用蛋白质组学分析高(W)和低(AS)恶性生物学行为的CNE-2L2细胞间蛋白质表达的差异,用实时定量PCR和免疫荧光染色流式细胞术对差异表达的蛋白质做确认,用siRNA抑制细胞中目的基因的表达,Western blot确认目的基因表达的抑制,细胞接种裸鼠的肿瘤生长实验。结果MOLDI-TOF MS分析见12个明显的差异表达蛋白质点。它们是:抗氧化蛋白Peroxiredoxin 2,异构型b;原肌蛋白3;II型TPM4-ALK融合癌蛋白;MLL蛋白;CD44;视网膜母细胞结合蛋白7;微管蛋白,β多肽;ATP合成酶,转H+作用的线粒体F1复合物,β多肽;波形蛋白;D21S2056E蛋白;蛋白酶体(prosome,macropain)26S subunit,non-ATPase,4;ENO1蛋白。前4个在AS细胞高表达,后8个在AS细胞低表达。对积分最高的7个蛋白质的差异表达做了肯定的验证。用siCD44抑制W细胞的CD44表达后,细胞接种裸鼠的成瘤性生长明显抑制。结论蛋白质组学分析见AS细胞与W细胞间有12个差异表达蛋白质,CD44表达减弱与AS细胞的恶性行为减弱相关。
- 周异群时岩田云鞠吉雨陈双玲刘音朱立平
- 关键词：蛋白质组学鼻咽癌细胞恶性行为CD44
